【摘要】：目的:探索大鼠陰莖海綿體內皮細胞(CCECs)分離、純化和培養(yǎng)的方法,觀察其生長特性,并為勃起功能障礙的研究提供種子細胞。方法:采用0.1%彈性蛋白酶消化SD大鼠陰莖海綿體組織,分離原代SD大鼠CCECs,然后采用免疫磁珠純化,進一步擴增,利用克隆環(huán)篩選出單克隆CCECs,并觀察其形態(tài)及增殖特性,免疫熒光染色鑒定CCECs血管假性血友病因子(VWF)、免疫組化染色鑒定CCECs CD31分子,流式細胞儀測定CCECs純度,CCK-8法檢測CCECs細胞增殖并繪制生長曲線。結果:經克隆環(huán)篩選純化培養(yǎng)1周后倒置相差顯微鏡下觀察到CCECs生長匯合呈鋪路石樣改變。生長曲線顯示CCECs最初1~2 d處于潛伏期,生長緩慢,3~4 d處于對數生長期,生長迅速,第6天進入平臺期。免疫熒光染色檢測CCECs VWF呈陽性,熒光顯微鏡下胞質內可見大量綠色熒光。免疫組化檢測CCECs CD31分子呈陽性,倒置顯微鏡下胞質內可見大量黃褐色顆粒。流式細胞儀檢測經磁珠聯(lián)合克隆環(huán)純化VWF標記的CCECs細胞陽性率可達(91.9±3.75)%。結論:免疫磁珠聯(lián)合克隆環(huán)純化法可成功培養(yǎng)出純度高SD大鼠CCECs,并可在內皮細胞培養(yǎng)液中穩(wěn)定生長及傳代。
[Abstract]:Aim: to explore the method of isolation, purification and culture of (CCECs) from rat cavernous endothelial cells, observe its growth characteristics, and provide seed cells for the study of erectile dysfunction. Methods: the penile cavernous tissue of SD rats was digested with 0.1% elastase. The primary SD rat CCECs, was isolated and purified by immunomagnetic beads. The monoclonal CCECs, was screened by clone ring. The morphology and proliferation characteristics were observed, the CCECs CD31 molecules were identified by (VWF), immunohistochemical staining of CCECs angiophilic factor, the purity of CCECs was detected by flow cytometry, the proliferation of CCECs cells was detected by CCK-8 method and the growth curve was plotted. Results: the CCECs growth confluence was found to be a paving stone change under inverted phase contrast microscope after 1 week of culture by clone ring screening and purification. The growth curve showed that the CCECs was in the incubation period for 1 ~ 2 days, and the growth was slow, while for 3 ~ 4 days it was in the logarithmic growth period, and it grew rapidly. On the 6th day, the CCECs entered the plateau stage. Immunofluorescence staining showed that CCECs VWF was positive, and a large amount of green fluorescence could be seen in cytoplasm under fluorescence microscope. Immunohistochemical staining showed that CCECs CD31 molecules were positive, and a large number of yellow brown granules could be seen in the cytoplasm under inverted microscope. The positive rate of VWF labeled CCECs cells was (91.9 鹵3.75)% detected by flow cytometry. Conclusion: high purity SD rat CCECs, can be successfully cultured by immunomagnetic beads combined with clone ring purification method, and can grow and subculture stably in endothelial cell culture medium.
【作者單位】： 西南醫(yī)科大學附屬醫(yī)院泌尿外科;
【基金】：四川省科技廳基金(14JC0803) 四川省教育廳基金(15ZA0164) 四川省人力資源和社會保障廳回國人員科研基金(川人社辦發(fā)[2016]64號)~~
【分類號】：R698

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 張作慧;陳晨;陳浩;崔桂云;花放;;一種高純度小鼠原代腦微血管內皮細胞的分離培養(yǎng)方法[J];中國組織工程研究;2016年51期

2 王廣宇;王雨;朱艷萍;康煜冬;王伏聲;丁毅;董雨;徐旭英;;人皮膚微血管內皮細胞的分離、培養(yǎng)及鑒定[J];中國組織工程研究;2016年51期

3 周玲萍;馮成;湯雪斌;徐紅蕾;;免疫磁珠分選法原代培養(yǎng)小鼠肺微血管內皮細胞[J];溫州醫(yī)科大學學報;2016年08期

4 馬瑞杰;李妍;孫曉梅;胡竹林;;改良揭膜消化法分離培養(yǎng)恒河猴角膜內皮細胞[J];眼科新進展;2016年07期

5 張守瑞;李彤;;大鼠腦動脈內皮細胞培養(yǎng)[J];神經解剖學雜志;2016年03期

6 閻江洪;吳倩怡;羅素新;夏勇;;人臍靜脈內皮細胞原代培養(yǎng)及鑒定[J];新疆醫(yī)科大學學報;2016年05期

7 肖紫春;譚金海;周益;;兔主動脈血管內皮細胞原代改良提取法[J];中國組織工程研究;2016年07期

8 劉勇軍;王萍萍;馬婕;歐陽彬;陳娟;管向東;;改良大鼠肺微血管內皮細胞原代培養(yǎng)技術及細胞鑒定[J];中華損傷與修復雜志(電子版);2014年01期

9 熊志勇;姜曉兵;王旋;孫云;盧高方;趙洪洋;;原代大鼠腦毛細血管內皮細胞培養(yǎng)與鑒定[J];中國臨床神經外科雜志;2014年01期

10 周麗;常青;李自成;;人臍靜脈血內皮克隆形成細胞的分離培養(yǎng)與鑒定[J];中國醫(yī)學工程;2013年05期

【共引文獻】

相關期刊論文 前2條

1 張范波;姜睿;;改良免疫磁珠結合克隆法培養(yǎng)SD大鼠陰莖海綿體內皮細胞[J];中華男科學雜志;2017年06期

2 蔣玲;胡遠東;徐菲菲;王廷華;;大鼠肺微血管內皮細胞原代培養(yǎng)方法的改進[J];四川大學學報(醫(yī)學版);2016年05期

【二級參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 孫堯;何玉蘭;于曉龍;程燕;宋博毅;;體外構建血管化組織工程心肌[J];解剖學雜志;2015年03期

2 彭岳;李樹民;黎桂玉;馬靜;趙鐵建;;肝竇內皮細胞分離、培養(yǎng)與鑒定的研究概況[J];世界華人消化雜志;2015年05期

3 呂文良;徐晨光;張莎莎;楊佼;李娟梅;;肝竇內皮細胞的分離培養(yǎng)及體外生長規(guī)律的觀察[J];中華生物醫(yī)學工程雜志;2015年01期

4 殷杰;馬珍妮;趙小娟;阮長耿;;人外周血來源的過度生長內皮細胞的分離、培養(yǎng)及鑒定[J];中國實驗血液學雜志;2014年06期

5 秦蘇萍;李慧;李小翠;王曉天;湯仁仙;孫德旭;;CIA大鼠滑膜成纖維細胞的原代培養(yǎng)及鑒定[J];免疫學雜志;2014年12期

6 查雨鋒;張順;蘇航;劉亭;傅曉鐘;董永喜;王愛民;王永林;;一種高純度和高活力的大鼠腦微血管內皮細胞的提取及原代培養(yǎng)方法[J];中國藥理學通報;2014年11期

7 Xiao-Li Tian;Yang Li;;Endothelial Cell Senescence and Age-Related Vascular Diseases[J];Journal of Genetics and Genomics;2014年09期

8 侯偉;魏紅玉;羅彥彥;許淑茹;陸俊佳;暢榮妮;舒?zhèn)?;大鼠乳鼠腹主動脈血管內皮細胞的培養(yǎng)與鑒定[J];廣西醫(yī)科大學學報;2014年04期

9 賈建桃;張慧英;王黎敏;趙中夫;劉明社;來麗娜;盧彥珍;;肺微血管內皮細胞原代培養(yǎng)方法的建立[J];細胞與分子免疫學雜志;2014年07期

10 張慧麗;杜培麗;方元龍;張鏡;何玉甜;孫斌;肖雪;孫雯;周燕媚;陳敦金;;人胎盤微血管內皮細胞的分離培養(yǎng)及鑒定[J];中國組織工程研究;2014年11期

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 鄭建箏;高聰;謝富華;蒲蜀湘;陳盛強;;SD大鼠實驗性變態(tài)反應性腦脊髓炎模型的建立[J];實用診斷與治療雜志;2006年07期

2 馮建勛;李紅艷;田建偉;;飲食中晚期糖基化終產物對健康SD大鼠腎臟的影響[J];中國臨床康復;2006年36期

3 呂伯東;年建華;黃曉軍;張士更;耿強;陳剛;陳世濤;;低氧對SD大鼠陰莖海綿體平滑肌纖維化的影響[J];中華男科學雜志;2011年02期

4 陳衛(wèi)偉;楊留才;潘施文;李仕紅;徐紅濤;;線栓法制備SD大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型[J];中國組織工程研究與臨床康復;2011年50期

5 張冬冬;張軍;;小腸結腸炎耶爾森氏菌和高碘對SD大鼠的影響[J];濱州醫(yī)學院學報;2012年01期

6 唐軍;鐘琳;姚裕家;陳娟;;SD大鼠少突膠質前體細胞系的分離、培養(yǎng)及鑒定[J];實用兒科臨床雜志;2006年23期

7 李建國;孟壯志;劉海英;田耕;;降鈣素基因相關肽在受損SD大鼠面神經運動神經元中的表達與定位[J];內蒙古民族大學學報(自然科學版);2008年02期

8 趙振江;趙瑞斌;姚澤忠;;建立幼齡SD大鼠肺炎克雷伯桿菌肺炎模型的一種新方法[J];中國現(xiàn)代醫(yī)生;2009年05期

9 王雪瑩;黃紹平;陳小聰;姜永生;;SD大鼠腦皮層星形膠質細胞的原代培養(yǎng)及純化方法改良[J];陜西醫(yī)學雜志;2009年09期

10 王寒;趙根尚;周玉陽;高峰;張正升;何攀;李明;;SD大鼠骨髓間充質干細胞分離提純及鑒定[J];中華實用診斷與治療雜志;2012年05期

相關會議論文 前10條

1 呂伯東;;低氧對SD大鼠陰莖海綿體平滑肌細胞凋亡的影響[A];2009年浙江省男科、泌尿外科學術年會論文匯編[C];2009年

2 呂伯東;;低氧對SD大鼠陰莖海綿體平滑肌細胞纖維化影響[A];2009年浙江省男科、泌尿外科學術年會論文匯編[C];2009年

3 戴旭鋒;林冰;李英姿;劉曉玲;;正常SD大鼠暗適應視網膜電圖及光強-反應函數的研究[A];2006年浙江省眼科學術會議論文集[C];2006年

4 路浩;張浩;趙寶玉;韋冬梅;王占新;宋巖巖;;氯化汞對SD大鼠血液生理生化指標的影響[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物毒物學分會2009年學術研討會論文集[C];2009年

5 周欣榮;原慧萍;王雅;馬春楊;李鴻翼;;不同強度微波輻射對SD大鼠視網膜神經節(jié)細胞凋亡的影響[A];中華醫(yī)學會第十二屆全國眼科學術大會論文匯編[C];2007年

6 沈陽;章捷;單治;吳鼎宇;王瑞蘭;;不同補液對急性呼吸窘迫綜合征SD大鼠凝血功能的影響[A];中華醫(yī)學會第五次全國重癥醫(yī)學大會論文匯編[C];2011年

7 皮斯妮;譚孟群;;不同年齡SD大鼠骨髓間充質干細胞生物學特性的研究[A];湖南省生理科學會2013年度學術年會論文摘要匯編[C];2013年

8 皮斯妮;譚孟群;;不同年齡SD大鼠骨髓間充質干細胞生物學特性的研究[A];湖南省生理科學會2013年度學術年會論文摘要匯編[C];2013年

9 宋哲;黎曉新;于文貞;;可變高氧環(huán)境下SD大鼠形成早產兒視網膜病變模型實驗研究[A];中國眼底病論壇·全國眼底病專題學術研討會論文匯編[C];2008年

10 栗炳南;王峰;宋柳江;王冉;田晶;薛金鳳;譚孟群;;SD大鼠骨髓間充質干細胞的分離培養(yǎng)鑒定及體外向血管內皮分化的的研究[A];湖南省生理科學會2008年度學術年會論文摘要匯編[C];2008年

相關重要報紙文章 前1條

1 王世煥;利用SD大鼠培育人用皮膚[N];醫(yī)藥經濟報;2001年

相關博士學位論文 前10條

1 羅玉衡;抑制消化道產甲烷古菌對SD大鼠脂質代謝的影響[D];南京農業(yè)大學;2010年

2 楊文慧;心臟震波誘導SD大鼠梗死周圍心肌冠脈微血管動脈生成及其分子機制研究[D];昆明醫(yī)科大學;2016年

3 羅金泰;miRNA-145對SD大鼠陰莖海綿體平滑肌細胞表型轉化的影響[D];南方醫(yī)科大學;2016年

4 張海江;IL-23/IL-17通路介導SD大鼠視網膜缺血再灌注損傷的作用機制及姜黃素的干預研究[D];武漢大學;2015年

5 趙瑞斌;高氧誘導R0P模型SD大鼠中循環(huán)miRNAs檢測分析及相關驗證研究[D];東南大學;2015年

6 趙紅曄;隱丹參酮對SD大鼠重要大腦細胞網絡模型氧糖剝奪/復氧糖損傷的干預研究[D];大連醫(yī)科大學;2017年

7 周軍;介入硬化劑聚桂醇治療SD大鼠子宮內膜異位囊腫的實驗研究[D];武漢大學;2014年

8 張姍姍;姜黃素對口腔黏膜下纖維性變SD大鼠模型抗纖維化作用及機制的研究[D];中南大學;2012年

9 馬志飛;“中低溫低流量”腦損傷SD大鼠模型的制作以及缺血預適應腦保護作用機制的研究[D];南京醫(yī)科大學;2014年

10 陳會強;SD大鼠主動脈瓣間質細胞自發(fā)鈣化模型的建立及阿托伐他汀和氨氯地平的影響[D];河北醫(yī)科大學;2012年

相關碩士學位論文 前10條

1 謝金蘭;硫氫化鈉對SD大鼠骨癌性疼痛影響的實驗研究[D];福建醫(yī)科大學;2015年

2 李翠;外源性內脂素對SD大鼠子宮內膜容受性的影響[D];河北聯(lián)合大學;2014年

3 顧國曉;早期嗅覺剝奪對SD大鼠海馬的影響的研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

4 郭志剛;姜黃素對博來霉素致SD大鼠急性肺損傷中TNF-α和ICAM-1表達的影響[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學院;2015年

5 劉永杰;miR-21對SD大鼠骨髓間充質干細胞治療心肌梗死的影響實驗研究[D];蘇州大學;2015年

6 張峰;推拿對SD大鼠肌腱末端病模型bFGF的影響[D];南京中醫(yī)藥大學;2015年

7 宋麗媛;胰腺脂肪浸潤對營養(yǎng)性肥胖SD大鼠胰島素分泌的影響[D];山東大學;2015年

8 羅翠蓮;藥物保留灌腸防治SD大鼠急性放射性直腸炎預防慢性放射性直腸炎的研究[D];四川醫(yī)科大學;2015年

9 林艷云;射頻電磁輻射對雄性SD大鼠和TM3細胞睪酮分泌的影響研究[D];第四軍醫(yī)大學;2015年

10 劉思思;ARFI破壞微泡增強Fe_3O_4納米粒子在SD大鼠皮下移植瘤靶向遞送的實驗研究[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

，

本文編號：2423675