【摘要】：目的隨著經濟的發(fā)展和人們生活方式的改變,我國慢性腎臟病(CKD)的發(fā)病率呈逐年上升趨勢,CKD大多起病隱匿,且目前尚缺乏早期診斷和治療方法,部分患者將進展至終末期腎臟疾病(ESRD)。腹膜透析(PD)是ESRD的主要替代治療方法之一。然而,腹膜長期暴露于非生理性的腹膜透析液會造成腹膜間皮細胞(PMCs)層損傷、脫落、表型改變、新血管生成增加、細胞外基質沉積和炎細胞浸潤,最終導致腹膜纖維化(PF)。PF迄今仍然是一個世界性的難題,尚缺乏有效的防治對策,治療上主要以預防為主,是導致ESRD患者被迫中斷長期腹膜透析的最主要因素,制約了腹膜透析的應用和發(fā)展。因此,如何延緩、阻斷PF進程,已成為本研究領域的一個亟待解決的重要問題。間充質干細胞(MSCs)來源于發(fā)育早期的中胚層和外胚層,屬于多能干細胞,在特定的誘導條件下,可修復器官的損傷及治療器官纖維化。本實驗室旨在建立穩(wěn)定的、標準化的人臍帶間充質干細胞(hUC-MSCs)體外培養(yǎng)方法,并且在能夠保證hUC-MSCs長期培養(yǎng)的基礎上,用于PF的修復研究并對修復機制進行探討,為hUC-MSCs治療PD相關PF奠定理論基礎,為干細胞在腎臟病領域的應用開拓積累經驗。對象與方法取新鮮臍帶組織,以組織貼塊法對臍帶中的hUC-MSCs進行分離、培養(yǎng)、傳代,并誘導其向脂肪細胞及成骨細胞分化,以流式細胞儀鑒定所分離的細胞為hUC-MSCs。以甲基乙二醛(MGO)加入2.5%腹膜透析液配置成20mmol/L的混合液,按照10ml/天連續(xù)2周腹腔注射上述混合液復制大鼠PF模型。以2×106個hUC-MSCs沿大鼠尾靜脈緩慢一次性推入,對PF進行干預。2周后,進行腹膜功能評價,收集腹膜組織進行HE、天狼星紅染色,免疫組化觀察BMP-7、TGF-β1、E-cadherin、α-SMA、Snail1蛋白在腹膜組織的表達變化。對大鼠腹膜間皮細胞(RPMCs)進行原代培養(yǎng)、鑒定,以2.5 ng/ml TGF-β1處理間皮細胞,并用hUC-MSCs及hUC-MSCs條件培養(yǎng)基(h UC-MSCs-CM)進行干預,Western Blot方法檢測E-cadherin、α-SMA、pSmad2的蛋白表達變化,探討TGF-β1/Smad2通路在hUC-MSCs修復PF過程中所起的作用。結果本實驗以組織貼塊法成功分離、培養(yǎng)了hUC-MSCs。流式細胞儀檢測細胞表面標志物CD105、CD90高表達,分別為98.32%和99.19%,鑒定為hUC-MSCs。MGO對Wistar大鼠腹腔注射兩周后,免疫組化分析顯示,腹膜組織Snail1、TGF-β1、α-SMA表達明顯上調,BMP-7、E-cadherin表達明顯下調,經尾靜脈注射hUC-MSCs的大鼠,Snail1、TGF-β1、α-SMA表達明顯下調,BMP-7、E-cadherin表達明顯上調。以TGF-β1刺激RPMCs后,發(fā)現(xiàn)α-SMA、pSmad2的蛋白表達明顯上調,E-cadherin明顯下調,hUC-MSCs及hUC-MSCs-CM進行干預后,α-SMA、pSmad2的蛋白表達明顯下調,E-cadherin明顯上調。結論我們利用組織貼塊法自正常產婦臍帶中成功分離出了hUC-MSCs。hUC-MSCs可以抑制MGO誘導的大鼠PF的發(fā)生,此作用可能是通過下調BMP-7,改善腹膜組織PMCs的上皮間充質轉分化(EMT)實現(xiàn)的。體外實驗,hUC-MSCs及hUC-MSCs-CM可以有效抑制TGF-β1誘導的RPMCs的EMT,此作用是hUC-MSCs通過旁分泌機制抑制RPMCs TGF-β1/Smad2信號通路活性實現(xiàn)的。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R692.5;R459.5

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10 孫e，

本文編號：2418927