【摘要】：研究目的糖尿病腎病(Diabetic Nephropathy,DN)是2型糖尿病(Type 2 Diabetes Mellitus,T2DM)患者常見的并發(fā)癥之一。尿微量白蛋白(microalbuminuria,m ALB)作為DN臨床診斷的重要指標(biāo),在DN發(fā)病早期準(zhǔn)確檢測m ALB,對DN的治療和預(yù)后具有重要意義。目前臨床上檢測m ALB的常用方法為免疫透射比濁法和放射免疫法。鑒于免疫透射比濁法的m ALB檢測靈敏度較差,會造成早期DN的漏檢;而放射免疫法存在放射性污染,因此尋求準(zhǔn)確、安全檢測m ALB的方法具有重要臨床應(yīng)用價值。近年來,毛細管電泳(Capillary Electrophoresis,CE)技術(shù)逐漸被應(yīng)用于血清和尿液中微量元素的檢測。本論文研究CE技術(shù)用在檢測DN患者尿液中m ALB濃度的效果,并提出一種基于吸光度峰高和峰面積去測定尿樣中m ALB濃度的雙因素回歸模型,以期提高測量尿液中m ALB濃度的準(zhǔn)確度,為臨床DN的早期診斷提供技術(shù)支持。研究方法1.實驗樣本分組:4組受試者尿樣:正常對照組(Control)32例、單純糖尿病組(DM)36例、早期糖尿病腎病組(DN-1)19例、臨床糖尿病腎病組(DN-2)22例。樣本均來自天津醫(yī)科大學(xué)代謝病醫(yī)院,年齡范圍為35~75歲。DM、DN-1、DN-2組以免疫透射比濁法檢測結(jié)果進行分組。2.尿樣處理:將尿樣經(jīng)離心后取上清液,并按1:1000比例向上清液中加入苯甲基磺酰氟(PMSF),置于-80℃低溫保存。3.CE測試參數(shù)確定:制備m ALB標(biāo)準(zhǔn)溶液,采用控制變量法,確定CE檢測m ALB時所采用的最佳緩沖液的濃度、p H值,毛細管電泳的波長、電壓,以及添加劑(十二烷基硫酸鈉)的濃度值。4.實驗數(shù)據(jù)獲取:在CE最佳實驗條件下,測量6種濃度m ALB標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度峰高和峰面積。5.分別建立三類線性回歸模型:吸光度峰高與m ALB濃度的線性回歸模型;吸光度峰面積與m ALB濃度的線性回歸模型;吸光度峰高、峰面積與m ALB濃度的二元線性回歸模型。6.三類回歸模型的檢驗與評價:對三類回歸模型分別進行F檢驗和復(fù)相關(guān)系數(shù)檢驗,評價模型的顯著性和復(fù)相關(guān)性,確定優(yōu)化回歸模型。7.應(yīng)用優(yōu)化的回歸模型測定4組尿樣的m ALB濃度:在CE最佳實驗條件下,基于m ALB吸光度峰高和峰面積,應(yīng)用優(yōu)化回歸模型分別測定4組尿樣的m ALB濃度。8.統(tǒng)計學(xué)處理:應(yīng)用方差分析(ANOVA)方法對4組尿樣m ALB濃度進行統(tǒng)計比較,根據(jù)尿樣中m ALB濃度將受試者重新入組,分析與免疫透射比濁法入組的差異。研究結(jié)果1.基于實驗數(shù)據(jù)確定三類回歸模型:(1)吸光度峰高-m ALB濃度的線性回歸模型:y=3.34 x1-4.94,F檢驗:置信度P=0.001;復(fù)相關(guān)系數(shù)檢驗:R=0.9979;擬合殘差為0.0042(2)吸光度峰面積-m ALB濃度的回歸模型:y=0.12 x2+17.5F檢驗:置信度P=0.001;復(fù)相關(guān)系數(shù)檢驗:R=0.9983;擬合殘差為0.0033(3)吸光度峰高、峰面積與m ALB濃度的二元線性回歸模型:y=1.05 x1+0.08 x2+6.76F檢驗:置信度P=0.001;復(fù)相關(guān)系數(shù)檢驗:R=0.9992;擬合殘差為0.0017二元線性回歸模型的復(fù)相關(guān)系數(shù)R值明顯大于一元線性回歸模型,選取二元線性回歸模型為優(yōu)化模型測定4組m ALB濃度。2.應(yīng)用優(yōu)化線性回歸模型測定4組m ALB濃度:應(yīng)用優(yōu)化的吸光度峰高、峰面積與m ALB二元線性回歸模型,測定各組尿樣中m ALB濃度:Control組為12.18±0.33mg/L;DM組為14.23±0.40mg/L;DN-1組為107.07±8.30mg/L;DN-2組為494.60±50.01mg/L,可見,DM組與Control組無統(tǒng)計學(xué)差異;DN-1組顯著高于Control組和DM組;DN-2組顯著高于其他三組。3.應(yīng)用優(yōu)化的二元線性回歸模型測定4組尿樣中m ALB濃度,根據(jù)m ALB濃度分組,結(jié)果顯示:DM組中有兩例患者尿樣中m ALB濃度高于DN-1入組標(biāo)準(zhǔn)20mg/L,這兩例患者按m ALB標(biāo)準(zhǔn)為早期DN(DN1);一例DN-1患者尿樣中m ALB濃度高于DN-2入組標(biāo)準(zhǔn)200mg/L,該患者按m ALB標(biāo)準(zhǔn)為臨床DN期(DN-2),以上結(jié)果提示應(yīng)用CE方法檢測尿樣m ALB濃度可能檢測出免疫透射比濁法漏檢的DN-1和DN-2組。研究結(jié)論1.應(yīng)用吸光度峰高、峰面積兩個因素建立的測定m ALB濃度的二元線性回歸模型,復(fù)相關(guān)系數(shù)R值優(yōu)于一元線性回歸模型,提示該二元線性回歸模型是測定m ALB濃度的優(yōu)化模型。2.應(yīng)用優(yōu)化二元線性回歸模型測定DM組和DN-1組尿液m ALB濃度差異顯著性高,應(yīng)用優(yōu)化二元線性回歸模型測定m ALB濃度能更準(zhǔn)確區(qū)別DM組和DN-1組,提示優(yōu)化模型后測定m ALB濃度在檢測DN早期靈敏度更高。3.應(yīng)用CE檢測4組尿樣,其結(jié)果優(yōu)于免疫透射比濁法對DN-1和DN-2組的檢出率:40例免疫透射比濁法為陰性的DM組中2例為早期DN(DN-1);用免疫比濁法檢測的27例早期DN(DN-1)中,1例由CE技術(shù)檢測為臨床DN期(DN-2),提示CE方法檢測m ALB濃度優(yōu)于免疫透射比濁法。
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【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R587.2;R692.9

【參考文獻】

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本文編號：2392264