【摘要】：腎細(xì)胞癌是腎臟惡性腫瘤最常見的類型,每年約有3%的新增癌癥患者是腎細(xì)胞癌患者。腎細(xì)胞癌的早期臨床表現(xiàn)多樣,缺乏特異的診斷技術(shù),約60%的腎細(xì)胞癌患者是在并未懷疑有泌尿系腫瘤的病人中偶然檢出的。腎細(xì)胞癌對(duì)傳統(tǒng)細(xì)胞毒性藥物和放療不敏感,雖然靶向藥物的應(yīng)用可改善部分轉(zhuǎn)移性腎細(xì)胞癌患者的生存,但其生存中值仍僅有40個(gè)月,五年生存率低于10%。而早期腎細(xì)胞癌可被手術(shù)治愈。因此,在腫瘤轉(zhuǎn)移前進(jìn)行腎細(xì)胞癌的早期診斷,及時(shí)監(jiān)測(cè)腫瘤進(jìn)展?fàn)顩r,變得尤為重要。精囊蛋白1(Sg1)是人類精液的重要組成部分,在精液液化過(guò)程中起著至關(guān)重要的作用。除了精囊,在人類氣管、胰腺、腎臟、前列腺、視網(wǎng)膜中亦有Sg1分布。既往研究表明,Sg1在數(shù)種惡性腫瘤中異常表達(dá),如白血病、小細(xì)胞肺癌、黑素瘤、前列腺癌等,與患者的腫瘤進(jìn)程或預(yù)后有關(guān)。因此我們推測(cè)Sg1可能在腎細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。本課題擬研究Sg1在腎細(xì)胞癌中的表達(dá)情況并分析其臨床意義,以分子生物學(xué)手段探究Sg1在腎細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中的作用,結(jié)果對(duì)于進(jìn)一步闡釋腎細(xì)胞癌的發(fā)病機(jī)制,篩選腎細(xì)胞癌的生物標(biāo)記物,以及對(duì)腎細(xì)胞癌患者實(shí)施個(gè)體化干預(yù)等方面具有重要的理論和實(shí)踐意義。第一部分Sg1在腎細(xì)胞癌中的表達(dá)和臨床意義目的:腎細(xì)胞癌的發(fā)病率逐年上升,目前僅有少量的生物標(biāo)記物可對(duì)腎細(xì)胞癌的診斷和預(yù)后做出預(yù)測(cè),我們研究了精囊蛋白Sg1在腎細(xì)胞癌患者中的表達(dá)和臨床意義。方法:采用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)24例明確診斷為腎細(xì)胞癌患者的腫瘤組織和癌旁組織中的Sg1表達(dá);以蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)T1-4期腎細(xì)胞癌患者組織中Sg1的蛋白水平;并以免疫組化檢測(cè)53例腎細(xì)胞癌標(biāo)本中的Sg1,對(duì)其進(jìn)行抗原定位,通過(guò)隨訪患者,結(jié)合患者的臨床指標(biāo),進(jìn)一步研究其臨床意義。結(jié)果:實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)顯示,與癌旁組織相比,腫瘤組織中的Sg1表達(dá)明顯降低(P0.01)。蛋白質(zhì)印跡進(jìn)一步證實(shí)Sg1在腫瘤中低表達(dá),且T3/T4期患者的Sg1水平顯著低于T1/T2期患者。在53例腫瘤組織中,有30例(57%)抗Sg1免疫組化染色呈陽(yáng)性,顯著低于對(duì)應(yīng)癌旁組織的全部陽(yáng)性(100%),Sg1表達(dá)量和腎細(xì)胞癌臨床分期呈負(fù)相關(guān)(p T1-2 VS p T3-4,p0.01),且Sg1表達(dá)陰性的病人更易復(fù)發(fā)(P0.01)。結(jié)論:Sg1在腎細(xì)胞癌中低表達(dá),隨著腫瘤進(jìn)展,其表達(dá)水平進(jìn)一步下降,并與患者的預(yù)后相關(guān)。Sg1可作為預(yù)測(cè)腎細(xì)胞癌進(jìn)展和預(yù)后的生物標(biāo)記物。第二部分Sg1對(duì)腎細(xì)胞癌細(xì)胞遷移、侵襲和凋亡的影響及其分子機(jī)制的探討目的:Sg1的表達(dá)水平和腎細(xì)胞癌的進(jìn)展密切相關(guān),并能在一定程度上反應(yīng)患者的預(yù)后。本課題旨在研究Sg1對(duì)腎細(xì)胞癌細(xì)胞株786-0和ACHN遷移、侵襲和凋亡的影響,并鑒定Sg1的下游靶基因,揭示Sg1缺乏導(dǎo)致腎細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制。方法:構(gòu)建Sg1過(guò)表達(dá)慢病毒和空載慢病毒,感染786-0和ACHN細(xì)胞株,以有限稀釋法建立穩(wěn)定過(guò)表達(dá)Sg1的786-0和ACHN細(xì)胞系。通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)786-0和ACHN細(xì)胞增殖能力的改變;通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)786-0和ACHN細(xì)胞的周期和凋亡改變的情況;通過(guò)Transwell法分別檢測(cè)786-0和ACHN細(xì)胞遷移、侵襲能力的改變;應(yīng)用蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)Sg1靶基因JNK的表達(dá)以及下游基因c-fos和MMP9的表達(dá)情況。以JNK抑制劑sp600125預(yù)處理786-0和ACHN細(xì)胞,再感染過(guò)表達(dá)Sg1慢病毒,對(duì)比侵襲能力是否改變。結(jié)果:建立了過(guò)表達(dá)Sg1的786-0和ACHN穩(wěn)定細(xì)胞系,在此基礎(chǔ)上的MTT實(shí)驗(yàn)表明在腎細(xì)胞癌細(xì)胞株786-0和ACHN中,過(guò)表達(dá)Sg1不影響腎細(xì)胞癌細(xì)胞的增殖能力(P0.05);在細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)中,Sg1過(guò)表達(dá)786-0細(xì)胞相對(duì)于參照組表現(xiàn)出G2/M期阻滯(P0.05);在Transwell遷移實(shí)驗(yàn)中,過(guò)表達(dá)786-0和ACHN細(xì)胞都表現(xiàn)出遷移能力受到抑制(P0.05);在Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)中,過(guò)表達(dá)786-0和ACHN細(xì)胞同樣表現(xiàn)出侵襲能力受到抑制(P0.05);凋亡實(shí)驗(yàn)表明在786-0和ACHN細(xì)胞中,過(guò)表達(dá)Sg1可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡(P0.05)。采用蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)靶基因以及下游基因的表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)Sg1可提高JNK的表達(dá)水平,同時(shí)降低p-JNK及c-fos和MMP9的表達(dá)。應(yīng)用sp600125處理786-0和ACHN細(xì)胞后,過(guò)表達(dá)Sg1不再進(jìn)一步抑制786-0和ACHN的侵襲能力(P0.05)。結(jié)論:以上結(jié)果表明Sg1可以抑制腎細(xì)胞癌細(xì)胞786-0和ACHN的遷移、侵襲能力,并促進(jìn)細(xì)胞凋亡。癌基因JNK是Sg1的潛在靶基因,Sg1可以抑制JNK的磷酸化水平,調(diào)控JNK-c-fos通路,從而發(fā)揮抑癌基因的作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.11

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2375836