【摘要】：研究背景 高遷移率族蛋白B1(high mobility protein group B1, HMGB1)是一種高度保守的細(xì)胞核蛋白,主要位于細(xì)胞核內(nèi),是一種非組蛋白染色質(zhì)結(jié)合蛋白,參與基因的復(fù)制、重組、轉(zhuǎn)錄與修復(fù)。最近的研究提示,轉(zhuǎn)錄后修飾的1MGB1蛋白可以移出細(xì)胞核核進(jìn)入細(xì)胞漿,并進(jìn)而分泌到細(xì)胞外,最終在炎癥和腫瘤中發(fā)揮重要作用。目前研究已經(jīng)證實(shí)的HMGB1轉(zhuǎn)錄后修飾有：糖基化,乙�；�,甲基化,氧化和磷酸化。而且,不同組織來源的細(xì)胞執(zhí)行HMGB1細(xì)胞漿定位的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄后修飾不同。但是,目前關(guān)于HMGB1蛋白在腎透明細(xì)胞癌中表達(dá)情況,胞漿定位及相關(guān)調(diào)控機(jī)制的研究國內(nèi)外未見報(bào)道。 研究方法 課題第一部分利用臨床收集的14例腎透明細(xì)胞癌組織標(biāo)本和相應(yīng)的14例癌旁組織標(biāo)本,采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)上述組織中HMGB1轉(zhuǎn)錄水平的差異；采用蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)檢測(cè)HMGB1蛋白質(zhì)表達(dá)水平差異；112例腎透明細(xì)胞癌組織中HMGB1的表達(dá)情況采用免疫組織化學(xué)檢測(cè)。 課題第二部分對(duì)20例手術(shù)切除的腎透明細(xì)胞癌組織標(biāo)本及癌旁組織進(jìn)行亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)分步蛋白提取,并對(duì)分步提取的蛋白進(jìn)行蛋白質(zhì)免疫印跡檢測(cè),檢測(cè)不同組分HMGB1蛋白表達(dá)的差異；并對(duì)相應(yīng)臨床標(biāo)本進(jìn)行免疫組織化學(xué)分析,進(jìn)一步觀察HMGB1蛋白的定位。免疫共沉淀技術(shù)富集腎癌臨床標(biāo)本中的HMGB1蛋白,行SDS-PAGE電泳,切膠回收蛋白,并膠內(nèi)酶解為肽段,利用高效液相色譜儀和質(zhì)譜儀檢測(cè)HMGB1肽段,采用多種蛋白質(zhì)序列比對(duì)軟件(Mascot, Sequest, MODa, MSight)進(jìn)行質(zhì)譜數(shù)據(jù)分析,并利用生物信息學(xué)工具(Chimera)模擬HMGB1蛋白的三維結(jié)構(gòu)及修飾后變化。 結(jié)果 第一部分中,10例(10/14,71.4%)腎透明細(xì)胞癌中HMGB1mRNA表達(dá)水平顯著高于癌旁組織；9例(9/14,64.3%)腎透明細(xì)胞癌中HMGB1蛋白表達(dá)水平顯著高于癌旁組織。免疫組織化學(xué)顯示59.8%(67/112)腎透明細(xì)胞癌組織中HMGB1表達(dá)顯著升高,并且與腫瘤的大小和分級(jí)有關(guān)(P0.05)。 第二部分中,利用不同方法提取組織細(xì)胞核、細(xì)胞漿、細(xì)胞骨架、細(xì)胞膜及細(xì)胞器蛋白,證實(shí)腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞的胞漿中HMGB1蛋白高表達(dá)(12/20,60%,P0.05)。相應(yīng)組織的免疫組化染色進(jìn)一步證實(shí)了腎癌中HMGB1蛋白在細(xì)胞漿的定位,并且隨著Fuhrman核分級(jí)的升高,HMGB1蛋白傾向于在細(xì)胞漿聚集。對(duì)免疫共沉淀富集的HMGB1蛋白HPLC-MS數(shù)據(jù)分析,發(fā)現(xiàn)腎透明細(xì)胞癌中HMGB1蛋白的第112位賴氨酸發(fā)生了單甲基化。對(duì)質(zhì)譜數(shù)據(jù)的生物信息學(xué)研究證實(shí),K112甲基化位于HMGB1蛋白的DNA結(jié)合區(qū),單甲基化可能會(huì)影響HMGB1與DNA的結(jié)合。 結(jié)論 HMGB1蛋白在腎透明細(xì)胞癌中轉(zhuǎn)錄與翻譯水平均呈高表達(dá)狀態(tài),并且腎透明細(xì)胞癌組織中HMGB1蛋白的表達(dá)升高與腫瘤的大小和分級(jí)呈正相關(guān)。亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)分布提取、蛋白免疫印跡及進(jìn)一步的免疫組化研究均證實(shí)腎透明細(xì)胞癌的細(xì)胞漿中HMGB1高表達(dá),免疫共沉淀和質(zhì)譜技術(shù)分析了高表達(dá)HMBG1的表觀遺傳學(xué)因素,發(fā)現(xiàn)腎透明細(xì)胞癌中的HMGB1蛋白第112位賴氨酸存在單甲基化,提示甲基化修飾可能調(diào)節(jié)了腎透明細(xì)胞癌中HMGB1蛋白的核漿轉(zhuǎn)運(yùn)。
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【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R737.11

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 馬本紅;張貴宇;梁靜;祖增艷;李越;;高遷移率族蛋白B1在子宮內(nèi)膜腺癌中的表達(dá)及意義[J];山東大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2011年06期

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本文編號(hào)：2364759