【摘要】：研究背景 高遷移率族蛋白B1(high mobility protein group B1, HMGB1)是一種高度保守的細胞核蛋白,主要位于細胞核內(nèi),是一種非組蛋白染色質(zhì)結(jié)合蛋白,參與基因的復(fù)制、重組、轉(zhuǎn)錄與修復(fù)。最近的研究提示,轉(zhuǎn)錄后修飾的1MGB1蛋白可以移出細胞核核進入細胞漿,并進而分泌到細胞外,最終在炎癥和腫瘤中發(fā)揮重要作用。目前研究已經(jīng)證實的HMGB1轉(zhuǎn)錄后修飾有：糖基化,乙�；�,甲基化,氧化和磷酸化。而且,不同組織來源的細胞執(zhí)行HMGB1細胞漿定位的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄后修飾不同。但是,目前關(guān)于HMGB1蛋白在腎透明細胞癌中表達情況,胞漿定位及相關(guān)調(diào)控機制的研究國內(nèi)外未見報道。 研究方法 課題第一部分利用臨床收集的14例腎透明細胞癌組織標本和相應(yīng)的14例癌旁組織標本,采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測上述組織中HMGB1轉(zhuǎn)錄水平的差異；采用蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)檢測HMGB1蛋白質(zhì)表達水平差異；112例腎透明細胞癌組織中HMGB1的表達情況采用免疫組織化學(xué)檢測。 課題第二部分對20例手術(shù)切除的腎透明細胞癌組織標本及癌旁組織進行亞細胞結(jié)構(gòu)分步蛋白提取,并對分步提取的蛋白進行蛋白質(zhì)免疫印跡檢測,檢測不同組分HMGB1蛋白表達的差異；并對相應(yīng)臨床標本進行免疫組織化學(xué)分析,進一步觀察HMGB1蛋白的定位。免疫共沉淀技術(shù)富集腎癌臨床標本中的HMGB1蛋白,行SDS-PAGE電泳,切膠回收蛋白,并膠內(nèi)酶解為肽段,利用高效液相色譜儀和質(zhì)譜儀檢測HMGB1肽段,采用多種蛋白質(zhì)序列比對軟件(Mascot, Sequest, MODa, MSight)進行質(zhì)譜數(shù)據(jù)分析,并利用生物信息學(xué)工具(Chimera)模擬HMGB1蛋白的三維結(jié)構(gòu)及修飾后變化。 結(jié)果 第一部分中,10例(10/14,71.4%)腎透明細胞癌中HMGB1mRNA表達水平顯著高于癌旁組織；9例(9/14,64.3%)腎透明細胞癌中HMGB1蛋白表達水平顯著高于癌旁組織。免疫組織化學(xué)顯示59.8%(67/112)腎透明細胞癌組織中HMGB1表達顯著升高,并且與腫瘤的大小和分級有關(guān)(P0.05)。 第二部分中,利用不同方法提取組織細胞核、細胞漿、細胞骨架、細胞膜及細胞器蛋白,證實腎透明細胞癌細胞的胞漿中HMGB1蛋白高表達(12/20,60%,P0.05)。相應(yīng)組織的免疫組化染色進一步證實了腎癌中HMGB1蛋白在細胞漿的定位,并且隨著Fuhrman核分級的升高,HMGB1蛋白傾向于在細胞漿聚集。對免疫共沉淀富集的HMGB1蛋白HPLC-MS數(shù)據(jù)分析,發(fā)現(xiàn)腎透明細胞癌中HMGB1蛋白的第112位賴氨酸發(fā)生了單甲基化。對質(zhì)譜數(shù)據(jù)的生物信息學(xué)研究證實,K112甲基化位于HMGB1蛋白的DNA結(jié)合區(qū),單甲基化可能會影響HMGB1與DNA的結(jié)合。 結(jié)論 HMGB1蛋白在腎透明細胞癌中轉(zhuǎn)錄與翻譯水平均呈高表達狀態(tài),并且腎透明細胞癌組織中HMGB1蛋白的表達升高與腫瘤的大小和分級呈正相關(guān)。亞細胞結(jié)構(gòu)分布提取、蛋白免疫印跡及進一步的免疫組化研究均證實腎透明細胞癌的細胞漿中HMGB1高表達,免疫共沉淀和質(zhì)譜技術(shù)分析了高表達HMBG1的表觀遺傳學(xué)因素,發(fā)現(xiàn)腎透明細胞癌中的HMGB1蛋白第112位賴氨酸存在單甲基化,提示甲基化修飾可能調(diào)節(jié)了腎透明細胞癌中HMGB1蛋白的核漿轉(zhuǎn)運。
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【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R737.11

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 馬本紅;張貴宇;梁靜;祖增艷;李越;;高遷移率族蛋白B1在子宮內(nèi)膜腺癌中的表達及意義[J];山東大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2011年06期

2 ;Growth suppression and radiosensitivity increase by HMGB1 in breast cancer[J];Acta Pharmacologica Sinica;2007年12期

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本文編號：2364759