【摘要】：目的：陰莖勃起是一個(gè)復(fù)雜的生理過程。目前已發(fā)現(xiàn)多種信號(hào)通路與陰莖勃起有關(guān)，包括NOS/NO信號(hào)通路、RhoA/Rho激酶通路、HO/CO通路和硫化氫通路等。RhoA/Rho激酶可通過鈣離子敏感機(jī)制參與陰莖勃起過程，使海綿體血管平滑肌收縮，從而影響陰莖勃起。Rho激酶有兩種亞型：ROCK1和ROCK2。很多疾病均可引起勃起功能障礙（ErectileDysfunction，ED），高血壓是其中一個(gè)重要的病因。本實(shí)驗(yàn)研究陰莖海綿體內(nèi)注射特異阻斷ROCK2基因的表達(dá)的siRNA后對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）勃起功能的影響。方法：購買12周齡的WKY及SHR雄性大鼠各30只，隨機(jī)分為6組，每組10只，A組為WKY對(duì)照組、B組為WKY+GFP組、C組為WKY+siRNA組、D組為SHR對(duì)照組、E組為SHR+GFP組、F組為SHR+siRNA組。大鼠腹腔注射1%戊巴比妥鈉，劑量為50mg/kg，麻醉顯效后顯露出大鼠陰莖海綿體，使用微量注射器（20ul），A組和D組作為對(duì)照組，B組和E組給予陰莖海綿體內(nèi)注射20ul GFP（滴度為3×108TU/ml），C組和F組給予陰莖海綿體內(nèi)注射20ul siRNA（滴度為3×108TU/ml），雙側(cè)海綿體內(nèi)緩慢注射，每側(cè)10ul，注射完畢后保留3分鐘，拔出針頭后壓迫止血。1周后，大鼠腹腔注射1%戊巴比妥鈉，劑量為50mg/kg，麻醉顯效后，將左側(cè)頸總動(dòng)脈充分游離并暴露，使用連接好壓力感受器的30G針頭，充滿肝素鹽水后穿刺左頸總動(dòng)脈，RM6240信號(hào)系統(tǒng)持續(xù)監(jiān)測(cè)記錄平均動(dòng)脈壓（MAP）；剪開陰莖背側(cè)正中至恥骨聯(lián)合上緣的皮膚，腹側(cè)剪至陰囊上方，游離出陰莖。沿腹部正中線打開腹腔，，在前列腺的后外側(cè)找出盆腔神經(jīng)節(jié)（major pelvic ganglion，MPG），作為電刺激部位。使用24G針頭穿刺右側(cè)海綿體，連接壓力轉(zhuǎn)換器，ICP基線穩(wěn)定后給予不同的電刺激MPG（電刺激參數(shù)：電壓3v、5v，波幅5ms，頻率12Hz，連續(xù)1min，刺激時(shí)間間隔3min），RM6240系統(tǒng)記錄大鼠的海綿體內(nèi)壓/平均動(dòng)脈壓（ICP/MAP）的變化。心臟取血2ml檢測(cè)血清睪酮值。陰莖海綿體組織冰凍切片，DAPI染色后在熒光顯微鏡下觀察綠色熒光。制作海綿體組織勻漿，使用一氧化氮合酶試劑盒和酶標(biāo)儀檢測(cè)一氧化氮合酶(NOS)活性。通過免疫組化和western blot檢測(cè)ROCK2、eNOS、p-eNOS在陰莖海綿體內(nèi)的表達(dá)。結(jié)果：各組的體重、睪酮值均沒有顯著差異。ICP/MAP在A組、B組、C組三組之間差異均沒有顯著性，而F組與D組和E組間的差異有顯著性（P0.05）。B組、C組、E組和F組海綿體組織可觀察到綠色熒光，而A組和D組未見綠色熒光。檢測(cè)各組NOS活性，C組與A組和B組間的差異有顯著性，F(xiàn)組與D組和F組間的差異有顯著性（P0.05）。免疫組化檢測(cè)到ROCK2主要表達(dá)在陰莖海綿體平滑肌細(xì)胞的胞漿，eNOS主要表達(dá)在血管內(nèi)皮細(xì)胞，p-eNOS也主要表達(dá)在血管內(nèi)皮細(xì)胞。western blot檢測(cè)ROCK2的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)C組與A組和B組間的差異有顯著性（P0.05），F(xiàn)組與D組和E組間的差異也有顯著性（P0.05）。C組的eNOS蛋白和p-eNOS蛋白較A組和B組的差異有顯著性。F組的eNOS和p-eNOS較D組和E組的差異有顯著性。結(jié)論：siRNA阻斷ROCK2基因表達(dá)可以抑制海綿體組織內(nèi)ROCK2蛋白的表達(dá)，引起eNOS和p-eNOS的表達(dá)增強(qiáng)，顯著增強(qiáng)SHR ED大鼠的勃起功能。
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【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R544.1

【共引文獻(xiàn)】

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1 詹建飛;王培樂;石新華;;陰莖折斷的診斷與治療[J];浙江創(chuàng)傷外科;2009年05期

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1 李永賢;淫羊藿苷聯(lián)合燈盞花素治療高血壓大鼠勃起功能障礙的實(shí)驗(yàn)研究[D];瀘州醫(yī)學(xué)院;2014年

本文編號(hào)：2362982