【摘要】：目的 本實驗以碘海醇(200mgI/ml)干預(yù)體外培養(yǎng)的人近端腎小管上皮細胞(HK-2)建立細胞損傷模型,觀察碘對比劑(iodinated contrast media, CM)致人腎小管上皮細胞損傷中的自噬現(xiàn)象,并初步探討自噬在CM致人腎小管上皮細胞損傷和凋亡中的作用。 方法 1.碘海醇(200mg Ⅰ/m1)分別干預(yù)HK-2細胞3h,6h,建立細胞損傷模型。Westen Blot檢測自噬標志蛋白微管相關(guān)蛋白1輕鏈3(LC3Ⅱ)、自噬相關(guān)蛋白Atg7的表達變化。干預(yù)6h后,LC3Ⅱ-FITC熒光共聚焦顯微鏡觀察LC3Ⅱ標記的自噬體形成,透射電鏡觀察細胞自噬體形成。 2.碘海醇(200mgⅠ/ml)干預(yù)HK-2細胞6h建立細胞損傷模型,應(yīng)用自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)10mmol/1共處理細胞抑制自噬。同上采用Westen Blot檢測LC3Ⅱ、Atg7表達；細胞上清液乳酸脫氫酶(LDH)檢測細胞損傷程度；Annexin Ⅴ-FITC結(jié)合流式細胞計數(shù)檢測細胞凋亡比例。 結(jié)果 1.碘海醇(200mg Ⅰ/ml)干預(yù)6h后,透射電鏡可觀察到HK-2細胞質(zhì)內(nèi)自噬體的增多,共聚焦顯微鏡下觀察到LC3Ⅱ標記的自噬體的形成。與正常對照組相比,碘海醇干預(yù)組HK-2細胞3h、6h白噬相關(guān)蛋白LC3Ⅱ、Atg7表達顯著上調(diào)(P0.05),并呈時間依賴性。 2.3-MA可明顯抑制HK-2細胞自噬,單純3-MA干預(yù)組與正常對照組相比,以及碘海醇+3-MA干預(yù)組與單純碘海醇干預(yù)組相比,自噬標志蛋白LC3Ⅱ以及Atg7表達均明顯下調(diào)(P0.05,P0.05)。同時,與單純碘海醇干預(yù)組相比,加用用3-MA抑制自噬后,細胞上清液LDH明顯升高(P0.05),HK-2細胞凋亡率明顯增加(P0.05)。 結(jié)論 1.碘對比劑(碘海醇,200mgⅠ/ml)呈時間依賴性誘導(dǎo)HK-2細胞發(fā)生白噬。 2.自噬抑制加重碘對比劑所致的HK-2細胞損傷和凋亡。 3.自噬激活可能減輕碘對比劑所致的HK-2細胞損傷和凋亡,對HK-2細胞具有保護作用。
[Abstract]:Objective to establish an injury model of human proximal renal tubular epithelial cells (HK-2) with iodohexol (200mgI/ml) in vitro and observe the iodine contrast agent (iodinated contrast media,. To explore the role of autophagy in CM induced injury and apoptosis of human renal tubular epithelial cells. Method 1. 200mg 鈪，

本文編號：2362895