【摘要】：目的：局灶節(jié)段性腎小球硬化（focal segmental glomerulosclerosis, FSGS）是導(dǎo)致終末期腎�。╡nd stage renal disease, ESRD）的主要原因之一。其發(fā)病機(jī)制還不完全清楚。目前的研究表明，遺傳因素在FSGS發(fā)病中起重要作用，可能存在主效基因變異導(dǎo)致FSGS發(fā)病�；诟呒铀魅嘶蚍侵抟崦绹说难芯恳呀�(jīng)證實(shí)，多種足細(xì)胞蛋白編碼基因的突變均可能導(dǎo)致FSGS，例如NPHS1，NPHS2，ACTN4，TRPC6，INF2等。但其結(jié)果沒能在中國漢族人群中得到驗(yàn)證，中國漢族人群FSGS患者可能存在新的致病基因變異。因此，本課題以FSGS家系及散發(fā)患者為對象，利用全基因組掃描及全外顯子測序技術(shù)進(jìn)行致病基因突變研究，尋找中國漢族人群FSGS患者的致病基因變異，為FSGS的遺傳學(xué)和發(fā)病機(jī)制研究提供依據(jù)。 方法：1、基于FSGS家系的研究：（1）對LF-01家系中的患者，以及LF-02和LF-03家系的先證者，針對已知致病基因突變位點(diǎn)的區(qū)域：ACTN4第8外顯子，TRPC6第2、5、12、13外顯子和INF2基因2、3、4外顯子，進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)（polymerasechain reaction，PCR）擴(kuò)增后測序，篩查突變。（2）對LF-01家系中的所有22名成員，進(jìn)行全基因組掃描，通過連鎖分析尋找候選位點(diǎn)并分析可能的致病基因。（3）對LF-01家系的3例患者，1例正常成員，以及LF-02、LF-03家系先證者進(jìn)行全外顯子測序。根據(jù)千人基因組計(jì)劃（1092名正常人全基因組數(shù)據(jù)庫）、ESP6500（6500名正常人全外顯子數(shù)據(jù)庫）和dbSNP信息，濾過正常人群變異；并與cg69數(shù)據(jù)庫與69個(gè)非腎病測序項(xiàng)目測序結(jié)果對比，根據(jù)全基因組掃描結(jié)果，結(jié)合蛋白質(zhì)功能預(yù)測軟件預(yù)測結(jié)果及家系內(nèi)對照測序結(jié)果，確定FSGS家系可能的致病基因突變。（4）對可能的致病基因突變在各自家系內(nèi)進(jìn)行測序驗(yàn)證。并在其他97例散發(fā)FSGS患者及96例正常人中進(jìn)行測序驗(yàn)證。 2、基于散發(fā)FSGS患者的研究：（1）對40例散發(fā)FSGS患者，，通過直接測序?qū)ι鲜鲆阎虏』蛲蛔兾稽c(diǎn)進(jìn)行篩查。（2）對無明確致病突變的21例FSGS散發(fā)患者進(jìn)行全外顯子測序。通過上述方法篩選FSGS散發(fā)病例的可能致病基因突變。（3）對篩選結(jié)果在97例FSGS患者及96例正常人中進(jìn)行驗(yàn)證。 結(jié)果：1（1）對LF-01家系22名成員，LF-02和LF-03家系的先證者進(jìn)行已知基因熱點(diǎn)突變篩查，未發(fā)現(xiàn)已報(bào)道突變。（2）LF-01家系22名成員全基因組掃描結(jié)果顯示，4個(gè)位點(diǎn)LOD值大于0，其中LOD值最高的位點(diǎn)為D1S199，LOD值為1.97。4個(gè)位點(diǎn)的連鎖區(qū)域不包含已知致病基因突變。（3）根據(jù)LF-01家系內(nèi)對照、公共數(shù)據(jù)庫對照、功能預(yù)測、全基因組掃描結(jié)果篩選出候選基因：WT1、A基因、ITGB4，PCR擴(kuò)增3個(gè)基因的突變位點(diǎn)在該家系的其他成員中驗(yàn)證，證實(shí)WT1、ITGB4基因不是該家系致病基因，而A基因（c.C1213G，p.L405V）可能是該家系FSGS致病性突變。LF-02家系的先證者存在MYH9（c.G3282C，p.E1094D）基因的錯(cuò)義突變。LF-03家系中發(fā)現(xiàn)致病基因APOL1突變（c.C761T，p.T254I）。（5）在97例FSGS散發(fā)患者及96例正常人中對A基因、MYH9、APOL1進(jìn)行驗(yàn)證，僅在1例散發(fā)病人中發(fā)現(xiàn)A基因相同功能區(qū)不同位點(diǎn)突變。 2（1）對40例散發(fā)FSGS患者篩查未發(fā)現(xiàn)已知基因突變。（2）對已行突變篩查的21名FSGS散發(fā)患者進(jìn)行全外顯子測序。經(jīng)公共數(shù)據(jù)庫濾過篩選出10名以上散發(fā)患者共同存在插入缺失突變的候選基因：TCHH、PR1L1、ATXN1、HGC6.3，在97例FSGS散發(fā)患者及96例正常對照中對上述4個(gè)基因變異區(qū)域進(jìn)行PCR擴(kuò)增并測序，在正常人群中發(fā)現(xiàn)存在相似頻率突變。（3）對上述外顯子測序結(jié)果篩查，尋找出可能的致病基因突變位點(diǎn)包括：TRPC6（c.T1673C，p.I558T）、SMARCAL1（c.G928A，p.E310K）、A基因（c.A3559G，p.T1187A），NPHS1（c.G928A，p.D310N），其中前三個(gè)突變均未見報(bào)道。（4）在97例FSGS患者中及96例正常人中進(jìn)行驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)8名散發(fā)性FSGS患者存在TRPC6（I558T）突變，SMARCAL1（E310K）、A基因（T1187A）、NPHS1（D310N）突變各有1例。其余突變位點(diǎn)FSGS患者中未測出。所有正常對照中均未測到上述突變。 3對上述突變進(jìn)行生物信息學(xué)分析，顯示這些變異可能是導(dǎo)致FSGS的突變。 結(jié)論：1、首次對中國漢族人FSGS家系采用連鎖分析結(jié)合全外顯子測序策略，以及對散發(fā)FSGS患者采用已知常見致病基因突變篩查后全外顯子測序的研究策略，取得了成功。 2、基于3個(gè)FSGS家系的研究，在較大家系LF-01家系中利用全基因組掃描及全外顯子測序的策略成功的發(fā)現(xiàn)新的致病基因：A基因。并在另一散發(fā)患者中也發(fā)現(xiàn)了A基因的突變。在LF-02家系先證者發(fā)現(xiàn)MYH9基因新的錯(cuò)義突變位點(diǎn)。在一個(gè)同卵雙生LF-03家系中發(fā)現(xiàn)了位于APOL1基因第5外顯子上的新突變位點(diǎn)。在3個(gè)FSGS家系中均找到致病基因。 3、首次在散發(fā)性FSGS患者中報(bào)道A基因、TRPC6、SMARCAL1基因的新突變。這些突變能從遺傳學(xué)角度上解釋了11.3%的FSGS患者。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R692.6

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

1 陳惠萍,曾彩虹,胡偉新,王慶文,俞雨生,姚小丹,唐政,王建平,朱茂艷,周虹,劉紅,劉志紅,黎磊石;10594例腎活檢病理資料分析[J];腎臟病與透析腎移植雜志;2000年06期

2 周偉,陳楠,潘曉霞,陳曉農(nóng),任紅,王朝輝,巫永睿,陸穎;局灶節(jié)段性腎小球硬化與NPHS2基因突變[J];腎臟病與透析腎移植雜志;2005年02期

3 馬駿;王朝暉;朱斌;潘曉霞;嚴(yán)富洪;張文;任紅;王偉銘;陳楠;;家族性局灶節(jié)段腎小球硬化癥一家系臨床與基因調(diào)查[J];腎臟病與透析腎移植雜志;2010年01期

4 李貴森;王慶文;;局灶節(jié)段性腎小球硬化的遺傳背景[J];腎臟病與透析腎移植雜志;2010年04期

5 余自華,丁潔,管娜,石巖,張敬京,黃建萍,姚勇,楊霽云;一個(gè)中國漢族人家族性激素耐藥型腎病綜合征家系NPHS2基因新突變[J];中華兒科雜志;2004年02期

6 潘曉霞;陳楠;周偉;王朝暉;張文;王偉銘;陳曉農(nóng);巫永睿;陸穎;;原發(fā)性局灶節(jié)段性腎小球硬化患者CD2AP基因突變的研究[J];中華腎臟病雜志;2006年01期

本文編號：2349742