【摘要】：膀胱腫瘤診斷的傳統(tǒng)方法有膀胱鏡檢查和尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查,而腫瘤標(biāo)志物檢查已成為一種新趨勢(shì),是更先進(jìn)的檢查方法。理想的膀胱腫瘤標(biāo)志物應(yīng)該敏感度高、特異性強(qiáng),能對(duì)大范圍人群進(jìn)行膀胱腫瘤篩查,使膀胱腫瘤患者做到早發(fā)現(xiàn)早治療,提高預(yù)后和病人的生存年限。利用蛋白質(zhì)組學(xué),對(duì)比正常人與膀胱癌患者尿液蛋白質(zhì)差異,是尋找腫瘤標(biāo)志物行之有效的方法之一。 毛細(xì)管電泳-柱內(nèi)光纖誘導(dǎo)熒光檢測(cè)(CE-LED-IF)是一種高效、高靈敏度、能達(dá)到痕量分析水平的方法。柱內(nèi)光纖發(fā)光二極管(LED)誘導(dǎo)熒光法,與其他LED誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器結(jié)構(gòu)不同,利用光纖將光子引入到檢測(cè)窗,直接照射熒光物質(zhì),提高了光子的利用率,降低了背景噪聲,是高靈敏度的檢測(cè)方法之一。 本文采用CE-LED-IF檢測(cè)分析人血清白蛋白(HSA),建立其定量檢測(cè)HSA的方法。在已經(jīng)建立的電泳流程基礎(chǔ)上,對(duì)正常人與膀胱癌患者尿液蛋白質(zhì)進(jìn)行CE-LED-IF分析,對(duì)比分析兩種尿液蛋白的差異性,探索CE-LED-IF在膀胱癌檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值。研究目的： 1.建立CE-LED-IF定量檢測(cè)HSA的方法,為CE-LED-IF分析尿液蛋白質(zhì)奠定基礎(chǔ)； 2.對(duì)正常人與膀胱癌患者尿液蛋白質(zhì)進(jìn)行對(duì)比分析,檢測(cè)兩種人群尿液蛋白質(zhì)的差異性,探索CE-LED-IF在膀胱癌檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值。 研究方法： 1.本文對(duì)儀器的光路耦合與卡槽結(jié)構(gòu)做必要的改進(jìn),討論了熒光素,LED與濾光片,衍生等條件對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響。在優(yōu)化的條件下對(duì)一系列濃度的HSA標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行CE-LED-IF檢測(cè),得到電泳圖,回歸方程和檢測(cè)限,重復(fù)性、穩(wěn)定性和樣品回收率。利用建立的檢測(cè)方法,檢測(cè)了4個(gè)正常人血清中HSA的濃度。 2.采集5例正常人與5例膀胱癌患者尿液,用鹽析法提取出尿液中蛋白質(zhì)。提取出來的蛋白質(zhì)進(jìn)行熒光標(biāo)記后,用CE-LED-IF進(jìn)行分析,對(duì)比兩種樣本的電泳圖,分析其差異性。 研究結(jié)果： 1.對(duì)儀器光路耦合與卡槽結(jié)構(gòu)的不完善之處提出了改進(jìn)方案,經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,方法有效。選用FITC作為熒光標(biāo)記物,480nm的LED光源,470nm-490nm和510nm-550nm帶通濾光片分別作為光源濾光片和接收濾光片,衍生時(shí)蛋白質(zhì)與FITC的質(zhì)量比為25：1,衍生時(shí)間為4小時(shí)。測(cè)得HSA與FITC結(jié)合物和游離FITC電泳時(shí)間分別為210秒和400秒,在1.52～758×10-7mol·L-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。信噪比(S/N)為5時(shí),測(cè)得HSA的檢測(cè)下限為7.5×10-8mol·L-1。重復(fù)性、穩(wěn)定性和回收效率良好。對(duì)正常人血清中HSA的濃度測(cè)定,結(jié)果均在正常范圍值之內(nèi)。 2.正常人與膀胱癌患者尿液蛋白經(jīng)CE-LED-IF分析后,得到兩種樣品的電泳圖。對(duì)比兩種人群樣品電泳圖,膀胱癌患者尿液電泳圖中電泳峰的數(shù)目明顯比正常人多。經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)分析,這一差異穩(wěn)定存在。 研究結(jié)論： 1.利用改進(jìn)后的儀器建立的CE-LED-IF檢測(cè)HSA的方法,可重復(fù)性和穩(wěn)定性好,樣品回收率高。為尿液蛋白分析奠定了基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)證明,CE-LED-IF可用于人血液中血清白蛋白濃度的檢測(cè)。而且方法的檢測(cè)下限低,能用于低濃度的HSA的測(cè)量。 2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,CE-LED-IF(?)檢測(cè)到正常人與膀胱癌患者尿液蛋白質(zhì)的差異性,這一方法在尿液蛋白質(zhì)分析、膀胱癌標(biāo)志物探索中存在潛在應(yīng)用價(jià)值。
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【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：O657.3;R737.14

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2255639