【摘要】：目的初步探討慢病毒攜帶sh RNA-VDR載體干擾前列腺癌PC-3細(xì)胞中VDR基因?qū)Li1的影響。方法依照PC-3細(xì)胞的培養(yǎng)條件培養(yǎng)細(xì)胞;采用熒光定量PCR法和免疫細(xì)胞化學(xué)SP法檢測(cè)PC-3細(xì)胞中VDR、GLi1兩個(gè)基因表達(dá)情況;對(duì)PC-3細(xì)胞病毒侵染進(jìn)行效率評(píng)價(jià);運(yùn)用RT-PCR法檢測(cè)PC-3細(xì)胞VDR基因干擾效果及Gli1轉(zhuǎn)錄水平改變情況。結(jié)果細(xì)胞培養(yǎng):拍照記錄細(xì)胞狀態(tài):PC-3細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好,以4 d為1周期進(jìn)行傳代;熒光定量PCR法和免疫細(xì)胞化學(xué)SP法顯示VDR、GLi1均在PC-3細(xì)胞中表達(dá);慢病毒侵染效率顯示為按照1∶10的比例向PC-3細(xì)胞加入LV3-NC慢病毒時(shí),細(xì)胞侵染效率最好,約為95%左右;RT-PCR顯示:VDR-sh RNA慢病毒成功干擾VDR表達(dá),在VDR-sh RNA慢病毒轉(zhuǎn)染72 h后與對(duì)照組相比實(shí)驗(yàn)組VDR基因轉(zhuǎn)錄水平下降85%(P0.05),同時(shí)實(shí)驗(yàn)組GLi1基因轉(zhuǎn)錄水平與對(duì)照組相比上升9%(P0.05);而當(dāng)轉(zhuǎn)染96 h后實(shí)驗(yàn)組VDR基因轉(zhuǎn)錄水平與對(duì)照組相比下降99%(沉默),同時(shí)實(shí)驗(yàn)組GLi1基因轉(zhuǎn)錄水平與對(duì)照組相比上升248%(P0.05)。結(jié)論所培養(yǎng)的PC-3細(xì)胞狀態(tài)較好;VDR和GLi1基因在PC-3細(xì)胞中均表達(dá);慢病毒按照1∶10的比例侵染PC-3效率最高;當(dāng)VDR被干擾后GLi1表達(dá)增高,因而在前列腺癌細(xì)胞中維生素D可抑制Hh信號(hào)通路可致GLi1表達(dá)下調(diào)。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of lentivirus carrying sh RNA-VDR vector on VDR gene in prostate cancer PC-3 cells. Methods the expression of VDR,GLi1 gene in PC-3 cells was detected by fluorescence quantitative PCR assay and immunocytochemical SP assay according to the culture conditions of PC-3 cells, and the efficiency of viral infection of PC-3 cells was evaluated. The interference effect of VDR gene and the changes of Gli1 transcription level in PC-3 cells were detected by RT-PCR assay. Results Cell culture showed that the cell was in a good growth state and was subcultured in 4 days for 1 cycle, and VDR,GLi1 was expressed in PC-3 cells by fluorescence quantitative PCR assay and immunocytochemical SP method. The infection efficiency of lentivirus was as follows: when LV3-NC lentivirus was added to PC-3 cells at 1:10, the infection efficiency was the best, and about 95% RT-PCR showed that the lentivirus of 10% VDR-sh RNA successfully interfered with the expression of VDR. After 72 h of VDR-sh RNA lentivirus transfection, the VDR gene transcription level in the experimental group decreased by 85% (P0.05), while the GLi1 gene transcription level in the experimental group increased by 9% (P0.05) compared with the control group, while the VDR gene transcription level in the experimental group was significantly higher than that in the control group after 96 h transfection (P0.05). Compared with the control group, the transcription level of GLi1 gene in the experimental group increased by 24.8% (P0.05). Conclusion both VDR and GLi1 genes were expressed in PC-3 cells in good condition, lentivirus infection of PC-3 at 1:10 was the most efficient, and GLi1 expression was increased when VDR was interfered. Vitamin D could inhibit Hh signaling pathway and induce down-regulation of GLi1 expression in prostate cancer cells.
【作者單位】： 昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院泌尿外科;
【基金】：云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究(昆醫(yī)聯(lián)合專(zhuān)項(xiàng)基金)(編號(hào):2017FE467-042;2014FB013)
【分類(lèi)號(hào)】：R737.25

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本文編號(hào)：2246083