【摘要】：目的初步探討慢病毒攜帶sh RNA-VDR載體干擾前列腺癌PC-3細胞中VDR基因對GLi1的影響。方法依照PC-3細胞的培養(yǎng)條件培養(yǎng)細胞;采用熒光定量PCR法和免疫細胞化學SP法檢測PC-3細胞中VDR、GLi1兩個基因表達情況;對PC-3細胞病毒侵染進行效率評價;運用RT-PCR法檢測PC-3細胞VDR基因干擾效果及Gli1轉錄水平改變情況。結果細胞培養(yǎng):拍照記錄細胞狀態(tài):PC-3細胞生長狀態(tài)良好,以4 d為1周期進行傳代;熒光定量PCR法和免疫細胞化學SP法顯示VDR、GLi1均在PC-3細胞中表達;慢病毒侵染效率顯示為按照1∶10的比例向PC-3細胞加入LV3-NC慢病毒時,細胞侵染效率最好,約為95%左右;RT-PCR顯示:VDR-sh RNA慢病毒成功干擾VDR表達,在VDR-sh RNA慢病毒轉染72 h后與對照組相比實驗組VDR基因轉錄水平下降85%(P0.05),同時實驗組GLi1基因轉錄水平與對照組相比上升9%(P0.05);而當轉染96 h后實驗組VDR基因轉錄水平與對照組相比下降99%(沉默),同時實驗組GLi1基因轉錄水平與對照組相比上升248%(P0.05)。結論所培養(yǎng)的PC-3細胞狀態(tài)較好;VDR和GLi1基因在PC-3細胞中均表達;慢病毒按照1∶10的比例侵染PC-3效率最高;當VDR被干擾后GLi1表達增高,因而在前列腺癌細胞中維生素D可抑制Hh信號通路可致GLi1表達下調。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of lentivirus carrying sh RNA-VDR vector on VDR gene in prostate cancer PC-3 cells. Methods the expression of VDR,GLi1 gene in PC-3 cells was detected by fluorescence quantitative PCR assay and immunocytochemical SP assay according to the culture conditions of PC-3 cells, and the efficiency of viral infection of PC-3 cells was evaluated. The interference effect of VDR gene and the changes of Gli1 transcription level in PC-3 cells were detected by RT-PCR assay. Results Cell culture showed that the cell was in a good growth state and was subcultured in 4 days for 1 cycle, and VDR,GLi1 was expressed in PC-3 cells by fluorescence quantitative PCR assay and immunocytochemical SP method. The infection efficiency of lentivirus was as follows: when LV3-NC lentivirus was added to PC-3 cells at 1:10, the infection efficiency was the best, and about 95% RT-PCR showed that the lentivirus of 10% VDR-sh RNA successfully interfered with the expression of VDR. After 72 h of VDR-sh RNA lentivirus transfection, the VDR gene transcription level in the experimental group decreased by 85% (P0.05), while the GLi1 gene transcription level in the experimental group increased by 9% (P0.05) compared with the control group, while the VDR gene transcription level in the experimental group was significantly higher than that in the control group after 96 h transfection (P0.05). Compared with the control group, the transcription level of GLi1 gene in the experimental group increased by 24.8% (P0.05). Conclusion both VDR and GLi1 genes were expressed in PC-3 cells in good condition, lentivirus infection of PC-3 at 1:10 was the most efficient, and GLi1 expression was increased when VDR was interfered. Vitamin D could inhibit Hh signaling pathway and induce down-regulation of GLi1 expression in prostate cancer cells.
【作者單位】： 昆明醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院泌尿外科;
【基金】：云南省應用基礎研究(昆醫(yī)聯(lián)合專項基金)(編號:2017FE467-042;2014FB013)
【分類號】：R737.25

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本文編號：2246083