【摘要】：目的：探討炎性介質骨橋蛋白(Osteopontin,oPN)的表達和核轉錄因子在大鼠慢性環(huán)孢素A(CsA)腎毒性中的作用。 方法：雄性Sprague-Dawley大鼠喂食低鹽飼料(0.05%鈉鹽)下分為兩組,正常對照組給予皮下注射橄欖油(1m1/kg/d)；慢性CsA腎毒性組給予皮下注射環(huán)孢素A(15mg/kg/d)4周。通過三色染色觀察腎小管間質纖維化程度和免疫組化觀察ED-1陽性細胞；采用RNA印跡、免疫組織化學染色方法檢測OPN在mRNA和蛋白水平的表達；用凝膠電泳遷移率實驗(Elecrophoretic mobility shift assay, EMSA)分析法和免疫印跡法測定核轉錄因子(NF-κB和AP-1)的結合活性和IκB蛋白的表達。 結果：與對照組相比,毒性組大鼠表現(xiàn)為腎小管間質帶狀纖維化[(38.9±3.3)%vs.(0.0±0.0)%,P0.01]和大量ED-1陽性細胞浸潤[(89±9)%vs.(7±2)%,P0.01]。與對照組相比,毒性組大鼠OPN mRNA和蛋白的表達明顯增加[(729±37)%vs.(103±4)%,P0.01],分布于腎小管上皮細胞,其主要位于腎小管間質損傷部位。毒性組核轉錄因子NF-κB(218±19vs.116±15,P0.01)和AP-1(735±225vs.101±4,P0.01)結合活性顯著增加,而I KB蛋白的表達減少(9±7vs.105±7,P0.01)。直線相關分析示OPN mRNA的表達與腎小管間質纖維化程度(r=0.959,P0.001)和核轉錄因子的結合活性呈正相相關(NF-κB:r=0.773,尸0.01:AP.1:r=:0.619,P=0.01).結論：在慢性環(huán)孢素A腎毒性中OPN表達的上調與腎小管間質纖維化程度相關,且可能與NF-κB和AP-1的激活密切相關。
[Abstract]:AIM: To investigate the expression of osteopontin (oPN) and the role of nuclear transcription factors in chronic cyclosporine A (CsA) nephrotoxicity in rats.
Methods: Male Sprague-Dawley rats were fed low-salt diet (0.05% sodium salt) and divided into two groups. Normal control group was given subcutaneous injection of olive oil (1m1/kg/d); chronic CsA nephrotoxicity group was given subcutaneous injection of cyclosporine A (15mg/kg/d) for 4 weeks. The expression of OPN at mRNA and protein levels was detected by RNA imprinting and immunohistochemical staining, and the binding activity of nuclear transcription factors (NF-kappa B and AP-1) and the expression of I-kappa B protein were determined by gel electrophoretic mobility shift assay (EMSA) and immunoblotting.
Results: Compared with the control group, the toxic group showed renal tubulointerstitial banded fibrosis [(38.9 +3.3)% vs. (0.0 +0.0)%, P 0.01] and a large number of ED-1 positive cell infiltration [(89 +9)% vs. (7 +2)%, P 0.01]. Compared with the control group, the expression of OPN mRNA and protein in the toxic group increased significantly [(729 +37)% vs. (103 +4)%, P 0.01], and distributed in the renal tubules. In the toxic group, the binding activity of nuclear transcription factor NF-kappa B (218 65507 CONCLUSION: The up-regulation of OPN expression in chronic cyclosporine A nephrotoxicity is associated with the degree of tubulointerstitial fibrosis and may be closely related to the activation of NF-kappa B and AP-1.
【學位授予單位】：延邊大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R692

【參考文獻】

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本文編號：2220261