【摘要】：目的探討PRDM5基因在前列腺癌細胞中的抑癌作用。方法采用聚合酶鏈反應(PCR)、限制性內切酶酶切、T4DNA連接酶連接等方法,克隆PRDM5基因并插入慢病毒載體中。將攜帶PRDM5基因的慢病毒質粒(或陰性對照質粒)與慢病毒包裝質粒通過脂質體法共轉染293T細胞,收集病毒上清,感染人前列腺癌細胞株22Rv1。用蛋白質印跡法檢測細胞PRDM5的表達,細胞倍增實驗和平板克隆實驗檢測細胞增殖和克隆形成能力,軟瓊脂克隆形成實驗檢測細胞非錨著依賴性生長能力。結果成功構建PRDM5重組慢病毒載體,并包裝獲得慢病毒上清。將PRDM5重組慢病毒載體感染22Rv1細胞后,篩選得到穩(wěn)定表達細胞株,蛋白質印跡法結果顯示該細胞株能穩(wěn)定表達外源性PRDM5蛋白。過表達PRDM5的前列腺癌22Rv1細胞的增殖能力[倍增時間:(52.5±1.4)h vs(44.0±1.3)h]、克隆形成能力[克隆形成數:(1 114±98)/皿vs(1 361±123)/皿]和非錨著依賴性生長能力[克隆形成數:(94.6±8.7)/孔vs(154.0±3.5)/孔]均低于陰性對照組(P0.05)。結論前列腺癌22Rv1細胞中PRDM5的過表達具有抑制腫瘤細胞增殖、克隆形成和非錨著依賴性生長的能力。
[Abstract]:Objective to investigate the inhibitory effect of PRDM5 gene on prostate cancer cells. Methods PRDM5 gene was cloned and inserted into lentivirus vector by polymerase chain reaction (PCR),) restriction endonuclease digestion of T4 DNA ligase. The lentivirus plasmid carrying PRDM5 gene (or negative control plasmid) and lentivirus packaging plasmid were co-transfected into 293T cells by liposome method. The virus supernatant was collected and infected with human prostate cancer cell line 22Rv1. The expression of PRDM5 was detected by Western blotting, cell proliferation and clone formation were detected by cell multiplication assay and plate clone assay, and the ability of non-anchor dependent growth was detected by soft Agar colony forming assay. Results the recombinant lentivirus vector of PRDM5 was successfully constructed and the supernatant of lentivirus was obtained by packaging. After PRDM5 recombinant lentivirus vector was infected with 22Rv1 cell line, stable expression cell line was obtained. Western blot analysis showed that the cell line could stably express exogenous PRDM5 protein. The proliferative ability of 22Rv1 cells with overexpression of PRDM5 [(52.5 鹵1.4) h vs (44.0 鹵1.3) h], clone forming capacity [(1 114 鹵98) / dish vs (1 361 鹵123) / dish] and anchor-independent growth ability [(94.6 鹵8.7) / pore vs (154.0 鹵3.5) / well] were lower than those of negative control group (P0.05). Conclusion overexpression of PRDM5 in prostate cancer 22Rv1 cells can inhibit tumor cell proliferation, clone formation and anchor-independent growth.
【作者單位】： 第二軍醫(yī)大學長海醫(yī)院病理科;第二軍醫(yī)大學藥學院生化藥學教研室;解放軍成都軍區(qū)昆明總醫(yī)院腫瘤科;第二軍醫(yī)大學長海醫(yī)院泌尿外科;
【基金】：中國博士后科學基金面上項目(2013M532124) 上海市衛(wèi)生和計劃生育委員會科研課題面上項目(2013356)~~
【分類號】：R737.25

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