發(fā)布時(shí)間：2018-07-26 17:52

【摘要】：小干擾RNA基因治療去勢前列腺癌具有良好的前景,陽離子聚合物納米材料作為一種新型的腫瘤基因治療載體,為其應(yīng)用于臨床帶來了希望。在本研究中,我們合成一個新型的納米聚合物聚乙二醇化的聚乙烯亞胺(mPEG-PEI),作為一個有效的非病毒基因載體,發(fā)現(xiàn)此共聚物能夠成功轉(zhuǎn)染EZH2-shRNA基因至前列腺癌PC3細(xì)胞株,并在細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)。前期的研究證明IEZH2 (Enhancer of zeste homolog 2)與去勢前列腺癌的形成、發(fā)展密切相關(guān)。轉(zhuǎn)入EZH2-shRNA基因降低癌細(xì)胞中EZH2mRNA蛋白表達(dá)可能有效治療難治性去勢前列腺癌CRPC (Castration Resistant Prostate Cancer)。mPEG-PEI/質(zhì)粒DNA復(fù)合物顯示著低細(xì)胞毒性和較高的基因轉(zhuǎn)染效率。mPEG-PEI作為一個很具前景的的非病毒基因載體,能夠成功轉(zhuǎn)染EZH2-shRNA至目的前列腺癌細(xì)胞PC3,這為晚期前列腺癌的治療帶來新的希望。方法：1.聚乙二醇化的聚乙烯亞胺(mPEG-PEI)納米凝膠的合成及表征。2.測定PEG-PEI/質(zhì)粒DNA復(fù)合物的粒徑和電荷；瓊脂糖凝膠電泳阻滯實(shí)驗(yàn)測定復(fù)合物結(jié)合能力；細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)以及紅細(xì)胞聚集實(shí)驗(yàn)測定mPEG-PEI的細(xì)胞毒性及轉(zhuǎn)染效率,細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)選擇最佳轉(zhuǎn)染效率時(shí)的N/P(聚合物上的氮原子比DNA上的磷原子)比,研究聚乙二醇化的聚乙烯亞胺(mPEG-PEI)作為基因載體的性質(zhì)。3.體外轉(zhuǎn)染EZH2-shRNA基因至前列腺癌細(xì)胞PC3細(xì)胞并獲得穩(wěn)定表達(dá),然后用RT-PCR、Westen blot方法證實(shí)EZH2-mRNA蛋白的表達(dá)情況,用以檢測轉(zhuǎn)染EZH2-shRNA基因后的基因抑制效應(yīng)。結(jié)果：1.成功合成和表征共聚物mPEG-PEI。2.隨著N/P比增大1mPEG-PEI與DNA結(jié)合更牢固,N/P=10,復(fù)合物能夠完全結(jié)合。3.在不同的聚合物濃度及不同的N/P比值復(fù)合物的細(xì)胞毒性不同。隨著mPEG-PEI/pDNA復(fù)合物濃度的增高,PC3細(xì)胞的死亡率增大。當(dāng)濃度大于50，

本文編號：2146823