發(fā)布時(shí)間：2018-07-05 08:34

  本文選題：腎小管上皮細(xì)胞 + 原代培養(yǎng)　； 參考：《醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào)》2017年01期

【摘要】：目的細(xì)胞轉(zhuǎn)分化(EMT)過(guò)程中的關(guān)鍵事件包括上皮細(xì)胞蛋白(E-鈣黏蛋白)的表達(dá)下調(diào),細(xì)胞活動(dòng)性增加,細(xì)胞基質(zhì)生成的增多等。文中構(gòu)建鼠原代腎小管上皮細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定的方法,探究C3aR活化是否能夠引起小管上皮細(xì)胞發(fā)生上皮-間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化。方法用鼠腎小管節(jié)段進(jìn)行腎小管上皮細(xì)胞原代培養(yǎng),以免疫細(xì)胞化學(xué)及免疫熒光染色對(duì)上皮細(xì)胞進(jìn)行鑒定。實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組,C3aR激動(dòng)劑設(shè)5個(gè)濃度組:0.1、1、100、500及2000 ng/m L組,另設(shè)3個(gè)時(shí)間組:6、12及24 h組。利用Real-time PCR檢測(cè)腎小管上皮細(xì)胞中E-鈣黏蛋白、α-SMA及collagen I的表達(dá)水平變化;利用Western blot檢測(cè)E-鈣黏蛋白、α-SMA蛋白表達(dá)水平;用鬼筆環(huán)肽對(duì)上皮細(xì)胞行骨架染色,觀察細(xì)胞骨架形態(tài)變化。結(jié)果與正常對(duì)照組比較,C3aR激動(dòng)劑組(500 ng/m L、刺激48 h)抑制E-鈣黏蛋白表達(dá)[(0.950±0.901)vs(0.650±0.221),P0.05],上調(diào)α-SMA[(1.380±0.062)vs(1.600±0.103),P0.05]和collagen I表達(dá)(P0.05),且各自表達(dá)趨勢(shì)與C3aR激動(dòng)劑呈時(shí)間和劑量依賴關(guān)系。細(xì)胞骨架染色結(jié)果顯示,隨著C3aR激動(dòng)劑刺激時(shí)間的延長(zhǎng),上皮細(xì)胞內(nèi)由激動(dòng)蛋白構(gòu)成的應(yīng)力纖維生成逐漸增多。結(jié)論成功構(gòu)建了小鼠腎小管上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)及鑒定的方法;C3aR活化能夠促進(jìn)腎小管上皮細(xì)胞發(fā)生上皮-間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化,并在腎纖維化的發(fā)生發(fā)展中起一定作用,預(yù)示C3aR可能成為腎疾病治療的新靶點(diǎn)。
[Abstract]:Objective the key events in the process of cell transdifferentiation (EMT) include down-regulation of epithelial cell protein (E-cadherin), increase of cell activity and increase of cell matrix production. In order to investigate whether C3aR activation can induce epithelial-interstitial cell transdifferentiation in primary rat renal tubular epithelial cells culture and identification methods were constructed in this paper. Methods the primary culture of rat renal tubular epithelial cells was carried out. The epithelial cells were identified by immunocytochemistry and immunofluorescence staining. The experiment was divided into normal control group, C3aR agonist group and control group. The rats were divided into 5 groups: 0. 01 ng/m / L and 2000 ng/m / L, respectively. Real-time PCR was used to detect the expression of E-cadherin, 偽 -SMA and collagen I in renal tubular epithelial cells, Western blot was used to detect the expression of Ecadherin and 偽 -SMA, and cytoskeleton staining was performed to observe the morphological changes of the cytoskeleton. Results compared with the control group, the C3aR agonist group (500 ng/m / L, stimulated for 48 h) inhibited the expression of E-cadherin [(0.950 鹵0.901) vs (鹵0.221) P 0.05], up-regulated 偽 -SMA [(1.380 鹵0.062) vs (1.600 鹵0.103) P 0.05] and collagen I (P0.05), and showed a time-and dose-dependent relationship between the expression of 偽 -SMA and C3aR agonist. Cytoskeleton staining showed that with the prolongation of the stimulation time of C3aR agonist, the formation of stress fibers composed of excitins in epithelial cells increased gradually. Conclusion the method of primary culture and identification of mouse renal tubular epithelial cells was successfully constructed. The activation of C3aR can promote the epithelial-interstitial cell transdifferentiation of renal tubular epithelial cells and play a role in the development of renal fibrosis. It suggests that C 3 ar may be a new target for the treatment of renal diseases.
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)金陵醫(yī)院(南京軍區(qū)南京總醫(yī)院)國(guó)家腎臟疾病臨床醫(yī)學(xué)研究中心全軍腎臟病研究所;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81370828)
【分類號(hào)】：R692

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