發(fā)布時(shí)間：2018-06-20 04:56

  本文選題：前列腺癌 + IL-6(Interleukin-6)�。� 參考：《昆明醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：目的：應(yīng)用分子生物學(xué)及生物信息學(xué)方法,分別在前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3及LNCap中檢測IL-6(Interleukin-6)對程序性死亡因子PDCD4(programmed cell death4)表達(dá)的影響,探討IL-6對PDCD4的靶向調(diào)節(jié)在前列腺癌發(fā)生及發(fā)展過程中的作用及機(jī)制,為前列腺癌,尤其是雄激素非依賴性前列腺癌的治療提供新的思路和理論依據(jù)。 方法： 1、采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR (Q-PCR)檢測前列腺癌激素依賴性細(xì)胞(LNCaP)和激素非依賴性細(xì)胞(PC3)經(jīng)IL-6不同濃度作用后PDCD4的表達(dá)。 2、采用western blotting檢測前列腺癌激素依賴性細(xì)胞(LNCaP)和激素非依賴性細(xì)胞(PC3)經(jīng)IL-6不同濃度作用后PDCD4的表達(dá)。 3、通過瞬時(shí)轉(zhuǎn)染技術(shù)建立低表達(dá)miRNA-21的前列腺癌細(xì)胞系,采用Q-PCR和western blotting檢測經(jīng)IL-6作用后低表達(dá)miRNA-21的前列腺癌細(xì)胞(LNCaP、PC3)中PDCD4的表達(dá)。 結(jié)果： 1、本研究發(fā)現(xiàn)LNCaP細(xì)胞經(jīng)不同濃度IL-6作用24h后,PDCD4在轉(zhuǎn)錄水平均有不同程度下調(diào),經(jīng)Shapiro—Wilk檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布,運(yùn)用oneway-ANOVA檢驗(yàn)得出其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F值=40.321,p0.05),運(yùn)用LSD檢驗(yàn)進(jìn)行組間兩兩比較得出：IL-6濃度為Ong\ml組、IL-6濃度為5ng\ml組與IL-6濃度為10ng\ml組三組間PDCD4表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),用Spearman檢驗(yàn)得出PDCD4的表達(dá)與IL-6濃度呈負(fù)相關(guān)(R=0.967),顯著性檢驗(yàn)(p0.05)。在PC3細(xì)胞中,前列腺癌細(xì)胞經(jīng)不同濃度IL-6作用24h后,PDCD4在轉(zhuǎn)錄水平均有不同程度下調(diào),運(yùn)用on eway-ANOVA檢驗(yàn)得出其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F值=98.464,p0.05),運(yùn)用LSD檢驗(yàn)進(jìn)行組間兩兩比較得出：1L-6濃度為Ong\ml組、IL-6濃度為5ng\ml組與IL-6濃度為10ng\ml組三組間PDCD4表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),用Spearman檢驗(yàn)得出：PDCD4的表達(dá)與IL-6濃度呈負(fù)相關(guān)(R=0.951),顯著性檢驗(yàn)(p0.05)。結(jié)果說明：在前列腺癌細(xì)胞(PC3、LNCaP)中,IL-6在轉(zhuǎn)錄水平下調(diào)PDCD4的表達(dá),并且PDCD4的表達(dá)量與IL-6的濃度呈顯著負(fù)相關(guān)。 2、IL-6對前列腺癌細(xì)胞中PDCD4在翻譯水平表達(dá)的影響：研究發(fā)現(xiàn)LNCaP細(xì)胞經(jīng)不同濃度IL-6作用24h后,PDCD4在翻譯水平均有不同程度下調(diào),運(yùn)用oneway-ANOVA檢驗(yàn)得出其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F值=277.505,p0.05),運(yùn)用LSD檢驗(yàn)進(jìn)行組間兩兩比較得出：IL-6濃度為Ong\ml組、IL-6濃度為5ng\ml組與IL-6濃度為10ng\ml組三組間PDCD4表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),用Spearman檢驗(yàn)得出：PDCD4的表達(dá)與IL-6濃度呈負(fù)相關(guān)(R=0.903),顯著性檢驗(yàn)(p0.05)。在PC3細(xì)胞中,前列腺癌細(xì)胞經(jīng)不同濃度IL-6作用24h后,PDCD4在翻譯水平均有不同程度下調(diào),運(yùn)用oneway-ANOVA檢驗(yàn)得出其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F值=551.403,p0.05),運(yùn)用LSD檢驗(yàn)進(jìn)行組間兩兩比較得出：IL-6濃度為Ong\ml組、IL-6濃度為5ng\ml組與IL-6濃度為10ng\ml組三組間PDCD4表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),用Spearman檢驗(yàn)得出PDCD4的表達(dá)與IL-6濃度呈負(fù)相關(guān)(R=0.946),顯著性檢驗(yàn)(p0.05)。結(jié)果說明：在前列腺癌細(xì)胞(PC3、LNCaP)中,IL-6在翻譯水平下調(diào)PDCD4的表達(dá),并且PDCD4的表達(dá)量與IL-6的濃度呈顯著負(fù)相關(guān)。 3、前列腺癌細(xì)胞(PC3、LNCaP)低表達(dá)miRNA-21后,IL-6對PDCD4在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平表達(dá)的影響：為研究miRNA-21在IL-6對下調(diào)PDCD4表達(dá)過程中的作用,本實(shí)驗(yàn)通過轉(zhuǎn)染anti-miR-21-inhibitor建立低表達(dá)miRNA-21的前列腺癌細(xì)胞系,然后再用濃度10ng\ml的IL-6作用24h,在LNCaP細(xì)胞中,我們發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染anti-miR-21-inhibitor組中PDCD4在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)明顯升高,運(yùn)用oneway-ANOVA檢驗(yàn)其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F值=241.781,p0.05)；同時(shí)在翻譯水平轉(zhuǎn)染anti-miR-21-inhibitor組中PDCD4表達(dá)也明顯升高,運(yùn)用oneway-ANOVA檢驗(yàn)分析得出其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)；運(yùn)用LSD檢驗(yàn)進(jìn)行組間兩兩比較得出：未轉(zhuǎn)染anti-miR-21-inhibitor組與轉(zhuǎn)染anti-miR-21-inhibitor組中PDCD4表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。在PC3細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組中我們也得出相似結(jié)果：轉(zhuǎn)染anti-miR-21-inhibitor組中PDCD4在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)明顯升高,運(yùn)用oneway-ANOVA檢驗(yàn)其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F值=241.781,p0.05)；同時(shí)在翻譯水平轉(zhuǎn)染anti-miR-21-inhibitor組中PDCD4表達(dá)也明顯升高,運(yùn)用oneway-ANOVA檢驗(yàn)分析得出其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)；運(yùn)用LSD檢驗(yàn)進(jìn)行組間兩兩比較得出：未轉(zhuǎn)染anti-miR-21-inhibitor組與轉(zhuǎn)染anti-miR-21-inhibitor組中PDCD4差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。以上結(jié)果說明在前列腺癌細(xì)胞(PC3、LNCaP)中,低表達(dá)miRNA-21后,IL-6在轉(zhuǎn)錄及翻譯水平下調(diào)PDCD4表達(dá)的作用減弱,提示了在前列腺癌中miRNA-21可能是IL-6調(diào)節(jié)PDCD4表達(dá)的中間環(huán)節(jié)。 結(jié)論： 1、在激素依賴型和非激素依賴型前列腺癌細(xì)胞(LNCaP PC3)中,IL-6在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上均下調(diào)了PDCD4的表達(dá),并且PDCD4的下調(diào)程度與IL-6作用濃度呈顯著負(fù)相關(guān) 2、當(dāng)沉默了miRNA-21表達(dá)后,IL-6在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上下調(diào)PDCD4表達(dá)的作用也隨之減弱,這就揭示了在前列腺癌中miRNA-21可能是IL-6調(diào)節(jié)PDCD4表達(dá)的一個(gè)中間環(huán)節(jié),即IL-6可能是通過作用于miRNA-21來調(diào)節(jié)PDCD4的表達(dá)。
[Abstract]:Objective: To investigate the effect of IL-6 (Interleukin-6) on the expression of programmed death factor PDCD4 (programmed cell death4) in prostate cancer cell lines PC-3 and LNCap by using molecular biology and bioinformatics methods, and to explore the role and mechanism of the target regulation of IL-6 to PDCD4 in the development and development of prostate cancer. Cancer, especially the treatment of androgen independent prostate cancer, provides new ideas and theoretical basis.
Method錛，

本文編號：2043050