本文選題：近交系五指山小型豬 + 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞　； 參考：《中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)》2016年12期

【摘要】：目的:分離培養(yǎng)近交系五指山小型豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs),并建立其慢性腎臟病(chronic kidney disease,CKD)模型,體外研究同物種BM-MSCs對(duì)CKD腎纖維化的修復(fù)作用及其可能機(jī)制。方法:采用密度梯度法分離培養(yǎng)BM-MSCs,并從細(xì)胞形態(tài)、表面抗原、分化能力等方面鑒定;采用左側(cè)輸尿管部分梗阻(left partial ureteral obstruction,LPUUO)方法制作CKD模型,并通過B超、單光子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層成像術(shù)(single-photon emission computed tomography,SPECT)、病理染色等評(píng)估;體外實(shí)驗(yàn)分為腎組織與BM-MSCs共培養(yǎng)、腎組織單獨(dú)培養(yǎng)、BM-MSCs單獨(dú)培養(yǎng)3組,體外培養(yǎng)7 d,每天收集3組上清液,酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(hepatocyte growth factor,HGF)累積分泌量。腎組織行HE染色,Masson染色。結(jié)果:分離培養(yǎng)的BM-MSCs表達(dá)抗原CD29,CD90而不表達(dá)CD45,成骨誘導(dǎo)茜素紅染色陽性,成軟骨誘導(dǎo)阿利新藍(lán)染色陽性。LPUUO術(shù)后12周,B超示左腎皮質(zhì)變薄、腎盂積液;SPECT示左腎充盈延遲、梗阻性腎功能受損。上清液HGF累積含量示BM-MSCs+CKD腎組織共同培養(yǎng)組第1,5,6,7天HGF累積分泌量明顯高于CKD腎組織單獨(dú)培養(yǎng)組(P0.05)。HE染色顯示BM-MSCs+CKD腎組織共同培養(yǎng)組和CKD腎組織單獨(dú)培養(yǎng)組中腎均出現(xiàn)不同程度的病變,并隨時(shí)間延長(zhǎng)加重,但CKD腎組織單獨(dú)培養(yǎng)組病變更嚴(yán)重;Masson染色顯示BM-MSCs+CKD腎組織共同培養(yǎng)組術(shù)后第5,6,7天腎組織被染成藍(lán)色的膠原纖維的累計(jì)光密度值明顯低于CKD腎組織單獨(dú)培養(yǎng)組(P0.05)。結(jié)論:近交系五指山小型豬BM-MSCs體外分泌HGF,抑制或延緩CKD纖維化進(jìn)展。
[Abstract]:Objective: to isolate and culture bone marrow mesenchymal stem cells from bone marrow mesenchymal stem cells (BM-MSCs) of the inbred line Wuzhishan miniature pig, and to establish its chronic kidney disease model, and to study the repair effect of BM-MSCs of the same species on renal fibrosis and its possible mechanism in vitro. Methods: BM-MSCs were isolated and cultured by density gradient method and identified from cell morphology, surface antigen and differentiation ability. Single photon emission computed tomography (SPECT) technique was used to evaluate single-photon emission computed tomphography, pathological staining, etc. In vitro, the rats were divided into three groups: renal tissue co-cultured with BM-MSCs, kidney tissue cultured alone and BM-MSCs cultured alone, cultured in vitro for 7 days, and the supernatants of three groups were collected every day. The cumulative secretion of hepatocyte growth factor was determined by enzyme linked immunosorbent assay (Elisa). The renal tissue was stained by HE staining and Masson staining. Results: BM-MSCs expressed CD29 CD90 but did not express CD45. Osteoblast-induced alizarin red staining was positive. Twelve weeks after operation, the left renal cortex was thinned by B-ultrasound, and left renal filling was delayed by SPECT. Obstructive renal function impairment. The accumulation of HGF in supernatant of BM-MSCs CKD group was significantly higher than that of CKD group and CKD tissue culture group on the 7th day of HGF accumulation in BM-MSCs CKD co-culture group and CKD renal tissue co-culture group. The results of HE staining showed that BM-MSCs CKD renal tissue co-culture group and CKD renal tissue culture group had both renal secretion. With varying degrees of disease, And increased over time, However, Masson staining showed that the cumulative optical density of the blue collagen fibers in the renal tissue of BM-MSCs CKD co-cultured group was significantly lower than that of the CKD renal tissue culture group on the 7th day after operation. Conclusion: BM-MSCs from Wuzhishan miniature pig secreted HGF in vitro and inhibited or delayed the progress of CKD fibrosis.
【作者單位】： 中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院附屬�？卺t(yī)院泌尿外科;中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院附屬海口醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室;成都市第二人民醫(yī)院泌尿外科;中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院附屬�？卺t(yī)院B超診斷科;中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院附屬海口醫(yī)院腔鏡中心;
【基金】：國(guó)家國(guó)際科技合作項(xiàng)目(2013DFA51290) 海南省自然科學(xué)基金(20168317) 海南省衛(wèi)生廳項(xiàng)目(瓊衛(wèi)科教[2014]51-47;[2014]51-64)~~
【分類號(hào)】：R692

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本文編號(hào)：2034398