發(fā)布時(shí)間：2018-06-06 14:53

  本文選題：人常染色體顯性多囊腎囊腫上皮細(xì)胞(WT9-7) + 二甲雙胍�。� 參考：《中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院》2017年碩士論文

【摘要】：目的:常染色體顯性多囊腎病(Autosomal dominant polycystic kidney disease,ADPKD)是以腎小管上皮細(xì)胞異常增殖為主要特點(diǎn)的遺傳腎臟病。多囊腎上皮細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞類似,存在糖酵解異常。二甲雙胍和2-脫氧葡萄糖是2種代謝藥,可抑制腫瘤增殖。本研究探討了二甲雙胍和2-脫氧葡萄糖聯(lián)合用藥對(duì)人多囊腎病囊腫上皮細(xì)胞系(WT9-7)增殖和凋亡的影響,并探究了其可能的分子作用機(jī)制。方法:1. WT9-7多囊腎上皮細(xì)胞分為對(duì)照組、2-DG組、MET組和2-DG+MET組。使用CCK-8法、EdU核酸標(biāo)記技術(shù)檢測(cè)各組多囊腎上皮細(xì)胞的增殖能力。2.分析各組多囊腎上皮細(xì)胞中增殖信號(hào)通路蛋白分子AMPKα、mTOR、4E-BP1、p70 S6K、Akt、PI3K、B-Raf、MEK1/2、MAPK(Erk1/2)的活化水平。3.檢測(cè)各組多囊腎上皮細(xì)胞的周期變化及細(xì)胞內(nèi)周期相關(guān)分子CyclinD3、CyclinE1、CDK4、CDK6、P27 的表達(dá)水平。4.分析四組多囊腎上皮細(xì)胞中Caspase-3的活性水平及各組細(xì)胞的凋亡率。5.分析四組多囊腎上皮細(xì)胞的代謝方式并檢測(cè)各組細(xì)胞中糖酵解關(guān)鍵酶己糖激酶(HK2)和氧化磷酸化復(fù)合物Ⅰ(Complex Ⅰ)的表達(dá)水平。結(jié)果:1. CCK-8和EdU核酸標(biāo)記結(jié)果顯示:單獨(dú)使用2-DG和MET均可抑制細(xì)胞增殖,但小劑量雙藥聯(lián)合使用可顯著抑制多囊腎上皮細(xì)胞增殖(P0.001)。2.和對(duì)照組相比,2-DG和MET對(duì)PKA、mTOR、ERK增殖信號(hào)通路分子的活化均有抑制作用,但雙藥聯(lián)合使用效果更為明顯(P0.01)。此外,雙藥聯(lián)合使用顯著抑制多囊腎上皮細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)并抑制細(xì)胞復(fù)制使其停滯在G0/G1期。3.單獨(dú)使用2-DG或MET對(duì)多囊腎上皮細(xì)胞的凋亡影響較小,但雙藥聯(lián)合使用組細(xì)胞內(nèi)Caspase-3的酶活性水平升高(P0.001)且細(xì)胞的早期凋亡率也增加。4. 2-DG可下調(diào)多囊腎上皮細(xì)胞內(nèi)HK2的表達(dá),抑制細(xì)胞的糖酵解水平,減少細(xì)胞內(nèi)ATP的合成量;MET可下調(diào)細(xì)胞中Complex Ⅰ的表達(dá)水平,抑制細(xì)胞的氧化磷酸化水平,同時(shí)也可抑制細(xì)胞中ATP的合成;但雙藥聯(lián)合使用可同時(shí)抑制HK2和Complex Ⅰ的表達(dá),抑制細(xì)胞的兩種代謝方式,顯著降低細(xì)胞內(nèi)ATP的合成(P0.001)。結(jié)論:2-DG和MET雙藥聯(lián)合使用可抑制多囊腎上皮細(xì)胞cAMP-PKA、mTOR、ERK增殖相關(guān)信號(hào)通路分子的活化,抑制細(xì)胞復(fù)制從而抑制細(xì)胞增殖;雙藥聯(lián)合使用也可促進(jìn)多囊腎上皮細(xì)胞中凋亡執(zhí)行酶Caspase-3的活化,并促進(jìn)細(xì)胞發(fā)生早期凋亡;此外,雙藥聯(lián)合使用可抑制多囊腎上皮細(xì)胞的糖酵解和線粒體氧化磷酸化兩種代謝方式,顯著抑制ATP的產(chǎn)生,促進(jìn)能量感受器AMPK的活化,下調(diào)mTOR增殖信號(hào)通路分子的活化水平,抑制WT9-7多囊腎上皮細(xì)胞增殖;由此推斷:2-DG和MET雙藥聯(lián)合使用可通過(guò)調(diào)控細(xì)胞的代謝和細(xì)胞內(nèi)多條增殖信號(hào)通路的活化,抑制多囊腎上皮細(xì)胞過(guò)度增殖,并促進(jìn)細(xì)胞凋亡,共同抑制囊泡增大。
[Abstract]:Objective : To investigate the effects of metformin and 2 - deoxyglucose on proliferation and apoptosis of human polycystic kidney disease cyst epithelial cells ( WT9 - 7 ) . The expression levels of Caspase - 3 in all groups of polycystic kidney epithelial cells were determined by CCK - 8 method and EdU nucleic acid labeling technique . Conclusion : The combination of 2 - DG and MET can inhibit the expression of ATP in the cells of polycystic kidney epithelial cells .
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R692

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本文編號(hào)：1987034