本文選題：前列腺癌 + CTBP2　； 參考：《天津醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：目的 明確CTBP2表達水平及位置改變對前列腺癌細(xì)胞體外生物學(xué)行為的影響,并初步探討其分子機制。 方法 運用免疫組織化學(xué)檢測CTBP2在前列腺增生與前列腺癌組織中的表達水平及位置改變；分別用westernblot與RT-qPCR檢測CTBP2在正常前列腺細(xì)胞RWPE-1與前列腺癌細(xì)胞PC3中的蛋白水平與mRNA表達量,利用免疫熒光及激光共聚焦顯微鏡檢測CTBP2在這些細(xì)胞中的位置改變;構(gòu)建CTBP2表達質(zhì)粒,并用其轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞,經(jīng)擴增后提取高濃度質(zhì)粒,隨后將其轉(zhuǎn)染入PC3細(xì)胞中,經(jīng)G418篩選及單克隆細(xì)胞培養(yǎng)后獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染株；分別應(yīng)用RT-qPCR及Westernblot驗證轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中CtBP2的mRNA表達量以及蛋白水平；使用MTT法檢測CTBP2高表達前列腺癌細(xì)胞增殖能力變化,Transwell法檢測CTBP2高、低表達前列腺癌細(xì)胞侵襲能力變化,磷脂酰絲氨酸外翻法分析(Annexin V)檢測CTBP2高、低表達前列腺癌細(xì)胞凋亡改變;利用RT-qPCR檢測可能受CTBP2調(diào)節(jié)的侵襲相關(guān)分子mRNA表達量,進一步運用westernblot驗證RT-qRCR所得結(jié)果及該效應(yīng)分子下游靶蛋白的改變。整理數(shù)據(jù),所有需要統(tǒng)計分析的實驗結(jié)果均運用SPSS軟件進行統(tǒng)計分析。 結(jié)果 前列腺癌組織中CTBP2蛋白水平增加,且與腫瘤分期、gleason評分成正相關(guān),CTBP2在前列腺增生組織及局限性前列腺癌組織中主要位于細(xì)胞核中,而在轉(zhuǎn)移性前列腺癌組織胞漿中也出現(xiàn)；與正常前列腺細(xì)胞RWPE-1相比,前列腺癌細(xì)胞PC3中CTBP2mRNA表達量與蛋白水平增加,在RWPE-1中CTBP2主要位于細(xì)胞核中,而其在PC3細(xì)胞核與細(xì)胞漿中均表達；取CTBP2表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞,經(jīng)擴增后成功提取高濃度質(zhì)粒；通過脂質(zhì)體介導(dǎo)將CTBP2表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入PC3細(xì)胞,經(jīng)G418篩選與單克隆細(xì)胞培養(yǎng)獲得CTBP2穩(wěn)定表達細(xì)胞株,并驗證該細(xì)胞株CTBP2穩(wěn)定高表達；細(xì)胞生物學(xué)行為檢測表明CTBP2高表達可顯著提高前列腺癌細(xì)胞侵襲能力,但對細(xì)胞增殖與凋亡無顯著影響；而CTBP2低表達可顯著降低細(xì)胞侵襲能力,增加細(xì)胞凋亡。RT-qPCR發(fā)現(xiàn)CTBP2低表達可降低前列腺癌細(xì)胞中ROCK1表達,westernblot檢測也發(fā)現(xiàn)CTBP2低表達細(xì)胞中ROCK1蛋白水平降低,這與RT-qRCR結(jié)果一致。Westernbolt檢測發(fā)現(xiàn)ROCK1下游信號分子p-MLC與c-Myc蛋白水平也降低,且c-Myc下游分子HSPC111蛋白含量降低。 結(jié)論 CTBP2表達水平及位置改變可影響前列腺癌細(xì)胞體外生物學(xué)行為,前列腺癌細(xì)胞中可能存在CTBP2-ROCK通路,其可能是促進前列腺癌細(xì)胞侵襲的機制之一。
[Abstract]:Purpose To investigate the effect of CTBP2 expression level and location on the biological behavior of prostate cancer cells in vitro, and to explore its molecular mechanism. Method Immunohistochemistry was used to detect the expression and location of CTBP2 in prostatic hyperplasia and prostate cancer, and westernblot and RT-qPCR were used to detect the protein level and mRNA expression of CTBP2 in RWPE-1 and PC3, respectively. The position of CTBP2 in these cells was detected by immunofluorescence and laser confocal microscopy, the expression plasmid of CTBP2 was constructed and transformed into the competent cells, the high concentration plasmid was extracted after amplification, and then transfected into PC3 cells. The stable transfection strain was obtained by G418 screening and monoclonal cell culture, and the mRNA expression and protein level of CtBP2 in transfected cells were verified by RT-qPCR and Westernblot, respectively. The proliferative ability of prostate cancer cells with high expression of CTBP2 was detected by MTT assay. The invasion ability of prostate cancer cells with low expression of CTBP2 was detected by Transwell method. The changes of apoptosis of prostate cancer cells with low expression were detected by Annexin V and high CTBP2 by Phosphatidyl serine valgus assay. RT-qPCR was used to detect the mRNA expression of invasion-related molecules which may be regulated by CTBP2. Westernblot was used to verify the results of RT-qRCR and the changes of downstream target proteins of the effector molecule. All the experimental results that need statistical analysis are analyzed by SPSS software. Result The level of CTBP2 protein was increased in prostate cancer tissues and positively correlated with tumor staging. CTBP2 was mainly located in the nucleus of prostate hyperplasia and localized prostate cancer tissues, but also in the cytoplasm of metastatic prostate cancer. Compared with the normal prostatic cell RWPE-1, the expression of CTBP2mRNA and protein in PC3 of prostate cancer cell increased. In RWPE-1, CTBP2 was mainly expressed in the nucleus, but it was expressed in the nucleus and cytoplasm of PC3. After amplification, the high concentration plasmid was extracted and the CTBP2 expression plasmid was transfected into PC3 cells mediated by liposome. The stable expression of CTBP2 was obtained by G418 screening and monoclonal cell culture, and the stable expression of CTBP2 in the cell line was verified. The results of cell biological behavior showed that the high expression of CTBP2 could significantly increase the invasive ability of prostate cancer cells, but had no significant effect on cell proliferation and apoptosis, while the low expression of CTBP2 could significantly reduce the invasive ability of prostate cancer cells. Increasing apoptosis. RT-qPCR found that low expression of CTBP2 could decrease ROCK1 expression in prostate cancer cells. Western blot analysis also found that ROCK1 protein level in CTBP2 low expression cells decreased, which was consistent with the results of RT-qRCR. Western bolt detection showed that the lower ROCK1 signal molecules p-MLC and c-Myc protein levels were also decreased. The content of HSPC111 protein in the downstream of c-Myc was decreased. Conclusion The change of CTBP2 expression level and location may affect the biological behavior of prostate cancer cells in vitro. There may be a CTBP2-ROCK pathway in prostate cancer cells, which may be one of the mechanisms to promote the invasion of prostate cancer cells.
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R737.25

【共引文獻】

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本文編號：1959617