本文選題：前列腺癌 + 間充質干細胞　； 參考：《天津醫(yī)科大學》2017年碩士論文

【摘要】：目的前列腺癌發(fā)展到晚期階段常伴有骨骼的轉移,嚴重影響著患者的生活質量。本研究通過體外細胞實驗研究前列腺癌好發(fā)骨轉移的原因和機制。通過研究骨髓間充質干細胞對于前列腺癌發(fā)生骨轉移的作用機制,進一步尋找臨床預防、治療前列腺癌骨轉移的新對策,從而采取相應的干預措施抑制前列腺癌的復發(fā)和轉移,最終提高患者的生活質量。方法1.(1)提取小鼠骨髓,根據細胞貼壁生長方式不同,通過全骨髓培養(yǎng)的方法分離并純化小鼠骨髓間充質干細胞,培養(yǎng)過程中觀察細胞的形態(tài)學變化。(2)在體外通過誘導劑對間充質干細胞向脂肪細胞、成骨細胞的定向誘導,再行油紅O染色、茜素紅染色,對間充質干細胞進行鑒定。(3)收集培養(yǎng)間充質干細胞的上清液,標記記為間充質干細胞條件培養(yǎng)基(MSC-CM)。用MSC-CM培養(yǎng)對數生長期的前列腺癌細胞C42細胞1-5天,通過MTT的方法檢測各細胞培養(yǎng)孔的吸光值,從而繪制出生長曲線。(4)細胞劃痕實驗,觀察充質干細胞條件培養(yǎng)基處理C42細胞48個小時后細胞的爬片情況,使用Image J軟件計算培養(yǎng)細胞的劃痕面積。Transwell實驗,在上室加入一定數量細胞,下室加入適量的充質干細胞條件培養(yǎng)基,培養(yǎng)24小時后,通過Giemsa染色觀察轉移至下室細胞的數量。2.(1)利用免疫磁珠細胞分選的方法(MACS)分選出CD133+前列腺癌干細胞,通過RT-PCR和Western Blot實驗進一步驗證細胞的干性。(2)用DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)CD133+C42細胞1-5天。通過MTT的方法檢測各細胞培養(yǎng)孔的吸光值,繪制生長曲線。(3)用間充質干細胞條件培養(yǎng)基(MSC-CM)培養(yǎng)前列腺癌干細胞CD133+C42,分別在第2天及第4天后提取細胞的RNA及蛋白。通過RT-PCR和Western Blot實驗觀察前列腺癌干細胞表面標志物CD133、CD44的表達情況。結果1.(1)間充質干細胞在培養(yǎng)24小時后開始貼壁,可見短梭形、圓形以及多角形的細胞貼壁生長。3天后細胞突起長短不一。細胞生長第8天細胞密集生長。(2)間充質干細胞誘導形成的脂肪細胞脂質聚集,經過油紅O染色,脂滴被染色橘紅色,細胞核呈淺藍色。經誘導形成的成骨細胞形態(tài)為多角形,體積增大。經過茜素紅染色,產生深紅色化合物。(3)生長曲線結果可見MSC-CM組的細胞增殖能力明顯增加。(4)細胞劃痕實驗顯示MSC-CM組細胞的劃痕面積明顯大于對照組。Transwell實驗顯示MSC-CM組細胞的數量明顯大于對照組。2.(1)免疫磁珠細胞分選法(MACS)分選出CD133+C42,通過基因和蛋白水平對其檢測,結果符合腫瘤干細胞的生物學特性。(2)MTT實驗結果顯示,MACS分選的前列腺癌干細胞CD133+C42在體外的增殖能力與未分選的前列腺癌細胞C42比較有明顯增強。(3)對照組CD133、CD44表達逐漸減弱,而MSC-CM實驗組能夠穩(wěn)定表達。結論1.骨髓間充質干細胞(MSCs)能夠顯著促進前列腺癌細胞的增殖、遷移和侵襲能力。2.骨髓間充質干細胞(MSCs)能夠維持前列腺癌干細胞干性的穩(wěn)定表達。
[Abstract]:Objective Advanced stage of prostate cancer is often accompanied by bone metastasis, which seriously affects the quality of life of patients. In this study, we studied the cause and mechanism of bone metastasis of prostate cancer by in vitro cell experiment. By studying the mechanism of bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) on bone metastasis of prostate cancer, we can find a new strategy of clinical prevention and treatment of bone metastasis of prostate cancer, and take corresponding intervention measures to suppress the recurrence and metastasis of prostate cancer. Ultimately improve the patient's quality of life. Methods 1. Mouse bone marrow was isolated and purified by whole bone marrow culture. In vitro, mesenchymal stem cells were induced to adipocytes, osteoblasts were induced by oil red O staining and alizarin red staining. The supernatant of cultured mesenchymal stem cells (MSCs) was collected and labeled as MSCs conditioned medium (MSC-CMM). C42 cells in logarithmic growth phase were cultured with MSC-CM for 1-5 days. The absorptivity of each cell culture pore was measured by MTT method, and the growth curve was drawn. To observe the climbing of C42 cells after 48 hours treatment with the conditioned medium of MSCs, the scratch area of cultured cells was calculated by Image J software, and a certain number of cells were added to the upper chamber. After 24 hours of culture, the number of CD133 prostate cancer cells transferred to the lower chamber was observed by Giemsa staining. The CD133 prostate cancer stem cells were isolated by immunomagnetic bead cell sorting. The dryness of CD133 C42 cells was further verified by RT-PCR and Western Blot experiments. CD133 C42 cells were cultured on DMEM medium for 1-5 days. MTT method was used to detect the absorptivity of each cell culture pore, and the growth curve was drawn. 3) Prostate cancer stem cells (CD133 C42) were cultured in MSCs conditioned medium (MSC-CM). The RNA and protein were extracted on the 2nd and 4th day, respectively. The expression of CD133 and CD44 on prostate cancer stem cells was observed by RT-PCR and Western Blot. Results 1. The mesenchymal stem cells began to adhere to the wall after 24 hours of culture. The short fusiform, round and polygonal cells had different cell processes after 3 days of adherent growth. 2. On the 8th day of cell growth, lipid aggregation of adipocytes induced by mesenchymal stem cells (MSCs) was induced. Lipid droplets were stained orange with light blue nuclei after oil red O staining. The induced osteoblasts were polygonal in shape and enlarged in volume. Dyed with alizarin red, The result of the growth curve showed that the cell proliferation ability of MSC-CM group was obviously increased. (4) Cell scratch test showed that the cell scratch area of MSC-CM group was obviously larger than that of control group. Transwell experiment showed that the number of cells in MSC-CM group was obviously larger than that in MSC-CM group. CD133 C42was isolated by immunomagnetic bead cell sorting method and detected by gene and protein levels. Results according to the biological characteristics of tumor stem cells, the results of MTT assay showed that the proliferation ability of prostate cancer stem cell CD133 C42 isolated by Macs in vitro was significantly enhanced compared with that of non-differentiated prostate cancer cell line C42) the expression of CD133pCD44 in the control group was gradually decreased. The expression of MSC-CM was stable in the experimental group. Conclusion 1. Bone marrow mesenchymal stem cells (MSCs) can significantly promote the proliferation, migration and invasion of prostate cancer cells. Bone marrow mesenchymal stem cells (MSCs) can maintain the dry expression of prostate cancer stem cells.
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R737.25

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本文編號：1921251