本文選題：腎病綜合征 + 晝夜節(jié)律�。� 參考：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2017年碩士論文

【摘要】：[背景與目的]生物鐘系統(tǒng)在維持機(jī)體外周器官正常的生理功能晝夜節(jié)律表達(dá)具有重要的意義。本團(tuán)隊(duì)前期研究證實(shí)腎臟疾病時(shí)腎臟生物鐘系統(tǒng)被破壞,影響腎臟正常的生理功能,參與血壓和尿鈉晝夜節(jié)律紊亂的分子發(fā)病機(jī)制。在臨床上,腎病患者不僅僅表現(xiàn)為血尿、蛋白尿或腎功能的異常,還出現(xiàn)廣泛的腎外臟器功能紊亂,如血脂異常、貧血、骨病及心腦血管并發(fā)癥,部分還表現(xiàn)為心腎綜合征、肝腎綜合征等。本研究擬觀(guān)察在腎病狀態(tài)下腎外其他外周臟器局部生物鐘系統(tǒng)的節(jié)律表達(dá)情況,進(jìn)而探討生物鐘系統(tǒng)在腎臟與其他臟器之間的Crosstalk對(duì)話(huà)的媒介作用。[研究方法]一、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分:將雄性SD大鼠(8周齡)隨機(jī)分為兩組,腎病組尾靜脈注射阿霉素(6.5 mmg/kg),對(duì)照組給予等量的生理鹽水。監(jiān)測(cè)大鼠動(dòng)態(tài)血壓,每4 h每組處死3只大鼠留取血標(biāo)本和心臟、肝臟組織,測(cè)定肝功能、血脂、血糖及血漿腎素活性、醛固酮濃度及血管緊張素濃度變化。應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)心臟和肝臟核心生物鐘基因及下游各臟器特有功能相關(guān)鐘控基因的mRNA表達(dá)。應(yīng)用傅里葉分析合并逐步回歸的分析方法進(jìn)行節(jié)律分析。二、臨床上納入我院腎內(nèi)科住院腎穿病理提示膜性腎病的中青年患者及健康對(duì)照者,監(jiān)測(cè)24h動(dòng)態(tài)血壓,同步留取每4h段尿,采用超速離心法提取尿外泌體,應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR的方法檢測(cè)尿外泌體中核心生物鐘基因及腎臟鐘控基因EVaC、NCC和NHE3的mRNA表達(dá)結(jié)果,進(jìn)行節(jié)律分析。三、從GEO數(shù)據(jù)庫(kù)中下載數(shù)據(jù)腎病患者和健康對(duì)照外周血單個(gè)核細(xì)胞和腎組織的基因芯片表達(dá)譜數(shù)據(jù),利用R軟件包對(duì)基因表達(dá)差異表達(dá)分析,并選取生物鐘基因及鐘控基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析。[研究結(jié)果]一、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分:1、腎病大鼠血壓晝夜節(jié)律紊亂伴隨心臟生物鐘系統(tǒng)破壞(1)對(duì)照組正常大鼠的血壓具有晝夜節(jié)律(P0.05),但腎病大鼠收縮壓的節(jié)律周期完全消失。(2)對(duì)照組大鼠心臟生物鐘基因CLOCK、BMAL1、Cry1、Cry2、Per1、Per2的mRNA表達(dá)具有晝夜節(jié)律的特點(diǎn)(均P0.05)。而腎病大鼠心臟Cry1基因的節(jié)律周期從原有的12h變成(4.8+6)h(P0.05),其余的核心鐘基因節(jié)律消失(均P0.05)。(3)對(duì)照組大鼠血漿腎素活性、醛固酮濃度分別呈12h和24h節(jié)律(均P0.05);而腎病大鼠血漿腎素、醛固酮表達(dá)下降,節(jié)律完全消失(均P0.05)。2、腎病大鼠肝臟生物鐘及鐘控基因節(jié)律表達(dá)與血脂異常相關(guān)(1)對(duì)照組大鼠的TC、TG、AST、ALT濃度分別具有周期震蕩節(jié)律性,分別呈12h、24h,24h和24h的周期節(jié)律(均P0.05);而腎病組大鼠的上述節(jié)律性紊亂,TG的濃度節(jié)律從原有的24h變成12h,而TC、AST、ALT的濃度節(jié)律表達(dá)完全消失(均P0.05);(2)對(duì)照組大鼠的肝臟核心鐘基因均出現(xiàn)“晝高夜低”的節(jié)律表達(dá),除了基因Per1節(jié)律為4.8h,其余的鐘基因節(jié)律均為24h;腎病大鼠核心鐘基因Cry1和Per2僅出現(xiàn)峰值的改變,仍然維持24h的晝夜節(jié)律,而其余的鐘基因出現(xiàn)明顯的節(jié)律改變;(3)腎病大鼠Per1鐘基因下游肝臟特有血脂代謝、膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)鐘控基因LXR、Srebp-1、C1和CYP7表達(dá)晝夜節(jié)律發(fā)生紊亂(均P0.05)。二、臨床研究部分:1、腎病患者尿外泌體腎臟特異性鐘控基因的節(jié)律表達(dá)研究(1)健康對(duì)照組的尿外泌體中核心生物鐘基因的表達(dá)具有晝夜節(jié)律的特點(diǎn)(均P0.05)。腎病患者尿外泌體中BMAL1基因的表達(dá)仍有周期震蕩的特點(diǎn),但節(jié)律周期從原有的8h變成了(4.8+6)h;其余的核心鐘基因CLOCK、Cry1、Cry2、Per1、Per2 mRNA表達(dá)節(jié)律完全消失(均P0.05)。(2)健康對(duì)照組尿外泌體中腎臟特有水鈉轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)鐘控基因ENaC、NCC和NHE3的mRNA表達(dá)具有晝夜節(jié)律的特點(diǎn)(均P0.05);節(jié)律周期分別為(4.8+12)h、(4.8+8)h和24h;而腎病患者的尿外泌體中的ENaC、NCC和NHE3晝夜節(jié)律完全消失(均P0.05)。2、腎病患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)和腎組織鐘基因的表達(dá)差異分析(1)對(duì)基因芯片數(shù)據(jù)庫(kù)分析,膜性腎病患者外周血PBMC的核心生物鐘基因CLOCK、BMAL1、Cry1、Per1、Dec1和Dec2的表達(dá)均較健康對(duì)照者降低(均P0.05),Cry2和Per2也呈現(xiàn)減少趨勢(shì),但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)數(shù)據(jù)庫(kù)中腎病患者腎組織活檢標(biāo)本和癌旁腎組織標(biāo)本中核心生物鐘基因表達(dá)分析,MCD、MN、FSGS患者腎組織除了Dec1鐘基因的表達(dá)與對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),其余核心鐘基因CLOCK、BMAL1、Cry1、Cry2、Per1、Per2和Dec2表達(dá)均升高(均P0.05);鐘控基因NCC、ENCC表達(dá)降低,而NHE3、腎素及血管加壓素受體基因表達(dá)升高(均P0.05);但各個(gè)腎病組之間比較并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(3)生物信息學(xué)分析:將心、肝、腎組織鐘基因進(jìn)行聚類(lèi)分析,構(gòu)建PPI可視化網(wǎng)絡(luò),發(fā)現(xiàn)這些基因聚為4大類(lèi)基因集團(tuán),核心生物鐘系統(tǒng)為相互間關(guān)系最密切的基因集,各臟器自身功能基因交互關(guān)系密切,不同臟器功能基因集團(tuán)之間具有聯(lián)系。[結(jié)論]1、腎病狀態(tài)下,大鼠固有的保守的腎臟、心臟以及肝臟外周組織生物鐘系統(tǒng)被破壞,與腎病大鼠呈現(xiàn)的血壓、尿鈉、轉(zhuǎn)氨酶和血脂的晝夜節(jié)律紊亂表現(xiàn)具有協(xié)同一致性。腎臟疾病導(dǎo)致腎臟生物鐘系統(tǒng)受損,同時(shí)累及其他外周臟器生物鐘系統(tǒng)和生理功能晝夜節(jié)律紊亂,生物鐘系統(tǒng)可能為疾病狀態(tài)下外周組織臟器Crosstalk的潛在媒介。2、健康志愿者尿外泌體中核心生物鐘基因及腎臟特異的鐘控基因都具有晝夜節(jié)律表達(dá)的特點(diǎn),證實(shí)監(jiān)測(cè)尿外泌體生物鐘基因表達(dá)可為我們提供研究人類(lèi)腎臟疾病時(shí)間生物學(xué)的簡(jiǎn)便、可行、可靠手段。腎病患者尿外泌體的核心生物鐘基因及腎臟功能鐘控基因ENaC、NCC和NHE3的晝夜節(jié)律消失,進(jìn)一步說(shuō)明了人類(lèi)腎臟器質(zhì)性損害可導(dǎo)致腎臟生物鐘系統(tǒng)紊亂。3、數(shù)據(jù)庫(kù)中腎病患者PBMC和腎組織中的生物鐘系統(tǒng)鐘基因表達(dá)與正常對(duì)照相比也出現(xiàn)了顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,也佐證了在腎病狀態(tài)下,人外周血和腎組織的生物鐘系統(tǒng)出現(xiàn)異常。4、生物信息學(xué)分析證實(shí)人類(lèi)生物鐘基因編碼蛋白與心肝腎功能相關(guān)鐘控基因編碼蛋白存在相關(guān)性,生物鐘系統(tǒng)可能是腎病狀態(tài)下心肝腎外周組織臟器之間的Crosstalk的潛在媒介。
[Abstract]:In this study , we studied the mechanism of circadian rhythm of renal clock system in kidney and other organs . The results of this study were as follows : 1 . The results of this study were as follows : 1 . The blood pressure of renal clock gene and renal clock control gene EVaC , NCC and NHE3 were measured by means of real - time quantitative PCR . ( 2 ) The mRNA expression of CLOCK , BMAL1 , Cry1 , Cry2 , Per1 , Per2 in the heart of the control group had the characteristics of circadian rhythm ( P0.05 ) . ( 1 ) The changes of blood plasma renin activity and aldosterone in the control group were 12h , 24h , 24h and 24h respectively ( P0.05 ) . ( 2 ) The expression of CLOCK , BMAL1 , Cry1 , Per1 , Per1 , Per2 and Dec2 in peripheral blood mononuclear cells ( PBMC ) and peripheral blood mononuclear cells ( NHE3 ) of patients with nephrotic syndrome were all higher than those in control group ( P0.05 ) . The expression of CLOCK , BMAL1 , Cry1 , Per1 , Dec1 and Dec2 in peripheral blood mononuclear cells ( PBMC ) of patients with nephrotic syndrome were all increased ( P0.05 ) . The circadian rhythm of human renal clock system and renal function clock - control gene ENaC , NCC and NHE3 have been shown to be associated with renal clock system and kidney function clock control gene ENaC , NCC and NHE3 .
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R692

【參考文獻(xiàn)】

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1 張瑞雨;牟利軍;李雪梅;李學(xué)旺;秦巖;;腎臟局部生物鐘系統(tǒng)與水鹽排泄晝夜節(jié)律的時(shí)相關(guān)系[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);2015年06期

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1 張瑞雨;慢性腎臟病大鼠尿鈉晝夜節(jié)律紊亂的時(shí)間生物學(xué)機(jī)制初探[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

2 牟利軍;慢性腎臟病血壓節(jié)律紊亂及其影響因素的初步研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

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本文編號(hào)：1911970