本文選題：附睪 + 模式識(shí)別受體��； 參考：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2016年博士論文

【摘要】：背景與目的：多種病原體(包括細(xì)菌、病毒、寄生蟲)感染可誘導(dǎo)附睪炎,干擾附睪功能,是損害男性生育能力的重要病因。其中尿路致病性大腸桿菌(Uropathogenic E. coli, UPEC)、腮腺炎病毒(Mumps Virus, MuV)、皰疹病毒(Herpes simplex virus 2, HSV-2)是誘導(dǎo)附睪炎的主要病原體,然而這些病原體誘導(dǎo)附睪炎的機(jī)制尚不清楚,本論文以小鼠為模型,旨在研究主要病原體誘導(dǎo)的附睪天然免疫反應(yīng)的機(jī)制。材料與方法：利用TLR2-/-、TLR4-/-、TLR5-/-小鼠模型,結(jié)合RNA干擾技術(shù)研究相關(guān)基因的功能。體外分離與培養(yǎng)原代附睪上皮細(xì)胞(epididymal epithelial cells, EECs),用UPEC、MuV與HSV-2感染細(xì)胞。利用Real-time RT-PCR實(shí)時(shí)定量分析基因的mRNA表達(dá)水平,Western blot檢測基因產(chǎn)物的蛋白水平,免疫組化染色定位蛋白的細(xì)胞分布,ELISA檢測細(xì)胞因子的分泌。附睪原位注射病原體模擬體內(nèi)感染,分析附睪抵御病原體的天然免疫反應(yīng)。結(jié)果：EEC表達(dá)多個(gè)模式識(shí)別受體,其中TLR4、TLR5可以被UPEC激活并介導(dǎo)EEC的天然免疫反應(yīng)。TLR2和RIG-I可以被MuV激活,DNA感受器DAI、 p204、cGAS可以被HSV-2誘導(dǎo)上調(diào)表達(dá)并激活,介導(dǎo)EEC的天然抗病毒反應(yīng)。UPEC和MuV都可以顯著誘導(dǎo)促炎性細(xì)胞因子、趨化因子和Ⅰ型干擾素(IFN-α與IFN-p)的表達(dá)上調(diào),而HSV-2僅有效上調(diào)IFN-α與IFN-β 的表達(dá)。在TLR4-/-、TLR5-/-EEC中,附睪抵御UPEC的天然免疫反應(yīng)都明顯低于野生(WT)細(xì)胞,說明TLR4與TLR5協(xié)同介導(dǎo)UPEC誘導(dǎo)的反應(yīng)。將TLR2敲除或siRNA沉默RIG-I后,EEC抗MuV病毒的反應(yīng)也都明顯降低,說明TLR2及RIG-I協(xié)同介導(dǎo)MuV誘導(dǎo)的天然抗病毒反應(yīng)。利用siRNA敲低DNA感受器p204、DAI、cGAS時(shí),細(xì)胞抗HSV-2病毒能力明顯減弱,說明DNA感受器協(xié)同介導(dǎo)HSV-2誘導(dǎo)EEC的天然病毒反應(yīng)。結(jié)論：本論文揭示了UPEC,MuV與HSV-2誘導(dǎo)EEC天然免疫反應(yīng)的模式識(shí)別受體及其信號(hào)通路,說明附睪組織特異細(xì)胞可以調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng),具有抵抗病原體的天然防御能力。
[Abstract]:Background & objective: infection of many pathogens (including bacteria, viruses and parasites) can induce epididymitis and interfere with epididymal function. Among them, Uropathogenic Escherichia coli, Uropathogenic Escherichia coli, mumps virus Mumps virus, Mumps virus, herpesvirus Herpes simplex virus 2, HSV-2) are the main pathogens to induce epididymitis. However, the mechanism of these pathogens in inducing epididymitis is still unclear. The aim of this study was to study the mechanism of epididymal innate immune response induced by major pathogens. Materials and methods: the function of related genes was studied by using TLR2-P -TLR4-P -TLR5-r-m- mouse model and RNA interference technique. Primary epididymal epithelial cells (EECs) were isolated and cultured in vitro. The cells were infected with UPEC-MuV and HSV-2. The mRNA expression level of the gene was quantitatively analyzed by Real-time RT-PCR and the protein level of the gene product was detected by Western blot. The cell distribution of the protein was determined by immunohistochemical staining and the cytokine secretion was detected by Elisa. In situ injection of pathogens into epididymis simulates in vivo infection and analyzes the innate immune response of epididymis against pathogens. Results TLR4TLR5 could be activated by UPEC and mediated the innate immune response of EEC. TLR2 and RIG-I could be activated by MuV, and p204cGAS could be up-regulated and activated by HSV-2. The natural antiviral response mediated by EEC. UPEC and MuV could significantly induce the expression of pro-inflammatory cytokines, chemokines and IFN- 偽 and IFN-p-), while HSV-2 could only effectively upregulate the expression of IFN- 偽 and IFN- 尾. In TLR4-r-TLR5-EEC, the innate immune response of epididymis to UPEC was significantly lower than that of wild WT-cells, indicating that TLR4 and TLR5 co-mediated the UPEC induced response. After TLR2 knockout or siRNA silencing RIG-I, the antiviral response of EEC was also significantly decreased, indicating that TLR2 and RIG-I co-mediated the MuV induced natural antiviral response. When siRNA knocked down the DNA receptor p204DIAI CGAS, the ability of the cells to resist HSV-2 virus was obviously weakened, indicating that the DNA receptor co-mediated the natural viral response of EEC induced by HSV-2. Conclusion: this study revealed the pattern recognition receptor and its signal pathway of EEC innate immune response induced by HSV-2 and muv, which indicated that specific cells of epididymis could regulate inflammatory response and possess natural defense ability against pathogens.
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R697.22

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本文編號(hào)：1900664