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發(fā)布時間:2018-05-09 15:10

  本文選題:膀胱癌 + MEXA基因; 參考:《解剖學報》2017年06期


【摘要】:目的探討通過慢病毒介導的RNA干擾技術抑制MEX3A基因表達對膀胱癌細胞增殖和凋亡的影響。方法應用GV115載體構(gòu)建針對MEX3A基因的shRNA慢病毒載體,轉(zhuǎn)染包裝細胞293T產(chǎn)生慢病毒顆粒,收集并滴度測定后轉(zhuǎn)染5637膀胱癌細胞,實驗組轉(zhuǎn)染MEX3A-shRNA慢病毒,對照組轉(zhuǎn)染陰性對照慢病毒;實時定量PCR(Real-time PCR)檢測MEX3A基因敲減效率;慢病毒轉(zhuǎn)染3 d后,使用Celigo連續(xù)細胞計數(shù)5d檢測細胞生長;慢病毒轉(zhuǎn)染5d后,進行膜聯(lián)蛋白V(Annexin V)染色并用流式細胞術檢測細胞凋亡。結(jié)果成功構(gòu)建MEX3AshRNA慢病毒載體以及穩(wěn)定抑制MEX3A表達的細胞株,MEX3A基因敲減效率達到74%;Celigo細胞計數(shù)檢測顯示,與對照組相比,實驗組5637細胞的增殖速率受到顯著抑制;流式細胞術檢測顯示,實驗組發(fā)生凋亡的5637細胞顯著增加。結(jié)論 MEX3A基因促進膀胱癌細胞的增殖,抑制膀胱癌細胞的凋亡。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of lentivirus-mediated RNA interference on the proliferation and apoptosis of bladder cancer cells. Methods the shRNA lentivirus vector targeting MEX3A gene was constructed with GV115 vector. Lentivirus particles were produced by transfection of packaging cells 293T. After collecting and titer determination, 5637 bladder cancer cells were transfected with lentivirus. The experimental group transfected MEX3A-shRNA lentivirus and the control group transfected negative control lentivirus. MEX3A gene knockout efficiency was detected by real-time quantitative PCR(Real-time PCR, cell growth was detected by Celigo continuous cell count for 5 days after lentivirus transfection for 3 days, and cell apoptosis was detected by flow cytometry with V(Annexin V staining after 5 days of lentivirus transfection. Results the successful construction of MEX3AshRNA lentivirus vector and the knockdown efficiency of MEX3A gene reached 74%. Compared with the control group, the proliferation rate of 5637 cells in the experimental group was significantly inhibited. Flow cytometry showed that the number of apoptotic 5637 cells in the experimental group was significantly increased. Conclusion MEX3A gene can promote the proliferation of bladder cancer cells and inhibit the apoptosis of bladder cancer cells.
【作者單位】: 中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院超聲科;
【基金】:國家自然科學基金(81371552)
【分類號】:R737.14

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本文編號:1866499



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