本文選題：前列腺癌 + 前列腺干細胞抗原��； 參考：《廣州醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：【研究背景】前列腺干細胞抗原(prostate stem cell antigen,PSCA)基因編碼一個由123個氨基酸組成的糖蛋白,與SCA-2一樣,均屬于細胞表面葡萄糖磷酯酰肌醇(glycosyl phosphatidylinositol,GPI)錨定抗原(Thy-1/Ly-6基因)家族成員。目前相關(guān)研究表明PSCA具有很高的前列腺癌組織特異性,并且在局部進展性前列腺癌組織以及前列腺癌骨轉(zhuǎn)移灶中高表達,提示PSCA可能在前列腺癌進展中起重要作用。然而,其具體生物學(xué)機制仍不清楚�！灸康摹垦芯縋SCA在前列腺癌細胞增殖中的作用,并初步探討其對周期凋亡的調(diào)控機制�！静牧虾头椒ā壳捌谝殉晒�(gòu)建的穩(wěn)定沉默PSCA的DU145細胞株及穩(wěn)定過表達PSCA的LNCAP細胞株。30只小鼠隨機分為6組,每組5只:DU145,DU145-NC(穩(wěn)定轉(zhuǎn)染無關(guān)序列的DU145細胞),DU145 shRNA(穩(wěn)定沉默PSCA的DU145細胞)、LNCAP,LNCAP-vector(穩(wěn)定轉(zhuǎn)染空載體的的LNCAP細胞),LNCAP PSCA(穩(wěn)定過表達PSCA的LNCAP細胞)。通過MTS、平板克隆形成實驗等體外功能實驗以及動物移植瘤實驗研究PSCA對前列腺癌細胞增殖的影響;通過流式細胞術(shù)了解細胞周期凋亡的變化,PCR、Weston blot等實驗檢測細胞周期凋亡相關(guān)基因表達;免疫組化染色研究組織PSCA以及c-myc等周期相關(guān)基因的表達;使用c-myc-siRNA對過表達PSCA的LNCAP進行轉(zhuǎn)染,進一步研究PCSA對c-myc的調(diào)控作用;收集2013年12月前在我院前列腺癌初治病例。該研究納入的所有病例均行前列腺穿刺活檢或手術(shù)后的病理檢查確診為前列腺腺癌,并且相關(guān)檢查未見遠處轉(zhuǎn)移;納入患者的病理組織收集前均未接受化學(xué)治療或者放療;病例資料中如缺失隨訪資料、術(shù)前PSA值、Gleason評分、手術(shù)切緣情況或淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移等描述均予以排除。通過病歷查找、電話隨訪對患者年齡、血清PSA、Gleason評分、腫瘤臨床分級、生化復(fù)發(fā)、總體生存等資料進行采集。【結(jié)果】MTS結(jié)果顯示:與對照組相比,72小時后,DU145-shRNA細胞增殖能力明顯較對照組減弱(P=0.000);而過表達PSCA的LNCAP細胞增殖能力在48小時后明顯較對照組增強(P=0.000)。平板克隆實驗:DU145細胞在平板實驗中第7天便有較多的肉眼可見的克隆,于第七天終止實驗,進行后續(xù)的染色;而LNCAP細胞則需到14天才出現(xiàn)較多的肉眼可見的克隆,于第14天終止實驗,進行后續(xù)的染色。結(jié)果顯示,在沉默PSCA的表達后,DU145 shRNA與對照組相比,形成的克隆更少、更小(P=0.000);同樣的,過表達PSCA后的LNCAP與對照組相比,LNCAP PSCA的克隆數(shù)目明顯增多(P=0.000)。動物體內(nèi)移植瘤實驗結(jié)果:與體外細胞功能實驗結(jié)果相一致,PSCA明顯加速了移植瘤在裸鼠體內(nèi)的生長速度:DU145shRNA組在接種第19天后移植瘤體積開始明顯小于對照組(P=0.000);過表達PSCA后,LNCAP-PSCA組在接種2周后體積明顯比對照組增大;4周后對移植瘤進行解剖稱重,肉眼所見,DU145 shRNA與LCAP-vector移植瘤大體觀上較對照組小;DU145 shRNA瘤重明顯較對照組減小,而LNCAP-PSCA瘤重明顯較對照組增加(P=0.0000)。流式細胞術(shù):,在正常DU145組G0/G1期細胞(48.56%±2.0%)明顯增加至DU145shRNA組(60.32%±1.2%,P=0.000),DU145 NC組G0/G1期細胞為49.47%±2.5%,與正常組比較差異(P=0.492);DU145-shRNA組凋亡率4.87%±0.48%,DU145-NC組凋亡率4.70%±0.61%,DU145組凋亡率4.23%±0.53%,經(jīng)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.494);LNCAP-PSCA組凋亡率1.89%±0.37%,LNCAP-vector組凋亡率2.26%±0.13%,LNCAP正常組凋亡率2.56%±0.18%,經(jīng)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.124)。qRT-PCR以及weston blot結(jié)果顯示:與DU145-NC組比較,DU145shRNA組無論在mRNA水平或者蛋白水平,c-myc、cyclin D1、cyclin E2表達下調(diào)P=0.000);與之相反,在過表PSCA的LNCAP組中c-myc、cyclin D1、cyclin E2表達上調(diào)(P=0.000)。與周期抑制相關(guān)的基因P16、P27、凋亡相關(guān)蛋白caspase 3并沒有明顯差異。免疫組織化學(xué)法染色顯示,動物移植瘤組織DU145siRNA組組織表達PSCA、c-myc、cyclin D1、cyclin E2下調(diào);LNCAP-PSCA組表達PSCA、c-myc、cyclin D1、cyclin E2上調(diào),細胞PCR、western blot結(jié)果相符。對LNCAP-PSCA轉(zhuǎn)染干擾質(zhì)粒si-c-myc后,c-myc、cyclin D1、cyclin E2表達下降(P=0.00),MTS實驗顯示si-cmyc+PSCA組生長曲較對照組線明顯減慢(P=0.000)。進一步對調(diào)控c-myc上游通路檢測發(fā)現(xiàn),與對照組比較,P-AKT在DU145 shRNA蛋白水平明顯降低(P=0.000),而在LNCAP-PSCA中明顯提高(P=0.000)。p-ERK1/2在DU145siRNA(p=0.886)以及LNCAP-PSCA(P=0.439)無明顯變化。使用AKT抑制劑MK2206后,c-myc以及其下游cyclin D1、cyclin E2表達明顯下調(diào)(P=0.000)。MTS實驗MK2206明顯減緩過表達PSCA的LNCAP的生長曲線。通過查找病歷、電話訪問等收集到資料完整的前列腺癌病例78例,入院時間在2008年2月到2013年12月之間,結(jié)果顯示,高表達PSCA與高表達c-myc相關(guān)(P=0.014);高表達PSCA和高表達c-myc都分別與gleason評分、BCR以及OS相關(guān)(P0.05),與年齡、血清PSA水平不相關(guān)(P0.05);Kaplan Meier生存曲線顯示高表達PSCA與高表達c-myc與前列腺癌預(yù)后不良相關(guān)(P0.05);通過cox多因素回歸分析表明PSCA和c-myc可作為獨立預(yù)測前列腺癌生化復(fù)發(fā)(分別為:HR 2.834,95%CI 1.124-7.141,P=0.027 and HR 3.232,95%CI 1.366-7.649,P=0.008)以及總體生存率(分別為HR 10.559,95%CI1.295-86.129,P=0.028 and HR 12.703,95%CI 1.611-100.183,P=0.016,respectively)的危險因素�！窘Y(jié)論】PSCA通過激活PI3K/AKT通路上調(diào)c-myc以及其下游cyclin D1、cyclin E2基因的表達,促進細胞周期由G0/G1期進入S期,從而促進前列腺癌細胞的增殖;而PSCA沉默可誘導(dǎo)細胞周期G0/G1期阻滯。臨床上高表達PSCA與高表達c-myc相關(guān),并且與前列腺癌患者更高的生化復(fù)發(fā)率以及更短的照片那個題生存期相關(guān)。PSCA可作為一個新的前列腺癌預(yù)后指標以及靶向治療靶點。
[Abstract]:Prostate stem cell antigen ( PSCA ) gene encodes a glycoprotein composed of 123 amino acids . Like SCA - 2 , PSCA is a member of the cell surface glucose phosphoinositide . It is suggested that PSCA may play an important role in the progression of prostate cancer . However , its specific biological mechanism is still unclear . The purpose of this study is to investigate the role of PSCA in the proliferation of prostate cancer cells and to investigate its mechanism of regulation of cycle apoptosis . The effects of PCSA on the proliferation of prostate cancer cells were investigated by means of flow cytometry . Results : Compared with the control group , the proliferation ability of DU145 - shRNA was significantly lower than that of the control group ( P = 0.000 ) . Compared with the control group , the number of LNCAP - PSCA cells increased significantly compared with the control group ( P = 0.000 ) . The expression of c - myc , cyclin D1 , cyclin E 2 in LNCAP - PSCA was significantly lower than that of control group ( P = 0.000 ) . 緇撴灉鏄劇ず,楂樿〃杈綪SCA涓庨珮琛ㄨ揪c-myc鐩稿叧(P=0.014);楂樿〃杈綪SCA鍜岄珮琛ㄨ揪c-myc閮藉垎鍒笌gleason璇勫垎,BCR浠ュ強OS鐩稿叧(P0.05),涓庡勾榫，

本文編號：1850849