本文選題：慢性腎功能不全 + 微小RNA　； 參考：《四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)》2017年02期

【摘要】：目的研究miR-155是否通過下調(diào)靶基因Kruppel樣因子4(KLF4)影響腎小管上皮細(xì)胞中基質(zhì)金屬蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)和MMP-9的表達(dá)。方法首先驗(yàn)證miR-155是否可以抑制腎小管上皮細(xì)胞中MMPs的表達(dá)和活性及其對(duì)KLF4表達(dá)影響:miR-155-mimic、miR-155mimic-對(duì)照(空質(zhì)粒)、空白培養(yǎng)基轉(zhuǎn)染離體培養(yǎng)的腎小管上皮細(xì)胞,6h后,熒光定量RT-PCR檢測miR-155表達(dá),免疫印跡試驗(yàn)(Western blot)檢測細(xì)胞MMP-2、MMP-9、KLF4的表達(dá),明膠酶譜檢測細(xì)胞中MMP-2和MMP-9的活性。生物信息學(xué)預(yù)測miR-155潛在靶基因?yàn)镵LF4后,驗(yàn)證miR-155是否是通過靶向抑制KLF4發(fā)揮其作用:腎小管上皮細(xì)胞用過表達(dá)miR-155的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后,再進(jìn)一步轉(zhuǎn)染KLF4過表達(dá)質(zhì)�；蚩召|(zhì)粒,6h后Western blot和明膠酶譜法再次檢測上述指標(biāo)。另取細(xì)胞,分別構(gòu)建包含KLF4-3′-UTR野生型和突變型序列的熒光素酶質(zhì)粒,與miR-155-mimic或者空質(zhì)粒對(duì)照共轉(zhuǎn)染腎小管上皮細(xì)胞,24h后熒光素酶試驗(yàn)檢測miR-155對(duì)KLF4基因的靶向抑制。結(jié)果相比轉(zhuǎn)染miR-155mimic-對(duì)照的細(xì)胞,轉(zhuǎn)染了miR-155-mimic的細(xì)胞miR-155表達(dá)上調(diào),KLF4的表達(dá)受到抑制,MMP-2、MMP-9的表達(dá)和活性下降。相比于轉(zhuǎn)染miR-155質(zhì)粒和轉(zhuǎn)染miR-155+空質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染過表達(dá)KLF4+miR-155質(zhì)粒的細(xì)胞KLF4表達(dá)上調(diào),MMP-2、MMP-9的表達(dá)和活性增加。熒光素酶試驗(yàn)驗(yàn)證miR-155可與KLF4靶向結(jié)合。結(jié)論 MiR-155可以通過靶向作用下調(diào)KLF4,從而抑制腎小管上皮細(xì)胞中MMP-2、MMP-9的表達(dá)和活性。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of miR-155 on the expression of matrix metalloproteinase (MMP) 2(matrix metalloproteinase _ 2 (MMP-2) and MMP-9 in renal tubular epithelial cells by down-regulation of target gene Kruppel like factor 4 (KLF4). Methods to investigate whether miR-155 could inhibit the expression and activity of MMPs in renal tubular epithelial cells and its effect on the expression of KLF4. The expression of miR-155 was detected by fluorescence quantitative RT-PCR after transfection with empty plasmid and blank medium for 6 hours. The expression of MMP-2, MMP-9 and KLF4 was detected by Western blotting, and the activity of MMP-2 and MMP-9 was detected by gelatin zymogram. Bioinformatics predicts the potential target of miR-155 because of KLF4, and verifies whether miR-155 plays its role by targeting the inhibition of KLF4: renal tubular epithelial cells are transfected with plasmids expressing miR-155. Western blot and gelatin zymogram were used to detect the above indexes again after further transfection of KLF4 overexpression plasmids or empty plasmids for 6 h. Luciferase plasmids containing wild-type and mutants of KLF4-3'-UTR were constructed and cotransfected with miR-155-mimic or empty plasmid for 24 hours. The targeting inhibition of KLF4 gene by miR-155 was detected by luciferase assay. Results compared with those transfected with miR-155 mimic-control cells, the expression of miR-155 in miR-155-mimic transfected cells was inhibited and the expression and activity of MMP-2 / MMP 9 decreased. Compared with the transfection of miR-155 plasmid and empty miR-155 plasmid, the expression and activity of MMP-2MMP-9 were up-regulated in the cells transfected with KLF4 miR-155 plasmid. Luciferase assay confirmed that miR-155 could bind to KLF4. Conclusion MiR-155 can down-regulate the expression and activity of MMP-2 and MMP-9 in renal tubular epithelial cells by targeting KLF4.
【作者單位】： 蘭州大學(xué)第二醫(yī)院腎內(nèi)科;蘭州大學(xué)第二醫(yī)院風(fēng)濕科;
【基金】：甘肅省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.1308RJZA246) 甘肅省衛(wèi)生行業(yè)科研計(jì)劃項(xiàng)目(No.GSWST2013-02)資助
【分類號(hào)】：R692

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4 薛痕;陳亮;樊均明;李孜;;MMP-9與TIMP-1在腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化中的作用[J];四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2008年01期

【共引文獻(xiàn)】

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4 劉龍斌;孟立平;季政;許富康;池菊芳;郭航遠(yuǎn);;黃酒多酚對(duì)Hcy誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞MMP-2/9表達(dá)與活性的影響[J];浙江醫(yī)學(xué);2016年12期

5 王崢;張翥;;積芎解毒方延緩糖尿病腎病發(fā)展及影響炎癥因子水平的研究[J];中藥藥理與臨床;2016年03期

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7 王崢;;中西藥聯(lián)合治療早期糖尿病腎病療效及對(duì)尿蛋白的影響[J];中醫(yī)臨床研究;2016年06期

8 胡姍姍;陳騰鋒;李金雨;楊柳;;尿激酶型纖溶酶原激活物在動(dòng)物腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化中的表達(dá)及其意義[J];臨床泌尿外科雜志;2014年09期

9 饒杰;吳金玉;李昆英;胡溪;江旖旎;黃小森;;慢性腎纖維化機(jī)制的研究概況[J];遼寧中醫(yī)雜志;2014年04期

10 李葉麗;王穎婉;李意奇;張麗梅;龔其海;楊丹莉;;淫羊藿苷通過降低醛固酮水平減輕自發(fā)性高血壓大鼠腎間質(zhì)纖維化[J];中國藥理學(xué)通報(bào);2014年04期

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3 謝廣發(fā);徐榕;樊阿萍;;古越龍山黃酒中有益心血管健康的成分分析[J];釀酒;2011年05期

4 游牧;劉文;饒圣宏;徐振山;宋禮華;;基質(zhì)金屬蛋白酶-2和p185~(HER-2/neu)蛋白在卵巢癌中的研究進(jìn)展[J];生物學(xué)雜志;2011年02期

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6 李燕;陸麗利;鄭校先;丁晨梟;;大孔樹脂吸附黃酒中活性肽的研究[J];化學(xué)研究與應(yīng)用;2010年10期

7 陸海英;張悅;周娟;劉煜敏;陸敏;史美育;;MMP-2和TIMP-2在腎間質(zhì)纖維化大鼠模型中的表達(dá)和意義[J];現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué);2009年12期

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9 王健;李曉東;王金華;郭志軍;;醛固酮對(duì)人近端腎小管上皮細(xì)胞結(jié)締組織生長因子mRNA表達(dá)的影響[J];天津醫(yī)藥;2007年10期

10 朱曉玲;王永鈞;楊汝春;張迎華;陳洪宇;;復(fù)方積雪草有效組分對(duì)人腎小管上皮細(xì)胞補(bǔ)體C_3表達(dá)的影響[J];中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志;2007年03期

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7 張瑜;周建華;;肝素對(duì)腎小管上皮細(xì)胞膜結(jié)合補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白表達(dá)的影響及意義[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十四次全國兒科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

8 楊雅麗;程曉霞;;腎小管上皮細(xì)胞凋亡在腎間質(zhì)纖維化中的作用及其防治的研究進(jìn)展[A];2009全國時(shí)間生物醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

9 譚玉莉;黃妍;楊亦彬;;魚膽汁毒素致腎小管上皮細(xì)胞死亡方式及實(shí)施干預(yù)的試驗(yàn)研究[A];貴州省醫(yī)學(xué)會(huì)腎臟病學(xué)分會(huì)2008年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

10 喬f^;陳香美;吳鏑;丁瑞;師鎖柱;謝院生;洪權(quán);呂楊;王兆霞;尹忠;;衰老大鼠腎臟缺血/再灌注損傷中腎小管上皮細(xì)胞不同凋亡途徑的研究[A];“中華醫(yī)學(xué)會(huì)腎臟病學(xué)分會(huì)2004年年會(huì)”暨“第二屆全國中青年腎臟病學(xué)術(shù)會(huì)議”論文匯編[C];2004年

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本文編號(hào)：1825800