發(fā)布時間：2018-04-17 20:36

  本文選題：微小RNA + 前列腺癌��； 參考：《浙江大學(xué)》2014年博士論文

【摘要】：背景：前列腺癌在目前男性腫瘤發(fā)病率里居第二位,據(jù)統(tǒng)計,美國在2012年新發(fā)病例241740例,死亡病例28170例。我國近年來隨著PSA篩查的開展,其發(fā)病率也逐年上升。根據(jù)目前人們對前列腺癌的發(fā)病原因和進(jìn)展機(jī)制研究發(fā)現(xiàn),除了常見的遺傳學(xué)因素,許多重要的分子事件是導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞形成、進(jìn)展和轉(zhuǎn)移的深層次原因。關(guān)于RNA的研究近年來受到了廣泛的關(guān)注,甚至被評為“十大科技突破之一”,而其中最引人注意的是microRNA (miRNA)。miRNA是一類小分子非編碼RNA,作為一種重要的基因調(diào)控物質(zhì),調(diào)控大約30%人類基因的轉(zhuǎn)錄,控制著細(xì)胞的分化、增殖和程序性細(xì)胞死亡等多種重要生理過程。大量證據(jù)表明,超過50%的人類miRNA基因與癌癥有關(guān),其在多個不同類型的腫瘤及疾病中異常表達(dá),且與腫瘤發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。 目的：本研究首先通過測定miR-503在前列腺癌PC-3及DU-145細(xì)胞株中的表達(dá)情況,并通過一系列功能實驗研究了miR-503在前列腺癌細(xì)胞中的生物學(xué)功能,然后根據(jù)生物信息學(xué)知識,對miR-503潛在的靶點(diǎn)進(jìn)行預(yù)測并加以驗證,并通過靶點(diǎn)分子的沉默和過表達(dá)實驗,證實miR-503對靶點(diǎn)的調(diào)控意義。 方法：1.檢測前列腺癌細(xì)胞株中miR-503的表達(dá)量,并與前列腺正常上皮細(xì)胞株中miR-503的表達(dá)量進(jìn)行比較；并檢測CCND1在前列腺癌細(xì)胞及組織芯片中的表達(dá)情況,檢測TLN1在前列腺癌細(xì)胞中的表達(dá)情況,證明CCND1及TLN1在前列腺癌細(xì)胞與正常細(xì)胞之間存在差異表達(dá)； 2.通過體外轉(zhuǎn)染miR-503mimic的方式使細(xì)胞呈現(xiàn)miR-503過表達(dá)趨勢以此進(jìn)行獲得性功能實驗。在此基礎(chǔ)上,通過細(xì)胞活力分析實驗(CCK-8)、平板克隆形成、流式細(xì)胞術(shù)以及Transwell實驗,研究miR-503與的哪些細(xì)胞功能有關(guān)； 3.使用在線生物信息學(xué)工具,預(yù)測并挑選潛在的miR-503靶基因,并通過構(gòu)建熒光素酶報告系統(tǒng)對這些靶點(diǎn)進(jìn)行驗證,并利用Western Blot、RNA干擾和質(zhì)粒過表達(dá)等實驗進(jìn)一步證實靶向調(diào)控關(guān)系。 結(jié)果：1.與前列腺正常上皮細(xì)胞株RWPE-1相比,在前列腺癌PC-3和DU-145細(xì)胞株中,miR-503均呈低表達(dá),而CCND1及TLN1呈高表達(dá)。在組織芯片中,CCND1在癌組織較癌旁組織呈高表達(dá)； 2.通過對PC-3和DU-145細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-503mimic來過表達(dá)細(xì)胞中的miR-503,我們觀察到細(xì)胞的存活率明顯受到抑制,用50nM的mimic處理后,PC-3在處理48小時及72小時后抑制率分別達(dá)到了26%和36%(p0.05),而DU-145的抑制率在處理48小時及72小時后分別達(dá)到29%和38%(p0.05)。平板克隆形成實驗顯示,miR-503過表達(dá)使PC-3細(xì)胞克隆形成率下降了36%,使DU-145細(xì)胞克隆形成率下降了19%。流式細(xì)胞周期檢測發(fā)現(xiàn)miR-503mimic處理可以誘導(dǎo)PC-3和DU-145細(xì)胞發(fā)生G1期阻滯,50nM miR-503mimic作用48小時后,PC-3和DU-145細(xì)胞G1期的比例分別增加13%和12%,而流式細(xì)胞凋亡檢測提示miR-503過表達(dá)并不能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。此外,Transwell小室實驗則提示miR-503能顯著地影響細(xì)胞的侵襲和遷移行為。 3.根據(jù)生物信息學(xué)知識,我們預(yù)測miR-503的可能靶基因為CCND1、TLN1。熒光素酶雙報告系統(tǒng)和western實驗證實CCND1是miR-503與周期相關(guān)的直接作用靶點(diǎn),而TLN1是與侵襲遷移功能相關(guān)的直接作用靶點(diǎn)。對CCND1實施特異性沉默和過表達(dá)進(jìn)一步證實了其在miR-503調(diào)控細(xì)胞周期過程中的作用；對TLN1實施特異性沉默進(jìn)一步驗證了其在miR-503調(diào)控細(xì)胞侵襲遷移功能中的作用。 結(jié)論：1.miR-503在前列腺癌細(xì)胞中呈低表達(dá),而CCND1、TLN1則呈高表達(dá)。 2.過表達(dá)miR-503使得前列腺癌細(xì)胞PC-3和DU-145發(fā)生細(xì)胞周期阻滯及增殖顯著抑制,并削弱了細(xì)胞的克隆形成能力。同時,還抑制了細(xì)胞的侵襲及遷移功能。 3. CCND7、TLN1是miR-503的靶基因。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R737.25

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 邵常霞,項永兵,劉振偉,高靜,孫璐,方茹蓉,阮志賢,高立峰,金凡,高玉堂;上海市區(qū)泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤相對生存率分析[J];中國腫瘤臨床;2005年06期

2 畢新剛;韓仁強(qiáng);周金意;張思維;鄭榮壽;武鳴;陳萬青;;2009年中國前列腺癌發(fā)病和死亡分析[J];中國腫瘤;2013年06期

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本文編號：1765190