本文選題：PC-3 + 鹽霉素　； 參考：《南華大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：目的：研究鹽霉素對前列腺癌細(xì)胞系PC-3在體外的克隆形成能力的影響及其與β-catenin和mTOR信號通路的關(guān)系,探討鹽霉素抗前列腺癌干細(xì)胞的作用機(jī)制。 方法：鹽霉素處理呈對數(shù)生長的前列腺癌細(xì)胞系PC-3,觀察其克隆形成變化；采用流式分析儀檢測鹽霉素處理PC-3后腫瘤干細(xì)胞比例的變化；用WesternBlot法檢測鹽霉素處理后前列腺癌細(xì)胞中的β-catenin和mTOR信號通路的蛋白表達(dá)變化；實(shí)時(shí)定量PCR法檢測鹽霉素處理后前列腺癌細(xì)胞中β-catenin信號通路的靶基因表達(dá)水平變化；比較ALDHhigh亞群和ALDHlow亞群克隆形成變化；GSK3抑制劑和雷帕霉素分別處理PC-3,觀察其對克隆形成能力的影響并檢測其腫瘤干細(xì)胞比例的變化。 結(jié)果：①鹽霉素對前列腺癌細(xì)胞克隆形成能力的影響：濃度分別為0、0.25uM、0.5uM、luM、2uM和4uM的各處理組的克隆形成數(shù)分別為41、39、36、30、18和9。②鹽霉素對PC-3中腫瘤干細(xì)胞比例的影響：流式細(xì)胞儀分析結(jié)果顯示熒光陰性對照組腫瘤干細(xì)胞比例均值為0.05%,空白對照組腫瘤干細(xì)胞比例均值為7.40%,鹽霉素4uM處理12h組腫瘤干細(xì)胞比例均值為1.86%,通過兩樣本均數(shù)t檢驗(yàn),空白對照組與實(shí)驗(yàn)組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。③鹽霉素對不同干細(xì)胞亞群細(xì)胞增殖能力的影響：ALDHhigh亞群的細(xì)胞較ALDHlow亞群具有更強(qiáng)的增殖能力,且鹽霉素對前列腺癌干細(xì)胞具有選擇性殺傷作用,ALDHhigh亞群和ALDHlow亞群的空白組與鹽霉素處理組的克隆數(shù)分別為20、4、9和5。④鹽霉素對PC-3干細(xì)胞的β-catenin和mTOR信號通路的影響：克隆形成實(shí)驗(yàn)中,空白對照組、鹽霉素組、雷帕霉素組和GSK3抑制劑組的克隆數(shù)分別為80、51、70和124,流式細(xì)胞分析儀檢測干細(xì)胞比例變化,GSK3抑制劑組高表達(dá)ALDH細(xì)胞達(dá)9.35%,雷帕霉素組中高表達(dá)ALDH的比例為1.62%,雷帕霉素+鹽霉素組中腫瘤ALDH高表達(dá)比例為0.94%,而GSK3抑制劑+鹽霉素組的比例為2.95%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：(1)鹽霉素可以抑制前列腺癌細(xì)胞PC-3的增殖,并能有效抗其腫瘤干細(xì)胞；(2)鹽霉素對β-catenin和mTOR信號通路的抑制作用很有可能是其抗前列腺癌細(xì)胞及其干細(xì)胞的作用機(jī)制之一。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of salinomycin on the clone formation of prostate cancer cell line PC-3 in vitro and its relationship with 尾 -catenin and mTOR signaling pathway, and to explore the mechanism of salinomycin against prostate cancer stem cells.Methods: the prostate cancer cell line PC-3 which grew logarithmic was treated with salinomycin and its clone formation was observed, and the percentage of tumor stem cells treated with salinomycin was detected by flow cytometry.The changes of protein expression of 尾 -catenin and mTOR signaling pathway in prostate cancer cells treated with salinomycin were detected by WesternBlot assay, and the target gene expression level of 尾 -catenin signaling pathway in prostate cancer cells treated with salinomycin was detected by real-time quantitative PCR.The effects of GSK3 inhibitor and rapamycin on the clonal formation of PC-3 were compared with those of ALDHlow subgroup and ALDHhigh subgroup. The effects of GSK3 inhibitor and rapamycin on the clone forming ability were observed and the percentage of tumor stem cells was detected.Results the effect of 1: 1 salinomycin on the clone forming ability of prostate cancer cells: the number of clone formation in each treatment group with concentration of 0 0.25uM and 4uM were 41 ~ 39U ~ (36) 30 ~ (18) and 9.2 ~ (2) salinomycin respectively: the effect of flow fine flow on the percentage of tumor stem cells in PC-3.The mean percentage of tumor stem cells in fluorescent negative control group was 0.05, that in blank control group was 7.40, and that in salinomycin 4uM treatment group for 12 h was 1.86. The mean value of two samples was t test.The difference between the blank control group and the experimental group was statistically significant. The effect of salinomycin on the proliferation of different stem cell subsets was significant. The cell proliferation of the ALDHlow subgroup was stronger than that of the ALDHlow subgroup.Moreover, salinomycin had selective killing effect on prostate cancer stem cells. The clones of blank group and salinomycin treated group were 204n9 and 5.4 salinomycin on 尾 -catenin and mTOR signaling pathway of PC-3 stem cells, respectively.In the Clone formation experiment,Blank control group, salinomycin group,The clone numbers of rapamycin group and GSK3 inhibitor group were 80 ~ 51N 70 and 124, respectively. The percentage of stem cells detected by flow cytometry was 9.35% in GSK3 inhibitor group, 1.62% in rapamycin group and 1.62% in rapamycin group.In the salinomycin group, the proportion of tumor ALDH high expression was 0. 94%, while that of the GSK3 inhibitor salinomycin group was 2. 95%. The difference was statistically significant (P 0. 05).Conclusion 1) Salinomycin can inhibit the proliferation of prostate cancer cell line PC-3, and can effectively inhibit the proliferation of prostate cancer cell line, and can effectively inhibit the inhibition of 尾 -catenin and mTOR signaling pathway, which may be one of the mechanisms of its anti-prostate cancer cell and its stem cells.
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R737.25

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