本文選題：自噬體 + 自噬相關(guān)基因4(Atg4)�。� 參考：《蘭州大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：自噬是細(xì)胞中較常見(jiàn)的一種免疫反應(yīng),屬于固有免疫反應(yīng),自噬體由一個(gè)雙層膜結(jié)構(gòu)組成,可以對(duì)細(xì)胞內(nèi)損傷的細(xì)胞器或無(wú)用的胞質(zhì)成分進(jìn)行吞噬后降解,降解后的小分子物質(zhì)可以再次被細(xì)胞利用,從而維持胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)。自噬體膜形成過(guò)程中需要自噬相關(guān)基因8(Autophagy related gene 8,Atg8)完成自噬體膜的延長(zhǎng)過(guò)程,Atg8需要Atg4引導(dǎo)從而變成水溶形式,而后與磷脂酰乙醇胺(PE)結(jié)合而變成脂化形式,脂化形式的Atg8介導(dǎo)自噬體膜的延伸及關(guān)閉,當(dāng)自噬體與溶酶體結(jié)合后,Atg4將脂化形式的Atg8脫脂化處理形成水溶形式,供細(xì)胞利用,因此Atg4對(duì)于Atg8既有介導(dǎo)轉(zhuǎn)化作用,又有清除作用。體外實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證明了Atg4對(duì)于Atg8的清除作用。而Atg4蛋白有四種同源蛋白,針對(duì)不同的Atg4蛋白,它們對(duì)于Atg8蛋白的功能是否一樣尚不明確,本實(shí)驗(yàn)主要通過(guò)人類(lèi)胚源腎細(xì)胞(HEK 293T)來(lái)探討Atg4蛋白對(duì)于Atg8蛋白的作用,通過(guò)使用CRISPR技術(shù)對(duì)HEK細(xì)胞中的Atg4同源基因進(jìn)行敲除,然后利用慢病毒轉(zhuǎn)染方式依次恢復(fù)敲除細(xì)胞中的Atg4基因,從而明確各種Atg4蛋白對(duì)于Atg8蛋白的作用。結(jié)果顯示,Atg4A蛋白對(duì)于Atg8蛋白中的LC3B和GABARAPL1蛋白的脂化過(guò)程有重要作用,Atg4B蛋白對(duì)于LC3B和GABARAPL1的水溶形式的形成有作用,而且對(duì)于LC3B蛋白的形式轉(zhuǎn)化起決定作用,Atg4C蛋白對(duì)于LC3B脂化形式發(fā)生有一定的作用,Atg4D蛋白對(duì)于LC3B脂化有少量補(bǔ)充作用及GABARAPL1蛋白的脂化作用有較明顯的作用。因此,可以得出Atg4蛋白對(duì)于Atg8蛋白從前體形式向水溶性和脂化性蛋白的轉(zhuǎn)變有不同的作用。后續(xù)實(shí)驗(yàn)可以用更多的方法來(lái)驗(yàn)證這一結(jié)果,提高結(jié)果的可靠性,揭示自噬體在細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的過(guò)程。通過(guò)對(duì)于Atg4作用的研究,對(duì)于后期研究自噬與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系提供了一個(gè)新的方向,尤其是對(duì)于腎癌的靶向藥物的開(kāi)發(fā)及及預(yù)后的檢測(cè)提供了新的思路,同時(shí)對(duì)于免疫性疾病的發(fā)生機(jī)制及相應(yīng)治療藥物的使用提供了一個(gè)新的依據(jù)。
[Abstract]:Autophagy is a common cellular immune response, belong to the innate immune response, autophagy by a double membrane structure, can be carried out after the phagocytosis degradation of intracellular organelle damage or unwanted cytoplasmic components, small molecules after degradation can again be used to maintain the cell, intracellular homeostasis autophagy. Membrane formation process requires autophagy related gene 8 (Autophagy related 8 gene, Atg8) to complete the autophagic membrane extension process, Atg8 Atg4 guide to become water soluble form, and then phosphatidylethanolamine (PE) combined with a lipidated form, extending Atg8 mediated lipidated form mediated autophagy and when the film is closed, and lysosome after binding, Atg4 will lipidated form Atg8 degreasing treatment water soluble form, for use by cells, so Atg4 for both Atg8 mediated transformation, and the scavenging effect of in vitro experiments have confirmed. Clear Atg4 for Atg8. The scavenging effect of Atg4 protein four homolog, different Atg4 protein, for the function of Atg8 protein is still not clear whether the same, this experiment mainly through human embryonic kidney cells (HEK 293T) to explore the role of Atg4 protein in Atg8 protein, were knocked out by homologous gene the HEK cells in Atg4 using CRISPR technology, and then restore Atg4 gene knockout cells using lentiviral transfection method, so as to clear the role of Atg4 protein in Atg8 protein. The results showed that the Atg4A protein of Atg8 protein in the process for LC3B and GABARAPL1 protein has an important role for LC3B and Atg4B protein GABARAPL1 water soluble form has the effect, but also for the LC3B protein in the form of transformation plays a decisive role for LC3B, Atg4C protein lipid form has certain effect, Atg4D egg white for LC3B Fat lipid effects and added a small amount of GABARAPL1 protein has the obvious function. Therefore, it can be changed to Atg4 protein Atg8 protein precursor to form water-soluble and lipid proteins have different functions. The subsequent experiment can verify this result by more methods, improve the reliability of the results reveal, autophagy in the cells of the body. By studying the role of Atg4, provides a new direction for the study of relationship between late autophagy and tumor development, especially for the detection of target drugs to cancer development and prognosis and provides a new way of thinking, at the same time provides a new according to immune disease mechanism and corresponding drug use.

【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R692

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本文編號(hào)：1755612