本文選題：腎結(jié)石 + 代謝綜合征��； 參考：《蘇州大學》2014年博士論文

【摘要】：第一部分腎小管上皮細胞在與脂肪細胞、巨噬細胞共培養(yǎng)條件下促進結(jié)晶形成及旁分泌作用的研究 研究背景 腎結(jié)石是一種嚴重影響人體健康的臨床常見病和多發(fā)病，雖然腎結(jié)石的診斷及治療技術(shù)在過去的幾十年中取得了巨大的進步，，但其發(fā)病率和復發(fā)率仍高居不下，究其原因主要是由于目前對腎結(jié)石的發(fā)病機制還不明確，相關(guān)研究進展也較為緩慢。便捷、穩(wěn)定的實驗細胞和動物草酸鈣結(jié)石模型是研究腎結(jié)石臨床和基礎(chǔ)研究的重要手段和工具，對探索腎結(jié)石產(chǎn)生和防治機制具有重要意義。 近年來大宗的流行病學研究發(fā)現(xiàn)，肥胖、胰島素抵抗、2型糖尿病、尿pH值降低、高血壓等代謝因素不單是腎結(jié)石發(fā)生的危險因素，而且還與結(jié)石的演進密切相關(guān)。目前代謝綜合征中各個因素具體如何參與結(jié)石形成過程的研究相對薄弱。其對結(jié)石生成的影響尚未見相關(guān)基礎(chǔ)研究報道。 從腎結(jié)石成分來看，人類腎結(jié)石主要以含鈣結(jié)石為主，其中又以草酸鈣結(jié)石最多，約占結(jié)石總數(shù)的80%左右。主流觀點認為尿液中草酸鈣晶體的成核、生長、聚集是草酸鈣結(jié)石形成的主要機制。尿液中結(jié)石成分過飽和析出只是結(jié)石生成條件之一，在正常生理狀態(tài)下，腎小管中的草酸鈣晶體由于尿液的沖刷作用而隨尿液排出，無法在腎小管中聚集形成結(jié)石，只有在腎小管上皮損傷情況下，尿中的草酸鈣晶體才能夠黏附、生長和聚集于。腎內(nèi)或腎乳頭表面形成結(jié)石斑，并經(jīng)過一系列反應(yīng)最終生成草酸鈣結(jié)石。因而，草酸鈣結(jié)晶的沉積被認為是草酸鈣結(jié)石生成的重要基礎(chǔ)，建立一種成熟、穩(wěn)定的草酸鈣結(jié)晶模型對研究草酸鈣結(jié)石早期生成機制具有重要作用。 研究目的 通過本研究探索和建立涉及腎小管上皮細胞、巨噬細胞和脂肪細胞的體外實驗體系，以模擬代謝綜合征下細胞環(huán)境，并借助這一細胞模型研究三種細胞間的相互作用以及與晶體之間的作用。 研究方法 將小鼠腎小管上皮細胞(M-1)與小鼠脂肪細胞(3T3-L1)和/或巨噬細胞(RAW264.7)進行共培養(yǎng)48小時，然后將一水草酸鈣(COM)晶體作用于腎小管上皮細胞（M-1）。然后測定促炎因子骨橋蛋白(OPN)、單核細胞趨化因子1(MCP-1)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素6（IL-6）以及抗炎因子脂聯(lián)素（APN）的表達水平，并且測定腎小管上皮細胞上晶體附著的含量。 研究結(jié)果 炎癥因子骨橋蛋白(OPN)、單核細胞趨化因子1(MCP-1)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)在共培養(yǎng)組中有顯著的上調(diào)。骨橋蛋白(OPN)的過表達只發(fā)生在含有巨噬細胞(RAW264.7)的共培養(yǎng)組中，而腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和單核細胞趨化因子1(MCP-1)在含有脂肪細胞(3T3-L1)的共培養(yǎng)組中出現(xiàn)。而脂聯(lián)素（APN）的表達在三種細胞共培養(yǎng)的條件下是下調(diào)的。這些炎癥因子的改變發(fā)生于空間隔離互不接觸的共培養(yǎng)體系中，從而提示腎小管上皮細胞（M-1）與脂肪細胞(3T3-L1)和巨噬細胞(RAW264.7)之間存在著功能性互動，而且這種相互作用很可能是通過培養(yǎng)液內(nèi)的可溶性蛋白質(zhì)介導的。而將腎小管上皮細胞（M-1）與脂肪細胞(3T3-L1)和巨噬細胞(RAW264.7).共同培養(yǎng)后還同時促進了一水草酸鈣晶體（COM）對腎小管上皮細胞（M-1）的吸附。 研究結(jié)論 1.通過將腎小管上皮細胞（M-1）與脂肪細胞(3T3-L1)和巨噬細胞(RAW264.7)共培養(yǎng)模擬的代謝綜合征環(huán)境下，首次發(fā)現(xiàn)多種促炎因子的上調(diào)和抗炎因子的下調(diào)。 2.將腎小管上皮細胞（M-1）與脂肪細胞(3T3-L1)和巨噬細胞(RAW264.7)共培養(yǎng)可以促進腎小管上皮細胞對一水草酸鈣晶體（COM）的吸附作用，而這一作用至少部分是通過旁分泌機制實現(xiàn)的。這很可能是代謝綜合征環(huán)境下腎結(jié)石形成的重要機制之一。 第二部分代謝綜合征小鼠腎草酸鈣結(jié)晶模型中炎癥因子的改變及脂聯(lián)素（APN）對結(jié)晶形成抑制作用的研究 研究目的 通過本研究探索和建立代謝綜合征環(huán)境下腎結(jié)晶小鼠模型，并利用這一模型研究腎結(jié)石形成可能的機制，同時觀察和評價脂聯(lián)素（APN）對腎結(jié)晶形成的預(yù)防作用。 研究方法 本研究利用乙醛酸鹽按50mg/kg/天×6天誘導8周齡雄性野生型和ob/ob型小鼠產(chǎn)生腎結(jié)晶沉積。小鼠分為三組：野生型(+/+)組(對照組, n=12)；代謝綜合征ob/ob型小鼠組(ob/ob組, n=12)；ob/ob型小鼠+APN注射組(APN組，n=12)；收集血和尿樣進行生化分析，另外收集腎臟標本評估結(jié)石的形成和相關(guān)炎癥細胞因子(OPN)，(MCP-1)和(APN)的表達。還進行了TUNEL染色以評估細胞凋亡水平。 研究結(jié)果 對照組小鼠組(+/+組)沒有發(fā)現(xiàn)結(jié)石形成，而在代謝綜合征小鼠模型（ob/ob組）發(fā)現(xiàn)了顯著的腎結(jié)晶的沉積，但是這些腎結(jié)晶在APN干預(yù)后（APN組）明顯減少。在代謝綜合征小鼠模型（ob/ob組）發(fā)現(xiàn)促炎細胞因子OPN和MCP-1有明顯的上調(diào)而抗炎細胞因子APN有明顯的下調(diào)。TUNEL染色顯示ob/ob組和APN干預(yù)組均有凋亡細胞的增加而前者更加明顯。 研究結(jié)論 本研究成功建立了代謝綜合征環(huán)境下小鼠腎結(jié)晶模型，并借此提供了明確的證據(jù)顯示代謝綜合征環(huán)境下可以促進腎結(jié)石的形成，而這一過程可能涉及腎組織的炎癥反應(yīng)和凋亡。另外，這也是首次發(fā)現(xiàn)脂聯(lián)素對腎結(jié)石的預(yù)防保護作用，此作用與對炎癥和凋亡的抑制有關(guān)。
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【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R589;R692.4

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 葛利輝,謝麗娟,劉曉軍;人群泌尿系結(jié)石發(fā)病的流行病學調(diào)查[J];廣西預(yù)防醫(yī)學;1998年06期

2 陳希;諶衛(wèi);丁家榮;殷晶晶;胡海燕;賈猛;郭志勇;;泌尿系結(jié)石患者血脂及相關(guān)影響因素的研究[J];中國全科醫(yī)學;2011年34期

本文編號：1750925