本文選題：腎結(jié)石 + 代謝綜合征　； 參考：《蘇州大學(xué)》2014年博士論文

【摘要】：第一部分腎小管上皮細(xì)胞在與脂肪細(xì)胞、巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)條件下促進(jìn)結(jié)晶形成及旁分泌作用的研究 研究背景 腎結(jié)石是一種嚴(yán)重影響人體健康的臨床常見(jiàn)病和多發(fā)病，雖然腎結(jié)石的診斷及治療技術(shù)在過(guò)去的幾十年中取得了巨大的進(jìn)步，，但其發(fā)病率和復(fù)發(fā)率仍高居不下，究其原因主要是由于目前對(duì)腎結(jié)石的發(fā)病機(jī)制還不明確，相關(guān)研究進(jìn)展也較為緩慢。便捷、穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)細(xì)胞和動(dòng)物草酸鈣結(jié)石模型是研究腎結(jié)石臨床和基礎(chǔ)研究的重要手段和工具，對(duì)探索腎結(jié)石產(chǎn)生和防治機(jī)制具有重要意義。 近年來(lái)大宗的流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，肥胖、胰島素抵抗、2型糖尿病、尿pH值降低、高血壓等代謝因素不單是腎結(jié)石發(fā)生的危險(xiǎn)因素，而且還與結(jié)石的演進(jìn)密切相關(guān)。目前代謝綜合征中各個(gè)因素具體如何參與結(jié)石形成過(guò)程的研究相對(duì)薄弱。其對(duì)結(jié)石生成的影響尚未見(jiàn)相關(guān)基礎(chǔ)研究報(bào)道。 從腎結(jié)石成分來(lái)看，人類腎結(jié)石主要以含鈣結(jié)石為主，其中又以草酸鈣結(jié)石最多，約占結(jié)石總數(shù)的80%左右。主流觀點(diǎn)認(rèn)為尿液中草酸鈣晶體的成核、生長(zhǎng)、聚集是草酸鈣結(jié)石形成的主要機(jī)制。尿液中結(jié)石成分過(guò)飽和析出只是結(jié)石生成條件之一，在正常生理狀態(tài)下，腎小管中的草酸鈣晶體由于尿液的沖刷作用而隨尿液排出，無(wú)法在腎小管中聚集形成結(jié)石，只有在腎小管上皮損傷情況下，尿中的草酸鈣晶體才能夠黏附、生長(zhǎng)和聚集于。腎內(nèi)或腎乳頭表面形成結(jié)石斑，并經(jīng)過(guò)一系列反應(yīng)最終生成草酸鈣結(jié)石。因而，草酸鈣結(jié)晶的沉積被認(rèn)為是草酸鈣結(jié)石生成的重要基礎(chǔ)，建立一種成熟、穩(wěn)定的草酸鈣結(jié)晶模型對(duì)研究草酸鈣結(jié)石早期生成機(jī)制具有重要作用。 研究目的 通過(guò)本研究探索和建立涉及腎小管上皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和脂肪細(xì)胞的體外實(shí)驗(yàn)體系，以模擬代謝綜合征下細(xì)胞環(huán)境，并借助這一細(xì)胞模型研究三種細(xì)胞間的相互作用以及與晶體之間的作用。 研究方法 將小鼠腎小管上皮細(xì)胞(M-1)與小鼠脂肪細(xì)胞(3T3-L1)和/或巨噬細(xì)胞(RAW264.7)進(jìn)行共培養(yǎng)48小時(shí)，然后將一水草酸鈣(COM)晶體作用于腎小管上皮細(xì)胞（M-1）。然后測(cè)定促炎因子骨橋蛋白(OPN)、單核細(xì)胞趨化因子1(MCP-1)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素6（IL-6）以及抗炎因子脂聯(lián)素（APN）的表達(dá)水平，并且測(cè)定腎小管上皮細(xì)胞上晶體附著的含量。 研究結(jié)果 炎癥因子骨橋蛋白(OPN)、單核細(xì)胞趨化因子1(MCP-1)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)在共培養(yǎng)組中有顯著的上調(diào)。骨橋蛋白(OPN)的過(guò)表達(dá)只發(fā)生在含有巨噬細(xì)胞(RAW264.7)的共培養(yǎng)組中，而腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和單核細(xì)胞趨化因子1(MCP-1)在含有脂肪細(xì)胞(3T3-L1)的共培養(yǎng)組中出現(xiàn)。而脂聯(lián)素（APN）的表達(dá)在三種細(xì)胞共培養(yǎng)的條件下是下調(diào)的。這些炎癥因子的改變發(fā)生于空間隔離互不接觸的共培養(yǎng)體系中，從而提示腎小管上皮細(xì)胞（M-1）與脂肪細(xì)胞(3T3-L1)和巨噬細(xì)胞(RAW264.7)之間存在著功能性互動(dòng)，而且這種相互作用很可能是通過(guò)培養(yǎng)液內(nèi)的可溶性蛋白質(zhì)介導(dǎo)的。而將腎小管上皮細(xì)胞（M-1）與脂肪細(xì)胞(3T3-L1)和巨噬細(xì)胞(RAW264.7).共同培養(yǎng)后還同時(shí)促進(jìn)了一水草酸鈣晶體（COM）對(duì)腎小管上皮細(xì)胞（M-1）的吸附。 研究結(jié)論 1.通過(guò)將腎小管上皮細(xì)胞（M-1）與脂肪細(xì)胞(3T3-L1)和巨噬細(xì)胞(RAW264.7)共培養(yǎng)模擬的代謝綜合征環(huán)境下，首次發(fā)現(xiàn)多種促炎因子的上調(diào)和抗炎因子的下調(diào)。 2.將腎小管上皮細(xì)胞（M-1）與脂肪細(xì)胞(3T3-L1)和巨噬細(xì)胞(RAW264.7)共培養(yǎng)可以促進(jìn)腎小管上皮細(xì)胞對(duì)一水草酸鈣晶體（COM）的吸附作用，而這一作用至少部分是通過(guò)旁分泌機(jī)制實(shí)現(xiàn)的。這很可能是代謝綜合征環(huán)境下腎結(jié)石形成的重要機(jī)制之一。 第二部分代謝綜合征小鼠腎草酸鈣結(jié)晶模型中炎癥因子的改變及脂聯(lián)素（APN）對(duì)結(jié)晶形成抑制作用的研究 研究目的 通過(guò)本研究探索和建立代謝綜合征環(huán)境下腎結(jié)晶小鼠模型，并利用這一模型研究腎結(jié)石形成可能的機(jī)制，同時(shí)觀察和評(píng)價(jià)脂聯(lián)素（APN）對(duì)腎結(jié)晶形成的預(yù)防作用。 研究方法 本研究利用乙醛酸鹽按50mg/kg/天×6天誘導(dǎo)8周齡雄性野生型和ob/ob型小鼠產(chǎn)生腎結(jié)晶沉積。小鼠分為三組：野生型(+/+)組(對(duì)照組, n=12)；代謝綜合征ob/ob型小鼠組(ob/ob組, n=12)；ob/ob型小鼠+APN注射組(APN組，n=12)；收集血和尿樣進(jìn)行生化分析，另外收集腎臟標(biāo)本評(píng)估結(jié)石的形成和相關(guān)炎癥細(xì)胞因子(OPN)，(MCP-1)和(APN)的表達(dá)。還進(jìn)行了TUNEL染色以評(píng)估細(xì)胞凋亡水平。 研究結(jié)果 對(duì)照組小鼠組(+/+組)沒(méi)有發(fā)現(xiàn)結(jié)石形成，而在代謝綜合征小鼠模型（ob/ob組）發(fā)現(xiàn)了顯著的腎結(jié)晶的沉積，但是這些腎結(jié)晶在APN干預(yù)后（APN組）明顯減少。在代謝綜合征小鼠模型（ob/ob組）發(fā)現(xiàn)促炎細(xì)胞因子OPN和MCP-1有明顯的上調(diào)而抗炎細(xì)胞因子APN有明顯的下調(diào)。TUNEL染色顯示ob/ob組和APN干預(yù)組均有凋亡細(xì)胞的增加而前者更加明顯。 研究結(jié)論 本研究成功建立了代謝綜合征環(huán)境下小鼠腎結(jié)晶模型，并借此提供了明確的證據(jù)顯示代謝綜合征環(huán)境下可以促進(jìn)腎結(jié)石的形成，而這一過(guò)程可能涉及腎組織的炎癥反應(yīng)和凋亡。另外，這也是首次發(fā)現(xiàn)脂聯(lián)素對(duì)腎結(jié)石的預(yù)防保護(hù)作用，此作用與對(duì)炎癥和凋亡的抑制有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R589;R692.4

【參考文獻(xiàn)】

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1 葛利輝,謝麗娟,劉曉軍;人群泌尿系結(jié)石發(fā)病的流行病學(xué)調(diào)查[J];廣西預(yù)防醫(yī)學(xué);1998年06期

2 陳希;諶衛(wèi);丁家榮;殷晶晶;胡海燕;賈猛;郭志勇;;泌尿系結(jié)石患者血脂及相關(guān)影響因素的研究[J];中國(guó)全科醫(yī)學(xué);2011年34期

本文編號(hào)：1750925