發(fā)布時間：2018-04-13 21:27

  本文選題：硬脂酰輔酶A去飽和酶I + 蛋白激酶B　； 參考：《上海交通大學(xué)》2014年博士論文

【摘要】：腎細(xì)胞癌(RCC,renal cell carcinoma)是最為常見的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤之一,目前該腫瘤發(fā)病率的增長速度為2%。25%的腎癌患者在就診時腫瘤已經(jīng)出現(xiàn)局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或者遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。而發(fā)生轉(zhuǎn)移的患者死亡率及術(shù)后腫瘤的復(fù)發(fā)率均明顯高于早期發(fā)現(xiàn)腎癌的患者。腎臟透明細(xì)胞癌(cc RCC,clear cell renal cell carcinoma)是腎癌中最為常見的病理類型,約占腎細(xì)胞癌總數(shù)的80%。腎透明細(xì)胞癌快速生長需要有很強的有氧糖酵解、脂肪合成代謝等一系列物質(zhì)合成過程與之相配合,為腫瘤的快速增殖、侵襲性生長提供物質(zhì)基礎(chǔ)。特別是cc RCC細(xì)胞中富含脂滴的病理特點決定了它具備非常強勁的脂肪合成能力。單純的食物來源已經(jīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足腫瘤細(xì)胞對脂類物質(zhì)的需求,cc RCC細(xì)胞則主要通過從頭脂肪酸合成途徑來合成獲得所需的脂類物質(zhì)。目前的研究發(fā)現(xiàn)cc RCC細(xì)胞中脂肪從頭合成途徑所需的一系列酶表達異�；钴S。我的研究課題研究核心是脂肪酸從頭合成途徑的一個重要的限速酶——硬脂酰輔酶A去飽和酶1(SCD-1),它是催化飽和脂肪酸向單不飽和脂肪酸轉(zhuǎn)化的限速酶,可以催化棕櫚酰輔酶A和硬脂酰輔酶A形成棕櫚油酰輔酶A和油酰輔酶A。棕櫚油酰輔酶A和油酰輔酶A是膜磷脂、三酰甘油酰、膽固醇酯等多種物質(zhì)生物合成的主要底物。SCD-1是一種定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的跨膜蛋白,它對于維持細(xì)胞內(nèi)飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸的正常比例有著重要的作用。近來的研究證明SCD-1參與了多種惡性腫瘤的脂質(zhì)合成代謝,對于腫瘤的生存,增殖和細(xì)胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)都有重要的作用。目前的研究證實膜受體酪氨酸激酶(RTK)-PI3K-AKT-m TOR通路中包含有多個原癌基因,在惡性腫瘤細(xì)胞中,這一通路上的基因表達異常尤為常見。圍繞SCD-1表達異常對腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞的PI3K-AKT-m TOR信號通路的影響這一核心問題,課題具體聚焦三個方面:1)腎透明細(xì)胞癌組織中和透明細(xì)胞細(xì)胞系中SCD-1的表達情況及與腫瘤分期分級的相關(guān)性;2)抑制SCD-1的表達對于PI3K-AKT-m TOR信號通路的影響;3)靶向m TOR抑制劑對于干擾SCD-1表達的穩(wěn)轉(zhuǎn)株細(xì)胞的影響作用。并根據(jù)研究內(nèi)容展開了三部分的研究工作。第一部分腎透明細(xì)胞癌中SCD-1的表達目的:研究SCD-1在腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞株中及腫瘤組織中的表達情況,分析SCD-1的表達與腎透明細(xì)胞癌臨床分期及細(xì)胞分級的相關(guān)性。方法:采用Western蛋白印跡方法進行檢測透明細(xì)胞癌組織和癌膀正常組織中SCD-1的表達及四種透明細(xì)胞癌細(xì)胞株中SCD-1的表達情況。同時采用免疫組化的方法檢測50例腎透明細(xì)胞癌石蠟切片中SCD-1蛋白表達情況,并結(jié)合患者的臨床分期和細(xì)胞分級進行分析。結(jié)果:SCD-1在腎透明細(xì)胞癌組織中的表達量均明顯高于癌旁正常組織中的表達量(P0.05)。SCD-1在四種腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系中的表達量增高,但不同的細(xì)胞株SCD-1的表達量也有所差別。免疫組化結(jié)果示:腫瘤組織中SCD-1的表達量也隨之增加(P0.05)。SCD-1的表達率也隨著腫瘤細(xì)胞分級和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的增加而增加,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.01)。結(jié)論:SCD-1在腎透明細(xì)胞癌組織中的表達量明顯高于鄰近的正常組織。SCD-1在786-O、769-P和CAKI腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞株中表達量較高,而在A498細(xì)胞株中表達量相對較低。SCD-1的表達量與腎透明細(xì)胞癌的分級和臨床分期呈正相關(guān)關(guān)系。SCD-1的表達量與腫瘤的惡性程度有關(guān),組織中的SCD-1表達量可以作為預(yù)測腎透明細(xì)胞癌惡性程度的一個重要指標(biāo)。第二部分SCD-1的表達與AKT信號通路的關(guān)系目的:研究干擾腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞株SCD-1表達后對PI3K-AKT-mTOR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)的影響。方法:通過含有SCD-1干擾質(zhì)粒的病毒干擾786-O和769-P細(xì)胞,建立SCD-1穩(wěn)定干擾細(xì)胞株,然后檢測PI3K-AKT-m TOR信號通路上重要分子的表達改變。用劃痕實驗檢驗SCD-1干擾后對細(xì)胞遷移性的影響。結(jié)果:SCD-1穩(wěn)定干擾株細(xì)胞AKT的磷酸化水平明顯下調(diào),且細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力較未干擾的細(xì)胞有明顯下降(P0.05)。穩(wěn)定干擾SCD-1表達后,細(xì)胞內(nèi)P-AKT(Ser473)和P-AKT(Thr308)兩個位點的活化均有下降,Ser473位點的活性降低較Thr308位點的降低更為明顯。ERK本底的表達未見明顯改變,而P-ERK激活出現(xiàn)明顯的下調(diào)。AKT的上游的PI3K和PDK1分子的表達并沒有發(fā)生相應(yīng)的改變。4E-BP1和P-P70S6K1也出現(xiàn)表達下調(diào)的現(xiàn)象。結(jié)論:SCD-1穩(wěn)定干擾細(xì)胞株中AKT Ser473磷酸化活化水平明顯下降。而Thr308位點磷酸化水平并未受到明顯的抑制。SCD-1穩(wěn)定干擾細(xì)胞株中m TOR1下游分子p70S6K1和4E-BP1的表達明顯下降,提示腫瘤細(xì)胞的蛋白質(zhì)合成受到抑制SCD-1穩(wěn)定干擾細(xì)胞株中AKT上游分子PDK1和PI3K的活性并未受到影響。AKT對ERK的激活能力受到抑制,ERK的磷酸化激活更依賴于Ser473位點的激活,而非Thr308位點。SCD-1穩(wěn)定干擾細(xì)胞株細(xì)胞侵襲能力明顯下降。第三部分靶向藥物治療腎透明細(xì)胞癌的治療策略目的:研究PI3K-AKT-m TOR靶向抑制劑對于SCD-1干擾細(xì)胞株的抑制效應(yīng),探討增強新的靶向聯(lián)合治療方案以提高腎癌的治療效果。方法:通過應(yīng)用PI3K/m TOR抑制劑-PI103,AKT抑制劑MK2206,m TOR抑制劑:Rapamycin,AZD8055,RAD001作用于786-O和769-P細(xì)胞及其對應(yīng)的SCD-1穩(wěn)轉(zhuǎn)株細(xì)胞,觀察藥物對腫瘤生長、增殖及遷移的抑制作用。結(jié)果:AZD8055和PI-103兩種抑制劑可以增強對786-O和769-P SCD-1穩(wěn)定干擾細(xì)胞株的增殖抑制效應(yīng),兩種細(xì)胞半數(shù)抑制濃度均有明顯的下降。AZD8055和PI-103兩種抑制劑可以進一步抑制786-O和769-P SCD-1穩(wěn)定干擾細(xì)胞株的遷移能力。AZD8055和PI-103可以明顯增強對AKT-m TOR通路的抑制作用。結(jié)論:mTORC1和mTORC2抑制劑可以有效的增強對SCD-1干擾細(xì)胞株的增殖抑制效應(yīng),這種抑制效應(yīng)是通過抑制AKT-m TOR通路產(chǎn)生的。多靶點的m TOR抑制劑和SCD-1的抑制劑的聯(lián)合應(yīng)用可以作為一種新的靶向聯(lián)合治療策略。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R737.11

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本文編號：1746265