本文選題：前列腺癌 + LNCaP��； 參考：《復旦大學》2014年博士論文

【摘要】：第一部分 轉移性前列腺癌的轉移能力差異篩選目的：在前列腺癌細胞株中篩選出侵襲和轉移能力最強的細胞株,為進一步尋找與前列腺癌侵襲轉移相關的腫瘤標記物提供依據(jù)。材料與方法：體外培養(yǎng)LNCaP,22RV1, PC-3和DU145細胞株,通過細胞劃痕試驗,Transwell侵襲試驗和Transwell遷移試驗觀測細胞株之間侵襲和轉移能力的差異,并通過明膠酶譜試驗監(jiān)測細胞MMPs的分泌情況。結果：通過體外實驗篩選,我們得到侵襲和轉移能力差異最大的兩株細胞LNCa P和PC-3。劃痕試驗證實PC-3較LNCaP的遷移速率高7.31倍(p0.05),侵襲試驗中PC-3較LNCaP侵襲細胞數(shù)高3.38倍(p0.05)。兩株細胞的侵襲和轉移能力均有明顯差異,通過進一步的機制研究發(fā)現(xiàn),兩株細胞的MMPs水平差異十分顯著。結論：在體外PC-3較LNCaP具有更強的侵襲轉移能力,且分泌更多的基質金屬蛋白酶。第二部分 受甲基化調控差異表達基因的高通量篩選與驗證目的：通過比較LNCaP和PC-3細胞基因組DNA甲基化與mRNA表達水平的差異,篩選受甲基化調控的基因并進行驗證。材料與方法：通過甲基化譜測序(MBD-seq)檢測前列腺癌細胞系PC-3和LNCaP全基因組DNA甲基化修飾情況,并通過轉錄組測序的方法(RNA-seq)檢測PC-3和LNCaP全轉錄組表達。利用生物信息學的方法分析在兩種細胞中受甲基化調控的基因。結果：通過高通量測序與篩選,我們發(fā)現(xiàn)了(CAV1, CAV2, MET, PPARG, COL6A1, ALDH6A1, ALDH2, SMAD3, ITGA6, ITGB8, MCCC1, CAPN2, JAK1, LAMB1) 14個受甲基化調控,可能影響前列腺癌侵襲和轉移能力差異的基因。并對其中7個基因的甲基化改變進行了驗證。結論：通過高通量測序分析DNA甲基化譜改變與mRNA表達水平改變可以快速有效地分析出受甲基化調控的基因。第三部分 候選基因COL6A1的體外功能驗證目的：在功能上驗證受甲基化調控的COL6A1基因在體外是否具有促進侵襲轉移的作用。材料與方法：構建表達針對COL6A1的shRNA與過表達COL6A1的載體并包裝慢病毒,改變原有細胞系COL6A1的表達情況,通過侵襲和劃痕試驗檢測細胞系的功能改變。并對下游信號通路分析進行進一步分析。結果：在本底表達低的細胞系LNCaP中過表達COL6A1,遷移速率較對照組提高50%(p0.05),侵襲細胞數(shù)較對照組提高78.1%(p0.05),MMP9和CXCR4的表達顯著提高。在本底表達COL6A1較高的PC-3中沉默COL6A1的表達,遷移速率較空載對照組降低59.4%(p0.05),侵襲細胞數(shù)較對照組減少66.2%(p0.05)結論：在體外實驗中COL6A1具有促進PC-3和LNCaP侵襲遷移能力的作用。第四部分 候選基因COL6A1的臨床價值研究目的：在臨床樣本中檢測COL6A1是否對前列腺癌轉移具有預測價值。材料與方法：選取于2007-2011年在我院診治的223例確診為前列腺腺癌患者與40例非前列腺腺癌對照的前列腺組織切片,回顧性的收集患者臨床資料。通過免疫組化染色比較隊列中COL6A1的表達水平,并分析與臨床轉移的相關性。結果：在多因素回歸中,Gleason評分(OR=.204,95%CI:1.360 to 12.999,p=0.013),T分期(OR=43.912,95%CI=12.340 to 156.263,p0.01)與COL6A1表達水平 (OR=2.096,95%CI=1.344 to 3.187,p0.01)是預測前列腺癌骨轉移的獨立預后因子,高表達COL6A1的患者具有更短的總生存時間與更多的骨轉移灶。結論：COL6A1表達增加可能提高患者骨轉移發(fā)生的機會,預示著疾病預后不良,可能作為標記物用于今后的臨床實踐。
[Abstract]:Objective : To investigate the effects of methylation of PC - 3 and PC - 3 on the expression of MMP - 3 and PC - 3 in prostate cancer cell line . 鍦ㄦ湰搴曡〃杈句綆鐨勭粏鑳?yōu)绯籐NCaP涓繃琛ㄨ揪COL6A1,榪佺Щ閫熺巼杈冨鐓х粍鎻愰珮50%(p0.05),渚佃緇嗚優(yōu)鏁拌緝瀵圭収緇勬彁楂，

本文編號：1744899