本文選題：腎透明細(xì)胞癌 + miR-193b-3p　； 參考：《第二軍醫(yī)大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：研究背景和目的:腎細(xì)胞癌是全球成人泌尿系統(tǒng)中最常見的惡性腫瘤之一。由于早期局限性腎細(xì)胞癌患者往往沒有明顯的癥狀和體征,容易造成腎細(xì)胞癌腫瘤的漏診。數(shù)據(jù)顯示大約有三分之一的患者在首次診斷為腎細(xì)胞癌時(shí)就已經(jīng)伴有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。而一旦處于晚期轉(zhuǎn)移性腫瘤階段,患者的預(yù)后是很差的。在腎細(xì)胞癌中,透明細(xì)胞型腎細(xì)胞癌是最常見的腎細(xì)胞癌組織學(xué)類型,也是其中侵襲性最強(qiáng)、致死率最高的腫瘤類型。因此對于腎透明細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移發(fā)生過程中的機(jī)制以及涉及其中的關(guān)鍵分子進(jìn)行研究,對于腎透明細(xì)胞癌進(jìn)一步分子分型以及未來針對性的阻止腫瘤轉(zhuǎn)移發(fā)生的治療是非常有意義以及臨床應(yīng)用價(jià)值的。miRNAs是一類已經(jīng)得到大量研究證實(shí)的,能夠在多種腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展、耐藥等生物進(jìn)程中起重要作用的分子類型。之前的很多其他腫瘤中的研究已經(jīng)報(bào)道了miR-193b-3p是一個(gè)重要的能夠發(fā)揮抑癌作用的miRNA分子,miR-193b-3p在很多腫瘤組織中均發(fā)生了下調(diào)表達(dá)。本課題研究中,我們通過miRNAs表達(dá)譜芯片技術(shù),在不同轉(zhuǎn)移狀態(tài)的腎透明細(xì)胞癌腫瘤組織之間,通過篩選差異表達(dá)的miRNAs分子時(shí)發(fā)現(xiàn)miR-193b-3p在伴有轉(zhuǎn)移的腎透明細(xì)胞癌腫瘤組織中顯著下調(diào)表達(dá)。進(jìn)一步通過臨床大樣本的組織驗(yàn)證分析,我們證實(shí)了miR-193b-3p在mi RNAs表達(dá)譜芯片中的結(jié)果。接著我們結(jié)合收集的腎透明細(xì)胞癌患者的臨床病理參數(shù)、隨訪資料等明確了miR-193b-3p的表達(dá)量具有作為腎透明細(xì)胞癌預(yù)后預(yù)測分子的作用。接著在細(xì)胞表型水平和動物體內(nèi)進(jìn)一步驗(yàn)證了miR-193b-3p能夠抑制腎透明細(xì)胞癌的增殖和轉(zhuǎn)移的能力,并確定了在腎透明細(xì)胞癌中miR-193b-3p潛在的靶向基因。材料和方法:1、我們依據(jù)腎細(xì)胞癌患者首次術(shù)前診斷時(shí)是否明確診斷存在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,分為原發(fā)轉(zhuǎn)移和原發(fā)非轉(zhuǎn)移兩組,選取術(shù)后病理確認(rèn)為透明細(xì)胞型的腎細(xì)胞癌患者的腫瘤組織病灶,每組3例,利用miRNAs表達(dá)譜芯片技術(shù),進(jìn)而篩選出兩組間miRNAs的表達(dá)量存在著顯著差異的miRNA分子。2、我們應(yīng)用qRT-PCR的方法,將mi RNAs表達(dá)譜芯片篩選出的存在差異表達(dá)的miR-193b-3p,在原發(fā)轉(zhuǎn)移和原發(fā)非轉(zhuǎn)移腎透明細(xì)胞癌組織及其與之匹配的癌旁組織之間進(jìn)行大樣本量的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,并且結(jié)合隨訪收集的腎透明細(xì)胞癌患者的臨床病理資料以及患者的隨訪資料,分析miR-193b-3p的表達(dá)量與腎透明細(xì)胞癌患者的一些常見的臨床病理參數(shù)以及患者預(yù)后之間的關(guān)系。3、接著在體外細(xì)胞學(xué)層面,我們應(yīng)用miR-193b-3p的抑制劑miR-193b-3p inhibitor和模擬劑mir-193b-3pmimics分別轉(zhuǎn)染786-o和achn細(xì)胞株進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn),采用慢病毒構(gòu)建穩(wěn)定過表達(dá)的mir-193b-3p載體進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。通過cck-8實(shí)驗(yàn)、westernblot實(shí)驗(yàn)、brdu實(shí)驗(yàn)、克隆形成實(shí)驗(yàn)探討mir-193b-3p對于腎癌細(xì)胞株增殖能力的作用,并通過裸鼠皮下荷瘤觀察腫瘤生長以及對移植瘤進(jìn)行免疫組化染色進(jìn)一步確認(rèn)。此外我們通過體外腫瘤細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、transwell遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)探討mir-193b-3p對于腎癌細(xì)胞株的遷移和侵襲能力的影響,并在建立尾靜脈注射腎癌肺轉(zhuǎn)移動物模型上通過體外熒光成像和肺組織he染色進(jìn)一步觀察mir-193b-3p對于腎癌轉(zhuǎn)移的影響。4、接著我們結(jié)合轉(zhuǎn)錄組芯片中差異表達(dá)的mrna以及mirna靶向預(yù)測工具,應(yīng)用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)、qrt-pcr實(shí)驗(yàn)、westernblot實(shí)驗(yàn)、免疫熒光檢測實(shí)驗(yàn),探討了在腎透明細(xì)胞癌中mir-193b-3p可能的下游靶向基因。研究結(jié)果:1、在原發(fā)轉(zhuǎn)移的腎透明細(xì)胞癌和原發(fā)非轉(zhuǎn)移的腎透明細(xì)胞癌腫瘤組織之間,通過mirnas表達(dá)譜芯片篩選出差異表達(dá)的mirnas共27個(gè),其中下調(diào)表達(dá)12個(gè),上調(diào)表達(dá)15個(gè)。結(jié)合差異表達(dá)倍數(shù)(foldchange)、錯(cuò)誤發(fā)現(xiàn)率(fdrvalue)以及相關(guān)文獻(xiàn)調(diào)研,選定mir-193b-3p進(jìn)行進(jìn)一步研究。2、根據(jù)qrt-pcr檢測結(jié)果分析,我們發(fā)現(xiàn)mir-193b-3p在腎透明細(xì)胞癌組織中呈現(xiàn)顯著的低表達(dá)(p0.05),并且在原發(fā)轉(zhuǎn)移的腎透明細(xì)胞癌腫瘤組織中進(jìn)一步降低(p0.05)。另外結(jié)合腎透明細(xì)胞癌患者的臨床病理資料,我們發(fā)現(xiàn)mir-193b-3p的下調(diào)表達(dá)與臨床晚期、高pt分級以及腫瘤陽性轉(zhuǎn)移狀態(tài)呈現(xiàn)顯著相關(guān)。kaplan-meier生存分析發(fā)現(xiàn)腫瘤組織中低表達(dá)mir-193b-3p的腎透明細(xì)胞癌患者的術(shù)后腫瘤容易發(fā)生疾病進(jìn)展、患者的預(yù)后生存較差。cox多因素風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)mir-193b-3p的表達(dá)水平能夠作為腎透明細(xì)胞癌患者疾病進(jìn)展和生存的獨(dú)立預(yù)后危險(xiǎn)因素。3、cck-8實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)染了mir-193b-3pinhibitor能夠顯著的增強(qiáng)腎癌細(xì)胞株的增殖能力,而轉(zhuǎn)染mir-193b-3pmimics則顯著的抑制了腎癌細(xì)胞株的增殖能力。westernblot實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染mir-193b-3pinhibitor能夠增強(qiáng)ki-67以及pcna這兩個(gè)細(xì)胞增殖能力特異性抗原的表達(dá),而轉(zhuǎn)染mir-193b-3pmimics則顯著抑制了ki-67和pcna的表達(dá)。brdu實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)敲減mir-193b-3p能夠增加brdu陽性細(xì)胞比率,而過表達(dá)mir-193b-3p則減少了brdu的陽性細(xì)胞比率。細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)敲減mir-193b-3p會增加腎癌細(xì)胞的集落形成,而過表達(dá)mir-193b-3p則會減少腎癌細(xì)胞的集落形成。裸鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,我們發(fā)現(xiàn)穩(wěn)定過表達(dá)mir-193b-3p能夠顯著地抑制裸鼠皮下荷瘤的生長。通過對裸鼠皮下荷瘤進(jìn)行免疫組化染色發(fā)現(xiàn)ki-67、PCNA以及CD31的表達(dá)顯著受到了抑制。4、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)表明轉(zhuǎn)染了miR-193b-3p inhibitor的腎癌細(xì)胞劃痕愈合能力顯著增加,而轉(zhuǎn)染了mi R-193b-3p mimics的腎癌細(xì)胞劃痕能力則顯著收到了抑制。Transwell遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)表明敲減miR-193b-3p的腎癌細(xì)胞株的遷移和侵襲能力得到了顯著的增強(qiáng),而過表達(dá)miR-193b-3p則顯著抑制了腎癌細(xì)胞株的遷移和侵襲能力。通過尾靜脈注射腎癌細(xì)胞建立肺轉(zhuǎn)移模型發(fā)現(xiàn),穩(wěn)定過表達(dá)miR-193b-3p能夠顯著性地抑制腎癌肺微轉(zhuǎn)移灶的形成。5、雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)了mi R-193b-3p能夠直接靶向MCL1、MMP19和E2F6的3'UTR區(qū)域。qRT-PCR實(shí)驗(yàn)、western blot實(shí)驗(yàn)以及免疫熒光檢測實(shí)驗(yàn)證實(shí)了miR-193b-3p能夠抑制其靶向基因MCL1、MMP19和E2F6的mRNA和蛋白的表達(dá)。因此miR-193b-3p可能通過調(diào)節(jié)MCL1、MMP19和E2F6的表達(dá)在腎透明細(xì)胞癌中發(fā)揮抑制腎癌細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移的能力。研究結(jié)論:1、與癌旁腫瘤組織比較,miR-193b-3p在腎透明細(xì)胞癌腫瘤組織中顯著下調(diào)表達(dá),并在原發(fā)轉(zhuǎn)移的腎透明細(xì)胞腫瘤組織中進(jìn)一步下調(diào)表達(dá)。結(jié)合腎透明細(xì)胞癌患者的臨床資料分析發(fā)現(xiàn)miR-193b-3p具備作為判斷腎透明細(xì)胞癌患者預(yù)后生物標(biāo)記物的潛質(zhì)。2、miR-193b-3p能夠顯著地抑制腎癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力,在腎透明細(xì)胞癌的疾病進(jìn)程中起著關(guān)鍵的抑癌作用。3、在腎透明細(xì)胞癌中,miR-193b-3p能夠靶向結(jié)合MCL1、MMP19和E2F6的3'UTR區(qū),負(fù)性調(diào)控其靶向基因的表達(dá)發(fā)揮作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.11

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 楊勇;小兒腎透明細(xì)胞癌1例報(bào)告[J];陜西醫(yī)學(xué)雜志;2003年02期

2 易仁亮;老年雙腎透明細(xì)胞癌1例報(bào)告[J];實(shí)用老年醫(yī)學(xué);2005年03期

3 楊華,王華慶;腎透明細(xì)胞癌的全身治療現(xiàn)狀及進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué).外科學(xué)分冊;2005年06期

4 李云輝,林華歡;腎透明細(xì)胞癌術(shù)后遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移3例[J];廣東醫(yī)學(xué);2005年01期

5 胡蜀雯;劉華麗;;超聲診斷以囊性病變?yōu)橹鞯哪I透明細(xì)胞癌1例[J];臨床超聲醫(yī)學(xué)雜志;2007年03期

6 石泓哲;李長嶺;;紅色膠狀腎透明細(xì)胞癌的臨床及病理特點(diǎn)——附2例報(bào)告[J];癌癥進(jìn)展;2007年06期

7 歐陽可雄;陳偉良;黃志權(quán);李勁松;張樹標(biāo);;腎透明細(xì)胞癌伴下頜骨轉(zhuǎn)移1例報(bào)告[J];中國口腔頜面外科雜志;2008年01期

8 祖強(qiáng);洪寶發(fā);;受體酪氨酸激酶抑制劑對于晚期腎透明細(xì)胞癌的靶向治療作用[J];中國藥物應(yīng)用與監(jiān)測;2008年02期

9 藍(lán)建發(fā);陳一戎;潘華;史葆光;段國蘭;;小窩蛋白-1與血小板反應(yīng)蛋白在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及其意義[J];現(xiàn)代泌尿外科雜志;2009年03期

10 趙彥博;李麗;;腎透明細(xì)胞癌的螺旋CT表現(xiàn)與病理對照分析[J];中國煤炭工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志;2011年11期

相關(guān)會議論文 前10條

1 劉婧;;腎透明細(xì)胞癌伴全身轉(zhuǎn)移在全身擴(kuò)散加權(quán)成像的影像規(guī)律[A];中華醫(yī)學(xué)會第16次全國放射學(xué)學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2009年

2 耿江;方祖軍;吳忠;姜昊文;鄭捷;丁強(qiáng);;腎透明細(xì)胞癌術(shù)后遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(附15例報(bào)告)[A];第十五屆全國泌尿外科學(xué)術(shù)會議論文集[C];2008年

3 桂定文;張青漢;;腎透明細(xì)胞癌頭皮轉(zhuǎn)移一例報(bào)告[A];第七次中國中西醫(yī)結(jié)合泌尿外科學(xué)術(shù)年會暨第二次廣東省中西醫(yī)結(jié)合泌尿外科學(xué)術(shù)年會論文集[C];2009年

4 凌月蓉;葉軍;;腎透明細(xì)胞癌彩色多普勒超聲表現(xiàn)分析[A];中國超聲醫(yī)學(xué)工程學(xué)會第八屆全國腹部超聲學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

5 吳俊;梅長林;趙海丹;戴兵;劉亞偉;;多囊蛋白-1在腎透明細(xì)胞癌及常染色體顯性多囊腎病患者體液中含量的比較研究[A];中華醫(yī)學(xué)會腎臟病學(xué)分會2006年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2006年

6 柏瑞;歐陜興;林偉光;;雙腎透明細(xì)胞癌胰腺轉(zhuǎn)移一例報(bào)告[A];中華醫(yī)學(xué)會第十三屆全國放射學(xué)大會論文匯編（下冊）[C];2006年

7 尹森琴;鄭勇明;江時(shí)忠;朱斌;陳立忠;章明圖;;腎透明細(xì)胞癌的螺旋CT表現(xiàn)與病理對照研究[A];2007年浙江省放射學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2007年

8 畢偉;徐麗偉;徐春媚;董曉秋;;腎透明細(xì)胞癌超聲造影模式及定量指標(biāo)分析[A];中國超聲醫(yī)學(xué)工程學(xué)會第七屆全國腹部超聲學(xué)術(shù)會議學(xué)術(shù)論文匯編[C];2007年

9 徐麗偉;徐春媚;畢偉;董曉秋;;腎透明細(xì)胞癌超聲造影模式與其病理分化程度的相關(guān)性[A];中國超聲醫(yī)學(xué)工程學(xué)會第七屆全國腹部超聲學(xué)術(shù)會議學(xué)術(shù)論文匯編[C];2007年

10 鄭宇朋;;腎透明細(xì)胞癌三次轉(zhuǎn)移至鼻腔[A];第十五屆全國泌尿外科學(xué)術(shù)會議論文集[C];2008年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前2條

1 張中橋;Survivin在腎透明細(xì)胞癌中起重要作用[N];中國醫(yī)藥報(bào);2006年

2 王茜;隱瞞病情可能更會嚇壞患者,好心態(tài)是良藥[N];新華每日電訊;2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 趙作輝;腎透明細(xì)胞癌的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];山東大學(xué);2015年

2 王暉;腎透明細(xì)胞癌硬脂酰輔酶A去飽和酶I對AKT信號通路的調(diào)控機(jī)制的研究[D];上海交通大學(xué);2014年

3 葛南;MGMT基因表達(dá)在腎細(xì)胞癌治療中的作用研究[D];山東大學(xué);2015年

4 趙建軍;腎透明細(xì)胞癌中miR-630的表達(dá)及與其臨床生物學(xué)行為關(guān)系的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2014年

5 夏秋媛;SWI/SNF染色質(zhì)重塑復(fù)合物亞基BRM在腎透明細(xì)胞癌中缺失及其機(jī)制研究[D];南京大學(xué);2014年

6 李春景;PGAM1在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)、臨床意義及其功能研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

7 高宇;KLF6基因表達(dá)下調(diào)在腎透明細(xì)胞癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移中的作用及其機(jī)制研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2016年

8 許力為;MiR-186-5p在腎透明細(xì)胞癌侵襲轉(zhuǎn)移和血管生成中作用的研究[D];浙江大學(xué);2016年

9 王明超;睪丸孤核受體4（TR4）在腎透明細(xì)胞癌侵襲轉(zhuǎn)移中作用及其機(jī)制的研究[D];浙江大學(xué);2016年

10 朱冶華;腎透明細(xì)胞癌侵襲性與CT強(qiáng)化特征相關(guān)性研究[D];上海交通大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 秦杰;腎透明細(xì)胞癌3、7、8、9、17號染色體的雜合性缺失研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2009年

2 丁家寶;E2F1及EGR-1在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 郭巖松;ERCC1在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及其意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

4 朱鑫;HDAC1及E2F1在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

5 趙輝;DECT皮髓早期增強(qiáng)序列圖像對腎透明細(xì)胞癌的診斷價(jià)值[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2015年

6 魏晉艷;能譜CT成像在腎透明細(xì)胞癌術(shù)前分級評估 中的價(jià)值研究[D];蘭州大學(xué);2015年

7 高裕;CREPT在腎透明細(xì)胞癌的作用機(jī)制研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2015年

8 王鵬;緊密連接蛋claudin-4在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及其預(yù)后意義[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2015年

9 牛少曦;miR-223在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)和作用[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2015年

10 李金濤;腫瘤干細(xì)胞ALDH1和ABCG2在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及其臨床意義[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;2015年

，

本文編號：1735311