發(fā)布時間：2018-04-09 21:29

  本文選題：慢性腎衰竭　切入點：血管鈣化　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：目的： 心血管疾病（cardiovascular disease，CVD）是慢性腎臟�。╟hronic kidneydisease，CKD）患者的主要并發(fā)癥之一，血管鈣化是導(dǎo)致CKD患者發(fā)生CVD的首要原因。血管鈣化類似于成骨或成軟骨過程，并由多種細(xì)胞、分子共同參與調(diào)節(jié)，但其發(fā)生機制迄今尚未完全闡明。目前高磷血癥是參與CKD患者血管鈣化形成的主要危險因素之一。研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞外磷通過血管平滑肌細(xì)胞（VSMCs）上的鈉磷協(xié)同轉(zhuǎn)運體（Pit-1）進入細(xì)胞內(nèi)，通過誘導(dǎo)VSMCs向成骨或成軟骨樣細(xì)胞轉(zhuǎn)分化，導(dǎo)致了血管鈣化的發(fā)生。目前臨床上對于血管鈣化的防治尚沒有較好的方法。隨著對血管鈣化研究的深入，近來研究發(fā)現(xiàn)基質(zhì)GlA蛋白、胎球蛋白-A、骨橋蛋白、骨保護蛋白等都對血管鈣化有保護性作用。但目前關(guān)于鎂離子與CKD血管鈣化的研究較少，為此本實驗建立了慢性腎衰竭大鼠血管鈣化模型，觀察鎂對主動脈血管鈣化及彈性功能的影響，并對其可能機制進行了初步探討。 方法： 1實驗對象 本論文采用完全隨機對照的研究方法，將于河北醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心購買的32只清潔級、健康、雄性、5周齡的SD大鼠，在河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院動物中心屏障環(huán)境適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機分為4組：正常對照組、慢性腎衰竭血管鈣化組、低鎂組、高鎂組。分別用硫酸腺嘌呤灌胃（600mg/kg/d）14天+高磷飲食（P1.2%）13周復(fù)制慢性腎衰竭大鼠血管鈣化模型，分別給予不同濃度鎂飲食(Mg0.02%,0.05%,0.15%)干預(yù)。 2實驗標(biāo)本的留取 四組大鼠于屏障環(huán)境飼養(yǎng)15周后通過心臟取血留取血標(biāo)本，處死大鼠后取其胸主動脈全段、腹主動脈全段及腎臟，部分于10%福爾馬林溶液中固定，腹主動脈全段于烤箱80℃中烘干后常溫保存，余標(biāo)本于-80℃冰箱保存，分離出的血清于-20℃冰箱保存。 3慢性腎衰竭大鼠主動脈脈搏波速率的測定 通過多導(dǎo)電生理儀記錄動脈的壓力波形，測量大鼠胸主動脈-腹主動脈內(nèi)兩個導(dǎo)管尖端的距離(D)，計算胸主動脈-腹主動脈壓力的時間延遲(T)，計算PWV，PWV=D/T。 4慢性腎衰竭大鼠的腎臟病理及血清學(xué)指標(biāo)的檢測 對大鼠腎臟組織進行HE染色，觀察腎臟結(jié)構(gòu)的病理改變，化驗血清鈣、磷、鎂、尿素氮、肌酐，以判斷慢性腎衰竭大鼠模型是否建立成功。 5慢性腎衰竭大鼠的血管HE、Von kossa染色及鈣含量測定方法 對大鼠胸主動脈上段血管壁行常規(guī)HE染色及Von kossa鈣化染色，檢測各組胸主動脈的血管鈣化情況。對大鼠腹主動脈全段血管壁用鄰甲酚酞絡(luò)合酮比色法檢測主動脈鈣含量。 6慢性腎衰竭大鼠胸主動脈核心結(jié)合因子α1（cbfα1）mRNA表達(dá)情況 對大鼠胸主動脈下段血管壁用RT-PCR方法檢測主動脈血管鈣化標(biāo)志分子核心結(jié)合因子α1（cbfα1）mRNA的表達(dá)情況。 7統(tǒng)計分析 采用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件對所有數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理，符合正態(tài)分布的計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x s）表示，兩組間均數(shù)比較用t檢驗，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析（ANOVA），用S-N-K檢驗（Student-Newman-Keuls，SNK）作多組間均數(shù)兩兩比較。余者采用秩和檢驗和Spearman相關(guān)分析, P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果： 1高磷誘導(dǎo)慢性腎衰竭大鼠模型的構(gòu)建 腎臟大體觀察：腎臟明顯腫脹，呈灰白色，表面呈細(xì)顆粒狀，缺乏光澤，為“大白腎”，腎被膜與腎實質(zhì)粘連，不易剝脫，切面皮、髓質(zhì)界限不清。 腎臟HE染色：腎小管內(nèi)可見大量棕黑色結(jié)晶,異物巨細(xì)胞肉芽腫形成,灶狀腎小管擴張,部分可見少量蛋白管型,間質(zhì)灶片狀淋巴單核細(xì)胞浸潤伴纖維化（見圖1b）。 血清學(xué)指標(biāo):與正常對照組比較，慢性腎衰竭鈣化組、低鎂組、高鎂組的Scr、BUN、Ca、P、Ca×P均明顯升高（P＜0.05）；慢性腎衰竭鈣化組、低鎂組、高鎂組之間的Scr、BUN、Ca、P、Ca×P無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。 2鎂對高磷誘導(dǎo)慢性腎衰竭大鼠主動脈血管彈性功能及鈣化的影響 與正常對照組比較，慢性腎衰竭血管鈣化組主動脈PWV明顯增快、鈣含量明顯增高(P＜0.05)，主動脈Von kossa染色：主動脈血管中膜可見大量棕黑色顆粒沉積（圖1b）。與慢性腎衰竭血管鈣化組比較，低鎂組的主動脈血管PWV和鈣含量明顯升高（P＜0.05），主動脈鈣化進一步加重。高鎂組主動脈血管PWV和鈣含量明顯降低（P＜0.05），主動脈血管鈣化減輕。 3鎂對高磷誘導(dǎo)慢性腎衰竭大鼠主動脈Cbfα1mRNA表達(dá)情況 與正常對照組比較，慢性腎衰竭血管鈣化組主動脈Cbfα1mRNA表達(dá)明顯升高(P＜0.05)；與慢性腎衰竭血管鈣化組比較，低鎂組的主動脈Cbfα1mRNA表達(dá)明顯升高（P＜0.05），高鎂組主動脈Cbfα1mRNA表達(dá)明顯降低（P＜0.05）。 結(jié)論： 1高鎂可抑制高磷誘導(dǎo)慢性腎衰竭大鼠胸主動脈的血管鈣化，，改善血管彈性功能。 2鎂離子通過降低主動脈血管平滑肌細(xì)胞cbfα1的表達(dá)來抑制高磷誘導(dǎo)慢性腎衰竭大鼠胸主動脈血管鈣化。
[Abstract]:Objective:
Cardiovascular disease (cardiovascular disease CVD) is a chronic kidney disease (chronic kidneydisease CKD) is one of the major complications, vascular calcification is a leading cause of CKD in patients with CVD. Vascular calcification is similar to bone or cartilage, and by a variety of cells, molecules involved in the regulation of common, but its pathogenesis has not yet been fully clarify. At present, hyperphosphatemia is one of the main risk in CKD patients with vascular calcification. The study found that the factors for the formation of extracellular phosphate by vascular smooth muscle cells (VSMCs) on sodium phosphate cotransporter (Pit-1) into cells by inducing VSMCs into bone or cartilage like cells transdifferentiation, leading to vascular calcification at present for the prevention and treatment of vascular calcification is no better method. With the study of vascular calcification in depth, a recent study found that the matrix GlA protein, fetuin -A, osteopontin White, osteoprotegerin have protective effect on vascular calcification. But on the magnesium ion and CKD of vascular calcification is less studied, this experiment established the model of chronic renal failure on vascular calcification in rats, to observe the effect of magnesium on calcification and aortic elasticity, and the possible mechanism was discussed.
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本文編號：1728226