本文選題：系統(tǒng)性紅斑狼瘡　切入點：警報素　出處：《廣州醫(yī)科大學》2014年碩士論文

【摘要】：研究背景及目的： 系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)是一種遺傳、性激素、環(huán)境、感染等多因素參與其中的特異性自身免疫性疾病，其特征性表現(xiàn)為全身多系統(tǒng)和臟器受累，血清中存在大量自身抗體。腎臟是SLE最容易受累的靶器官，狼瘡腎炎（lupus nephritis，LN）是SLE最重要的臨床表現(xiàn)之一。LN對患者預后影響極大，腎功能衰竭是SLE的三大主要死亡原因之一。目前LN的致病機制仍未完全清楚，治療仍以傳統(tǒng)抗慢性風濕病藥物（Diseases ModifyingAntirheumatic Drugs,DMARDS）為主，生物制劑的出現(xiàn)雖然帶來了更多的治療選擇，但效果仍不盡人意。因此，針對LN疾病機制的深入研究以及新藥開發(fā)，依然任重道遠。 固有免疫系統(tǒng)異常在SLE發(fā)病早期即出現(xiàn)，甚至早于臨床表現(xiàn)，而且貫穿整個疾病過程。病原相關分子模式（pathogen associated molecular patterns，PAMPs）和損傷相關分子模式（damage associated molecular patterns，DAMPs）是固有免疫系統(tǒng)識別外源性和內(nèi)源性危險信號的方式。他們可以被表達于免疫細胞上的模式識別受體（pattern recognition receptors，PRRs）所識別，從而啟動免疫應答。 警報素是機體組織細胞損傷時所釋放的內(nèi)源性危險分子。當機體細胞壞死或免疫細胞受到炎癥刺激時，警報素通過被動或主動的方式釋放到細胞間質(zhì)中，與免疫細胞特異性受體結(jié)合，激活胞內(nèi)信號通路，誘導炎癥反應，募集趨化單核/巨噬細胞、中性粒細胞和特異性T細胞，從而啟動固有免疫和調(diào)節(jié)特異性免疫反應。在自身免疫性疾病中，由于自身免疫紊亂，警報素往往作為炎癥因子參與疾病的損傷過程，從而加重組織損傷并形成惡性循環(huán)。目前警報素在SLE、類風濕關節(jié)炎(Rheumatoid arthritis，RA)、系統(tǒng)性硬化、干燥綜合征、炎癥性腸病等自身免疫性疾病疾病被廣泛研究。不同的警報素之間具有類似的免疫激活模式。 白介素-33（interleukin-33,IL-33)是警報素的最新成員，其受體包括表達在免疫細胞表面的特異性受體ST2，以及被分泌到細胞外可以導致IL-33失活的誘騙受體可溶性ST2(Soluble ST2，sST2)。IL-33/ST2信號通路的激活，可激活受體細胞下游有絲分裂原激活蛋白激酶（MAPK）及結(jié)合核因子κB（NF-κB），從而介導大量炎癥因子產(chǎn)生，造成自身免疫性組織受損。動物體內(nèi)實驗證明，予sST2治療可以減輕RA、藥物誘導急性腎損傷、哮喘等疾病的炎癥受損。 臨床研究發(fā)現(xiàn), SLE患者血清IL33/sST2顯著升高，而且升高水平與狼瘡疾病活動度指數(shù)評分（SLEDAI）呈正相關。SLE動物模型予以抗IL-33抗體治療可以減輕狼瘡腎炎病情。以上研究提示IL-33/ST2通路可能以腎臟為靶點而參與SLE免疫激活，而拮抗該通路的激活有望成為治療LN的新途徑。 但目前關于IL-33/ST2通路如何參與狼瘡腎炎炎癥性損傷的機制仍不甚明了。本研究旨在闡明：IL-33是否來源于腎臟，，儲備釋放細胞是什么細胞，其表達水平是否可反應腎臟受損程度；外周血表面表達ST2受體是什么免疫細胞，以及IL-33與表達ST2受體的免疫細胞是如何通過相互作用導致腎臟炎癥損傷等問題。 材料和方法： 1、SPF級8周齡雌性MRL/lpr狼瘡小鼠以及同齡雌性C57BL/6J健康小鼠各5只，動態(tài)觀察2組小鼠一般情況以及檢測尿蛋白水平。18周齡時處死，檢測血清ds-DNA、血清肌酐、尿素水平，行腎組織HE、PASM、MASSON染色觀察腎臟病變。 2、Real time PCR方法檢查2組小鼠腎組織IL-33mRNA表達水平。western blot檢測腎組織IL-33蛋白表達水平。分析IL-33表達水平與尿蛋白、血清ds-DNA的相關性。 3、通過免疫組化技術，定位IL-33在腎組織的表達位置，進一步通過免疫熒光雙染定位IL-33的表達細胞來源。 4、流式細胞術檢測SLE患者及健康體檢者外周血CD4+T細胞和CD14+單核細胞表面ST2受體的表達水平。使用軟件Image J進行圖像分析，所有數(shù)據(jù)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件處理，正態(tài)分布并且方差齊同的定量資料以均數(shù)±標準差表示，偏態(tài)分布資料以中位數(shù)表示，2組間均數(shù)比較采用t檢驗或秩和檢驗。等級資料組間比較采用秩和檢驗，相關性分析采用spearman相關系數(shù)。p0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。 結(jié)果： 1、小鼠一般情況及尿蛋白水平 2組動物在處死前均存活，C57組精神狀態(tài)良好，食欲良好，活躍，皮毛有光澤，未見脫毛，四肢關節(jié)無腫脹。MRL/lpr組精神狀態(tài)一般，食量較對照組減少，懶動,小鼠全身不同程度浮腫。淺表處可觸及數(shù)量不等腫大淋巴結(jié)。皮毛顏色缺少光澤，但未見明顯脫毛。部分小鼠后膝關節(jié)輕度-中度腫脹。尿蛋白從14周齡開始檢測，每隔2周一次，MRL/lpr組所有小鼠均出現(xiàn)了不同程度的蛋白尿，但整體上沒有出現(xiàn)尿蛋白進行性增多趨勢。C57組所有小鼠尿蛋白均為陰性。 2、小鼠血清尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）及ds-DNA的測定 MRL/lpr組血清BUN為10.04±1.79mmol/L，C57組為7.42±1.00mmol/L，2組之間差別無統(tǒng)計學意義（P=0.300）；MRL/lpr組血清Scr為25.60±7.30ummol/L，C57組為25.75±8.54ummol/L，同樣2組之間差別無統(tǒng)計學意義（P=0.878）。血清ds-DNA，MRL/lpr組均為陽性（2+～4+），而C57組則未見陽性表達，2組之間差異有統(tǒng)計學意義（p=0.003）。 3、普通及特殊病理切片結(jié)果 HE染色：C57小鼠腎組織可見腎小球結(jié)構顯示清晰，小球內(nèi)可見血管袢；MRL/lpr狼瘡小鼠則見腎小球明顯肥大，結(jié)構紊亂，小球及腎間質(zhì)可見大量淋巴細胞浸潤。PASM染色：MRL/lpr狼瘡小鼠可見腎小球基底膜明顯增厚，內(nèi)皮及上皮細胞增生明顯；而C57小鼠基底膜基本正常，未見明顯內(nèi)皮及上皮細胞增生。MASSON染色：MRL/lpr狼瘡小鼠可見腎小球內(nèi)大量嗜紅免疫復合物沉積，腎小管內(nèi)可見大量蛋白管型；而C57小鼠腎小球結(jié)構清晰，未見免疫復合物沉積，腎小管管腔未見蛋白管型。 4、IL-33在腎組織的表達水平 MRL/lpr組較C57組表達IL-33mRNA水平平均升高2.73±1.34倍，兩組比較有統(tǒng)計學差異（p=0.045）。說明從mRNA水平看，MRL/lpr小鼠腎組織上調(diào)了IL-33的表達。MRL/lpr組較C57組表達IL-33蛋白水平顯著升高（灰度比值為0.558±0.094vs0.034±0.002），C57組IL-33表達量極少，兩組比較有統(tǒng)計學差異（p=0.0005）。說明從蛋白水平看，MRL/lpr小鼠腎組織上調(diào)了IL-33的表達。 5、MRL/lpr小鼠腎組織IL-33蛋白與尿蛋白、血清ds-DNA的相關性分析 spearman相關系數(shù)分析顯示MRL/lpr小鼠腎組織IL-33灰度比值變化與半定量尿蛋白變化呈明顯正相關（r2=0.72，p=0.037）。而與血清ds-DNA半定量水平則無明顯相關（r2=0.386，p=0.215），但也出現(xiàn)正相關趨勢。 6、IL-33在小鼠腎組織的表達來源細胞 MRL/lpr在腎小球基底膜區(qū)細胞有較多IL-33表達，腎間質(zhì)少見IL-33表達。C57只有極個別腎小球基底膜區(qū)細胞表達IL-33，較MRL/lpr顯著減少。進一步行免疫熒光雙染檢測（IL-33+VWF）發(fā)現(xiàn)，IL-33表達在腎小球內(nèi)皮細胞。 7、LN患者與健康體檢者外周血細胞ST2受體的表達 與健康對照組相比，ST2受體高表達于LN患者外周血CD4+T細胞及CD14+單核細胞表面，2組有顯著差異。 結(jié)論： 1、IL-33高表達于MRL/lpr小鼠腎組織，并且表達水平與可反應腎損害程度的尿蛋白水平呈正相關。 2、IL-33在腎組織的表達來源細胞是腎小球內(nèi)皮細胞。 3、LN患者外周血單核細胞和CD4T細胞表面高表達ST2受體，提示IL-33可能通過介導外周血單核細胞和CD4T細胞趨化浸潤至腎臟組織而導致腎臟炎癥損傷。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：廣州醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R593.242

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 劉曉萃;劉曉斐;陳兵;何守志;;IL-33在β-淀粉樣蛋白刺激視網(wǎng)膜色素上皮細胞中的表達及作用研究[J];現(xiàn)代免疫學;2014年01期

2 張恒超;房林;;IL-33在急性胰腺炎大鼠血清中的變化及意義[J];同濟大學學報(醫(yī)學版);2010年05期

3 宋向鳳;田中偉;;IL-33與皮膚炎癥性疾病關系的研究進展[J];細胞與分子免疫學雜志;2014年09期

4 孫海斌;王曉蕾;郁敏;金未來;;急性免疫性血小板減少癥患兒血清IL-33檢測及其意義[J];現(xiàn)代免疫學;2012年06期

5 周全;吳熊焰;劉炳亞;蘇麗萍;;IL-33及其受體與腫瘤發(fā)生、發(fā)展關聯(lián)性的研究進展[J];外科理論與實踐;2013年06期

6 宿曉東;李軍;王國芳;石俊強;于珊珊;;IL-33研究進展[J];濟寧醫(yī)學院學報;2012年03期

7 ;[J];;年期

8 ;[J];;年期

9 ;[J];;年期

10 ;[J];;年期

相關會議論文 前4條

1 賀新良;趙建平;;IL-33對哮喘小鼠外周血淋巴細胞分泌Th1/Th2細胞因子的影響[A];中華醫(yī)學會呼吸病學年會——2011（第十二次全國呼吸病學學術會議）論文匯編[C];2011年

2 于磊;王周;竇偉;劉康;范維玲;劉泗寶;陸麗芳;寇東霞;李振;;患者血清IL-33和MMP12水平與頸動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性及腦梗死的關系[A];山東省2013年神經(jīng)內(nèi)科學學術會議暨中國神經(jīng)免疫大會2013論文匯編[C];2013年

3 胡朝梁;謝俊剛;趙建平;;TNF-α和LPS對哮喘患者外周血單個核細胞IL-33分泌的影響[A];中華醫(yī)學會呼吸病學年會——2013第十四次全國呼吸病學學術會議論文匯編[C];2013年

4 程龍獻;;ST2信號轉(zhuǎn)導通路IL-33、ST2和IL1RAP基因多態(tài)性與冠心病易感性研究[A];中華醫(yī)學會第十五次全國心血管病學大會論文匯編[C];2013年

本文編號：1727030