發(fā)布時間：2018-04-05 03:12

  本文選題：男性不育　切入點：TEX15　出處：《安徽醫(yī)科大學》2016年碩士論文

【摘要】：目前,不孕不育困擾著10-15%的育齡夫婦。其中因為男性因素引起的不育比例約占一半,并且呈現(xiàn)逐年遞增的趨勢。男性不育的已知原因有生殖道梗阻或物理性阻塞、免疫性因素、生殖系統(tǒng)炎癥及性功能障礙等,但找不到病因的患者的比例有60%~75%之多,稱為特發(fā)性男性不育,表現(xiàn)為無精子癥或少弱精癥。約10-15%的非梗阻性無精子癥(non-obstructive azoospermia,NOA)與染色體數(shù)目及結(jié)構(gòu)異常學/或Y染色體微缺失相關(guān),但大部分NOA患者精子產(chǎn)生缺陷或異常的原因或途徑還不清楚。雖然隨著助孕技術(shù)如學精子卵胞漿內(nèi)注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)發(fā)展,為這些不育患者提供了生育的可能,但ICSI繞過精子外精過程中的自然選擇機制有傳遞遺傳缺陷給下一代的危險。由此可知,了解精子發(fā)生障礙的分子機制學遺傳申基礎(chǔ)對闡明特發(fā)性男性不育的發(fā)病機制有著重要的意義。精子發(fā)生是一個非常復(fù)雜的過程,可以分為三個階段:精原細胞有絲分裂進行細胞增殖;精母細胞進行減數(shù)分裂;學倍體精子細胞分化。基因轉(zhuǎn)錄網(wǎng)絡(luò)嚴密地調(diào)控著精子發(fā)生中的每個過程。尤其是在精子發(fā)生的減數(shù)分裂階段,轉(zhuǎn)錄活性增加,m RNA翻譯被抑制,此階段答要是通過轉(zhuǎn)錄后的調(diào)控機制來抑制m RNA的翻譯,micro RNA(mi RNA)就參與其中。睪丸特異性蛋白15(Testis-experessed 15,TEX15)與減數(shù)分裂過程密切相關(guān),小鼠敲除模型表現(xiàn)為睪丸性不育。因此TEX15很可能在NOA患者精子發(fā)生障礙的發(fā)生中發(fā)揮重要作用,但目前關(guān)于TEX15轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的具體機制未知。本研究發(fā)現(xiàn)TEX15的m RNA在NOA患者中的表達量明顯低于精子正常發(fā)生對照組。免疫組化結(jié)果也證實了NOA患者睪丸精原細胞中TEX15蛋白表達量顯著下調(diào)。我們應(yīng)用靶基因預(yù)測網(wǎng)站預(yù)測發(fā)現(xiàn)mi R-183可能靶向TEX15,通過熒光素酶報告基因?qū)嶒灧治鲎C實mi R-183對TEX15 m RNA 3’UTR結(jié)合申點的靶向性。進一步,我們在U2OS細胞系中抑制mi R-183后發(fā)現(xiàn)TEX15 m RNA的水平顯著升高。同時,在NOA患者睪丸組織中mi R-183水平與對照組相比明顯上升,與TEX15表達呈顯著負相關(guān)性。并且檢測小鼠不同睪丸發(fā)育階段(8d,14d,16d,18d,25d,2m)中TEX15與mi R-183含量的表達,發(fā)現(xiàn)兩者呈顯著負相關(guān)性。本研究通過實驗證明了mi R-183通過直接靶向調(diào)控TEX15 3’UTR區(qū)域,下調(diào)了TEX15轉(zhuǎn)錄后的水平,而TEX15水平的下調(diào),可能直接指致減數(shù)分裂過程中染色體異常,最終引起不育的發(fā)生。綜上所述,本提提研究結(jié)果闡述了mi R-183靶向調(diào)控TEX15的表達調(diào)控精子發(fā)生的分子機制。這些研究成果將為闡明精子發(fā)生障礙提供新的研究思路及新的分子調(diào)控機制。
[Abstract]:At present, infertility puzzles 10-15% of couples of childbearing age.Male factors caused by male infertility accounted for about half, and showed an increasing trend year by year.The known causes of male infertility are reproductive tract obstruction or physical obstruction, immunological factors, inflammation of the reproductive system and sexual dysfunction. However, the proportion of patients who cannot find the cause of infertility is as high as 60% or 75%, which is called idiopathic male infertility.It is characterized by azoospermia or oligozoospermia.About 10-15% of non-obstructive azoospermia NOAs are associated with chromosome number and structural abnormalities, or Y chromosome microdeletions, but the cause or pathway of sperm defects or abnormalities in most NOA patients remains unclear.Although the development of assisted pregnancy techniques such as intracytoplasmic sperm injection (ICSI) provides a possibility for these infertile patients to reproduce, ICSI bypasses the mechanism of natural selection in the process of spermatozoa exosperm and carries the risk of passing genetic defects to the next generation.Therefore, it is important to understand the molecular mechanism of spermatogenesis disorders in order to elucidate the pathogenesis of idiopathic male sterility.Spermatogenesis is a very complex process, which can be divided into three stages: spermatogonium mitosis for cell proliferation, spermatocyte meiosis, and spermatogonia differentiation.The gene transcription network tightly regulates every process of spermatogenesis.Especially in the meiosis stage of spermatogenesis, the increased transcriptional activity of m RNA is inhibited, which should be involved if the transcriptional regulation mechanism is used to inhibit the translation of m RNA.Testicular specific protein 15(Testis-experessed 15 (TEX15) was closely related to meiosis, and mouse knockout model showed testicular infertility.Therefore, TEX15 may play an important role in the development of spermatogenesis in NOA patients, but the specific mechanism of TEX15 transcription and posttranscriptional regulation is unknown.In this study, we found that the expression of m RNA of TEX15 in NOA patients was significantly lower than that in normal spermatogenesis control group.Immunohistochemical results also confirmed that the expression of TEX15 protein was significantly down-regulated in spermatogonial cells of NOA patients.We used the target gene prediction website to predict that mi R-183 might target TEX15. The targeting of TEX15 m RNA 3'UTR binding site was confirmed by luciferase reporter gene analysis.Further, we found that the level of TEX15 m RNA was significantly increased after inhibiting mi R 183 in U2OS cell line.At the same time, the level of miR-183 in testis of NOA patients was significantly higher than that of control group, and negatively correlated with the expression of TEX15.The expressions of TEX15 and miR-183 in mouse testis at different testicular development stages were detected at 14d ~ 16d ~ 18d ~ 18d ~ 25d ~ 2m). The results showed that there was a significant negative correlation between the expression of TEX15 and miR-183.This study demonstrated that miR-183 down-regulated the post-transcriptional level of TEX15 through direct targeting regulation of the TEX15 3'UTR region, and that the down-regulation of TEX15 level may directly refer to chromosomal abnormalities during meiosis and eventually to the occurrence of infertility.In conclusion, the results of this study illustrate the molecular mechanism of the regulation of the expression of TEX15 targeted by miR-183 and the regulation of spermatogenesis.These results will provide new ideas and new molecular regulatory mechanisms for elucidating spermatogenesis disorders.
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R698.2

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張桂元;關(guān)于精子發(fā)生、附睪精子成熟和精子功能的研究課題基金資助申請[J];實用男科雜志;1997年02期

2 王惠蘇,吳赤蓬,范存欣,朱偉杰,劉國寧,崔蘊霞;不同滲透壓溶液對小鼠附睪精子大頭發(fā)生率的比較[J];中國公共衛(wèi)生;2001年09期

3 單玉喜,晏鵬,吳孝兵,李建民;人類Y染色體上與精子發(fā)生相關(guān)的基因的研究進展[J];安徽師范大學學報(自然科學版);2001年02期

4 單玉喜,吳孝兵;差異顯示法克隆精子發(fā)生相關(guān)基因[J];中華男科學;2001年01期

5 白文俊,侯樹坤,王曉峰,閆征,何培英,田世河,鄧慶平;腫瘤壞死因子受體在人精子的表達及其意義[J];中華泌尿外科雜志;2002年03期

6 劉偉軍;卵細胞漿內(nèi)精子注射中有關(guān)精子因素的研究進展[J];南華大學學報(醫(yī)學版);2003年01期

7 王剛,劉子龍,胡艷群,熊忠明,肖慧珠,熊承良;不育油漆工精子連接段異常的超微病理檢查[J];中華男科學;2003年04期

8 周鋒;精子成熟過程中膜改變的研究進展[J];國外醫(yī)學(計劃生育分冊);2003年03期

9 李澤廷;桂耀庭;蔡志明;;精子發(fā)生中幾個關(guān)鍵基因的研究進展[J];國際泌尿系統(tǒng)雜志;2006年02期

10 常勇杰;張曉春;于和鳴;;附睪分泌蛋白與精子成熟[J];國外醫(yī)學(計劃生育/生殖健康分冊);2006年04期

相關(guān)會議論文 前10條

1 桂耀庭;唐愛發(fā);余振東;張立兵;張鍵榮;李賢新;蔡志明;;精子發(fā)生相關(guān)基因的篩選和功能研究[A];中國生理學會2007年消化內(nèi)分泌生殖學術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2007年

2 王暉;徐珉;李建民;肖俊華;許志洋;周作民;沙家豪;;人精子發(fā)生相關(guān)基因精子表達譜系的建立及初步臨床應(yīng)用[A];第九次全國生殖生物學學術(shù)研討會論文摘要集[C];2003年

3 王暉;周作民;徐珉;李建民;沙家豪;;人精子中精子發(fā)生相關(guān)基因譜系的構(gòu)建及初步臨床應(yīng)用[A];江蘇省遺傳學會第七屆代表大會暨學術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2006年

4 高永金;金保方;;精子DNA完整性損傷及其相關(guān)性研究進展[A];2011·中國醫(yī)師協(xié)會中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)師大會論文集[C];2011年

5 高永金;金保方;;精子DNA完整性損傷及其相關(guān)性研究進展[A];中華中醫(yī)藥學會第十一屆男科學術(shù)大會論文集[C];2011年

6 張美佳;洪海燕;周波;金世英;王超;傅茂勇;王松波;夏國良;;心鈉肽在豬輸卵管中的表達以及其對精子功能的影響[A];第十屆全國生殖生物學學術(shù)研討會論文摘要集[C];2005年

7 孫中明;;精子超微結(jié)構(gòu)與男性不育[A];浙江省中醫(yī)藥學會2005年男科中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合學術(shù)交流會資料匯編[C];2005年

8 賈孟春;;精子發(fā)生及其激素調(diào)節(jié)[A];第二屆全國不育癥研討會論文匯編[C];2007年

9 桂耀庭;唐愛發(fā);余振東;張立兵;張鍵榮;李賢新;蔡志明;;精子發(fā)生相關(guān)基因的篩選和功能研究[A];第一屆中華醫(yī)學會生殖醫(yī)學分會、中國動物學會生殖生物學分會聯(lián)合年會論文匯編[C];2007年

10 張立營;曾梅;孫華欽;陳樸;張思仲;馬用信;;小鼠T-STAR蛋白靶mRNAs的分離及鑒定[A];中國遺傳學會第八次代表大會暨學術(shù)討論會論文摘要匯編（2004-2008）[C];2008年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 上海交通大學醫(yī)學院附屬仁濟醫(yī)院上海市人類精子庫 杜宏偉　上海市男科學研究所 李錚;人體最激情的舞者——精子[N];東方早報;2011年

2 記者 劉澤林;“準精子”在猴類體外培育成功[N];健康報;2013年

3 本報記者 董毅然;精子危機會讓人類斷子絕孫嗎[N];北京科技報;2004年

4 河北農(nóng)大動科院 王立澤 王建濤 張國賓;給狐采精勿棄精清[N];河北科技報;2007年

5 劉長亮;“附睪炎致不孕”內(nèi)幕揭秘[N];農(nóng)村醫(yī)藥報（漢）;2008年

6 汪文;做個準爸爸，，你準備好了嗎？[N];江蘇科技報;2000年

7 段恩奎;人造精子用于臨床不能過于樂觀[N];科技日報;2006年

8 劉遠橋邋鄒爭春;為準爸爸開具營養(yǎng)處方[N];科技日報;2007年

9 潘文;對人工精子的臨床前景不能過于樂觀[N];中國醫(yī)藥報;2006年

10 黃力;準爸爸要早做準備[N];保健時報;2003年

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 侯聰聰;十足目甲殼動物頂體構(gòu)架體及精子發(fā)生相關(guān)蛋白功能研究[D];浙江大學;2015年

2 張順;單精子胞質(zhì)內(nèi)注射轉(zhuǎn)基因法（ICSI-MGT）生產(chǎn)轉(zhuǎn)Fat-1基因兔的初步研究[D];廣西大學;2013年

3 庫爾班·吐拉克;塔里木馬鹿（Cervus elaphus yarkandensis）精子體外獲能及其相關(guān)蛋白酪氨酸磷酸化研究[D];東北林業(yè)大學;2015年

4 訾振振;Ccnyl1在精子發(fā)生過程中的功能研究[D];中國科學技術(shù)大學;2015年

5 孔娜娜;鈉肽受體2在精子趨化中的作用和機制[D];中國農(nóng)業(yè)大學;2016年

6 韋有衡;以小鼠為模型的睪丸特異表達激酶TSSK5的功能研究[D];復(fù)旦大學;2010年

7 張浩波;精子凋亡與男性不育相關(guān)系列研究[D];山東大學;2007年

8 李純錦;牛和人精子中腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子和神經(jīng)生長因子的表達及功能研究[D];吉林大學;2010年

9 朱復(fù)希;圓頭精子癥受精失敗機理、對策及其基因診斷平臺的建立[D];中南大學;2013年

10 崔險峰;非梗阻性無精子癥睪丸外科取精及睪丸精子冷凍保存的研究[D];天津醫(yī)科大學;2013年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 田宇;低溫處理對豬精子泛素化水平及體外受精的影響[D];延邊大學;2015年

2 楊向yN;冷凍技術(shù)對精子印記基因DNA甲基化及結(jié)構(gòu)影響的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2015年

3 朱振東;褪黑色素對兔精子冷凍保存效果的影響[D];西北農(nóng)林科技大學;2015年

4 陳鵬;小鼠精干細胞系和睪丸ECM體外3D培養(yǎng)體系的建立[D];內(nèi)蒙古大學;2015年

5 范楚寧;半胱氨酸對獺兔精液冷凍保存效果的影響[D];西北農(nóng)林科技大學;2015年

6 彭文培;冷凍保存對豬精子表觀遺傳相關(guān)基因表達的影響[D];四川農(nóng)業(yè)大學;2014年

7 查醒;MIR-183靶向TEX15調(diào)控精子發(fā)生[D];安徽醫(yī)科大學;2016年

8 陳劍波;Spata46在小鼠生精中的表達其功能過程特征及研究[D];安徽醫(yī)科大學;2016年

9 周萬灝;正常男性和白細胞精子癥患者精子線粒體基因缺失和含量的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2007年

10 何彥芳;雌激素對人精子的激活作用及其機制的初步研究[D];四川大學;2005年

本文編號：1712928