本文選題：腎透明細(xì)胞癌　切入點(diǎn)：長(zhǎng)鏈非編碼RNA　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：背景與目的:腎細(xì)胞癌簡(jiǎn)稱腎癌,為我國(guó)泌尿生殖系統(tǒng)最為常見的癌癥之一,占成人惡性腫瘤的3%左右,是嚴(yán)重威脅人民健康安全的重要疾病。由于起病隱匿,約20%~30%的患者初次就診時(shí)就已存在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,然而該疾病對(duì)化療和放射治療不敏感,因此該類患者預(yù)后往往很差。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)是指具有上皮表型的細(xì)胞在多種因素的刺激下,上皮組織基本結(jié)構(gòu)消失,轉(zhuǎn)化為間質(zhì)表型細(xì)胞的過程。上述的這些變化可以降低癌癥細(xì)胞間的相互黏附力,并促進(jìn)其遷移運(yùn)動(dòng)能力,最終讓癌癥細(xì)胞更加傾向于向遠(yuǎn)處侵襲轉(zhuǎn)移。研究表明長(zhǎng)鏈非編碼RNA可通過類似抑癌基因和癌基因的作用參與多種癌癥的臨床發(fā)生及進(jìn)展。目前已經(jīng)陸續(xù)發(fā)現(xiàn)多種LncRNA可以調(diào)控EMT的進(jìn)程,因此探究腎癌EMT的潛在分子機(jī)制,可能為抑制腎癌進(jìn)展以及改善腎癌患者臨床預(yù)后具有重要意義。本研究運(yùn)用LncRNA芯片篩選典型腎臟透明細(xì)胞癌及癌旁正常腎組織標(biāo)本中差異表達(dá)的lncRNAs;通過生物信息學(xué)等方法挑選部分候選IncRNA,包括HEIRCC;然后進(jìn)一步在擴(kuò)大的臨床樣本及腎癌細(xì)胞系中進(jìn)行驗(yàn)證,并分析其與臨床病理學(xué)特點(diǎn)間的相關(guān)性;最后,運(yùn)用rna干擾技術(shù)敲低腎癌細(xì)胞株內(nèi)heircc的表達(dá),然后研究轉(zhuǎn)染前后腎癌細(xì)胞生物學(xué)功能及emt相關(guān)分子標(biāo)記物的變化。方法:(1)我們使用長(zhǎng)鏈非編碼rna芯片技術(shù)獲取腎癌及癌旁組織的incrnas表達(dá)譜;(2)運(yùn)用生物信息學(xué)等方法挑選相關(guān)的候選incrnas;(3)在擴(kuò)大的60例腎癌組織與癌旁正常腎臟組織樣本中進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量pcr的驗(yàn)證,并分析候選incrna-heircc與腎癌患者臨床病理學(xué)特征間的關(guān)系。(4)采用rna干擾的方法減少腎癌細(xì)胞株內(nèi)heircc的表達(dá),然后通過cck8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕及transwell等實(shí)驗(yàn)評(píng)估其對(duì)腎癌細(xì)胞生物學(xué)的影響。(5)再此基礎(chǔ)上運(yùn)用western-blot方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后腎癌細(xì)胞內(nèi)e-cadherin、n-cadherin、vimentin、zeb-1、slug、snail的蛋白表達(dá)變化。結(jié)果:在腎癌組織中差異表達(dá)的incrna共2840個(gè)其中共有1151個(gè)lncrna上調(diào),1689個(gè)lncrna下調(diào)(差異倍數(shù)大于2,且p0.05);綜合篩選條件,選擇tcons_00006756作為后續(xù)研究對(duì)象,并命名為heircc。qrt-pcr驗(yàn)證了其在擴(kuò)大臨床樣本及腎癌細(xì)胞株中的高表達(dá)。在60對(duì)腎癌標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)高表達(dá)的heircc與腎癌患者的腫瘤分化程度(p=0.037)、tnm分期(p=0.047)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(p=0.036)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(p=0.039)有關(guān),而與患者年齡及性別無關(guān)(p0.05)。經(jīng)過rna干擾后,隨著heircc表達(dá)的降低,腎癌細(xì)胞a498、achn的增殖、遷移及侵襲能力顯著下降,而細(xì)胞的凋亡率顯著增加。同時(shí),相對(duì)陰性對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組中n-cadherin、vimentin蛋白均降低,e-cadherin的蛋白表達(dá)升高,且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);Slug、Snail的蛋白表達(dá)無顯著變化,ZEB-1蛋白顯著下降(p0.05)。結(jié)論:腎癌中存在大量顯著差異表達(dá)的長(zhǎng)鏈非編碼RNA,說明Lnc RNA與腎癌存在著關(guān)聯(lián);HEIRCC在腎癌組織及腎癌細(xì)胞株中呈高表達(dá),且與腫瘤的分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān);明確了HEIRCC在腎癌中起到促進(jìn)細(xì)胞增殖、侵襲、遷移并抑制細(xì)胞凋亡的作用;揭示了其通過影響ZEB-1蛋白的表達(dá)調(diào)控EMT的進(jìn)程從而導(dǎo)致腎癌的進(jìn)展。
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【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R737.11

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1 熊晶;LncRNA-HEIRCC通過調(diào)控上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化進(jìn)程促進(jìn)腎癌進(jìn)展的相關(guān)機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2017年

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本文編號(hào)：1703292