本文選題：人類移行膀胱癌T24細(xì)胞　切入點：巴西蘇木素　出處：《山西大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：膀胱癌是人類重大疾病之一,具有發(fā)病率高和術(shù)后易復(fù)發(fā)等特點。巴西蘇木素為中藥材蘇木的有效成分,課題組前期利用MTT技術(shù)分析發(fā)現(xiàn)巴西蘇木素能夠顯著降低人類移行膀胱癌T24細(xì)胞的活性,并對藥物處理前后的T24細(xì)胞進(jìn)行了數(shù)字基因表達(dá)譜分析。本文在課題組已有的研究基礎(chǔ)上,采用quantitative Real-time PCR (qPCR)技術(shù)對數(shù)字表達(dá)譜中篩選的差異表達(dá)基因進(jìn)行驗證,對其中表達(dá)量變化顯著的GADD45β基因進(jìn)行進(jìn)一步分析；分析巴西蘇木素處理不同種類腫瘤細(xì)胞的毒性作用和c-Fos、GADD45β的表達(dá)差異；分析小鼠胎兒成纖維細(xì)胞對巴西蘇木素的毒性反應(yīng)及安全性評估。主要內(nèi)容如下：一、GADD45β在巴西蘇木素致死膀胱癌細(xì)胞中的作用根據(jù)實驗室巴西蘇木素處理膀胱癌T24細(xì)胞的數(shù)字基因表達(dá)譜結(jié)果,利用qPCR驗證差異表達(dá)基因,結(jié)果發(fā)現(xiàn)與生長阻滯和DNA損傷相關(guān)的基因GADD45β顯著上調(diào)2.7倍。進(jìn)一步的qPCR檢測發(fā)現(xiàn),GADD45β在巴西蘇木素處理T24細(xì)胞3h、6 h和12 h后均顯著上調(diào),暗示該基因在巴西蘇木素致死T24細(xì)胞中起重要作用。通過構(gòu)建GADD45β真核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染T24細(xì)胞,使GADD45β在T24細(xì)胞中超表達(dá),模仿巴西蘇木素處理后GADD45fβ基因的上調(diào),從而分析GADD45β基因是否參與細(xì)胞生長抑制和致死過程。結(jié)果表明,轉(zhuǎn)染重組載體與轉(zhuǎn)染空載體相比,GADD45βmRNA的表達(dá)量上調(diào)60多倍。GADD45β超表達(dá)后,T24細(xì)胞形態(tài)發(fā)生顯著變化,與轉(zhuǎn)染空載體的對照組相比,細(xì)胞變圓,貼壁性變差,細(xì)胞活性顯著降低了84.55%。表明GADD45β在巴西蘇木素致死T24細(xì)胞的過程中可能發(fā)揮重要作用。二、巴西蘇木素對不同腫瘤細(xì)胞的毒性作用及c-Fos和GADD45β的mRNA表達(dá)變化利用對T24細(xì)胞半致死濃度32 μg/mL的巴西蘇木素處理人肺癌細(xì)胞Spc-A-1、人肝癌細(xì)胞Smmc-7721、人宮頸癌細(xì)胞Hela229和小鼠黑素瘤細(xì)胞B16,研究其對不同腫瘤細(xì)胞的毒性作用。MTT檢測發(fā)現(xiàn),巴西蘇木素對這四種腫瘤細(xì)胞都有不同程度的致死效應(yīng),表明巴西蘇木素的抗癌活性具有廣譜性。課題組前期工作發(fā)現(xiàn),c-Fos在巴西蘇木素處理膀胱癌T24細(xì)胞后mRNA及蛋白的表達(dá)顯著上調(diào),c-Fos在T24細(xì)胞中超表達(dá)后可致細(xì)胞活性降低66.22%。本研究中我們發(fā)現(xiàn)了GADD45β在巴西蘇木素致死T24細(xì)胞中的重要作用,表明巴西蘇木素可能通過c-Fos和GADD45β致死膀胱癌T24細(xì)胞。為了進(jìn)一步研究巴西蘇木素致死不同腫瘤細(xì)胞的作用途徑是否一致,我們檢測了巴西蘇木素處理不同腫瘤細(xì)胞后c-Fos和GADD45β的mRNA表達(dá)變化,qPCF檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)藥物處理6h后c-Fos僅在T24細(xì)胞中顯著高表達(dá),而在其他四種腫瘤細(xì)胞中均無顯著變化；GADD45β在T24. Spc-A-1、 Hela229和Smmc-7721細(xì)胞的表達(dá)均發(fā)生了顯著性上調(diào)。表明巴西蘇木素通過c-Fos致死T24細(xì)胞的作用是特異的,而對GADD45β表達(dá)的影響與其它癌細(xì)胞一致。三、巴西蘇木素對正常細(xì)胞的影響為了科學(xué)評估巴西蘇木素作為藥物的安全性,本文研究了巴西蘇木素對正常細(xì)胞的影響。首先成功制備小鼠胎兒成纖維細(xì)胞(MEF),用不同濃度的巴西蘇蘇木素分別處理第二代MEF和T24細(xì)胞,采用MTT法測定細(xì)胞的活性,結(jié)果表明,5個不同的處理濃度下,MEF的活性均顯著高于T24細(xì)胞的活性。32 μg/mL巴西蘇木素處理6 h, MEF細(xì)胞活性較T24細(xì)胞活性相對提高60%。表明巴西蘇木素對腫瘤細(xì)胞有一定的特異性,對正常細(xì)胞毒性小,安全性較好。
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【學(xué)位授予單位】：山西大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R737.14

【參考文獻(xiàn)】

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1 范新萍;巴西蘇木素對T24細(xì)胞的毒性效應(yīng)及數(shù)字基因表達(dá)譜分析[D];山西大學(xué);2013年

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本文編號：1684311