本文選題：丹酚酸A　切入點：丹酚酸C　出處：《遵義醫(yī)學院》2017年碩士論文

【摘要】：目的:研究丹酚酸A、C分子藥對配伍對HSA誘導HK-2細胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關凋亡蛋白的影響。方法:在體外培養(yǎng)HK-2細胞,并隨機分成5組:正常組、模型組、丹酚酸A組(SalA組)、丹酚酸C組(SalC組)、丹酚酸A+C組(即配伍組,丹酚酸A、C按1:1的比例配伍)。同步化24h后,除正常組外,其余各組均給予HSA誘導造模,且3個給藥組給予相應的藥物干預共同培養(yǎng)。分組培養(yǎng)干預24h、48h、72h后收集細胞,采用免疫印跡法(WB)檢測GRP78、ATF-4、Caspase-12和CHOP蛋白的定量表達;細胞免疫熒光技術(shù)檢測CHOP、ATF-4蛋白的定位表達;流式細胞術(shù)(FCM)檢測Caspase-3活化率和細胞凋亡率。結(jié)果:1.各時間段各組細胞凋亡率FCM檢測:與正常組比較,三個時間段的模型組細胞凋亡率均明顯增高(P0.05);與模型組比較,各給藥組三個時間段的細胞凋亡率均明顯降低(P0.05);各給藥組比較,配伍組在三個時間段的凋亡率均明顯低于SalA組、SalC組(P0.05),SalA、C組在24h、48h時間段差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.各時間段各組細胞Caspase-3活化率FCM檢測:與正常組比較,三個時間段的模型組Caspase-3活化率均明顯升高(P0.05);與模型組比較,各給藥組在三個時間段的Caspase-3活化率均明顯降低(P0.05);各給藥組比較,24h時間段各給藥組Caspase-3活化率無顯著差異(P0.05),48h時間段配伍組、SalA組的Caspase-3活化率明顯低于SalC組(P0.05),但SalA組、配伍組的Caspase-3活化率差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),72h時間段配伍組Caspase-3活化率均明顯低于SalA組和SalC組(P0.05)。3.各時間段各組細胞GRP78蛋白表達WB檢測:與正常組比較,三個時間段模型組細胞GRP78的相對表達量均明顯增多(P0.05);與模型組比較,各給藥組在三個時間段的GRP78相對表達量均明顯減少(P0.05);各給藥組比較,24h時間段SalC組GRP78相對表達量較其他給藥組明顯減少(P0.05),各給藥組GRP78在48h時間段的相對表達量差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),72h時間段配伍組GRP78相對表達量較其他給藥組明顯減少(P0.05)。4.各時間段各組細胞Caspase-12蛋白表達WB檢測:與正常組比較,模型組細胞在三個時間段的Caspase-12相對表達量均明顯增多(P0.05);與模型組比較,各給藥組在三個時間段的Caspase-12相對表達量均明顯減少(P0.05);各給藥組比較,配伍組在三個時間段的Caspase-12相對表達量均較其他給藥組明顯減少(P0.05)。5.各時間段各組細胞CHOP蛋白表達檢測:(1)WB檢測結(jié)果:與正常組比較,模型組細胞CHOP的相對表達量在三個時間段均明顯增多(P0.05);與模型組比較,各給藥組在三個時間段的CHOP相對表達量均明顯減少(P0.05);各給藥組比較,三個時間段配伍組CHOP相對表達量較其他給藥組均明顯減少(P0.05)。(2)細胞免疫熒光技術(shù)檢測結(jié)果:CHOP陽性表達為綠色熒光信號,在HK-2細胞的表達部位主要位于細胞核。6.各時間段各組細胞ATF-4蛋白表達檢測:(1)WB檢測結(jié)果:與正常組比較,三個時間段模型組細胞ATF-4的相對表達量均明顯增多(P0.05);與模型組比較,各給藥組三個時間段ATF-4相對表達量均明顯減少(P0.05);各給藥組比較,三個時間段配伍組ATF-4相對表達量較其他給藥組均明顯減少(P0.05)。(2)細胞免疫熒光技術(shù)檢測結(jié)果:ATF-4陽性表達為綠色熒光信號,在HK-2細胞的表達部位主要位于細胞核。結(jié)論:丹酚酸A、C及分子藥對配伍對HSA誘導HK-2細胞的GRP78、Caspase-12、CHOP和ATF-4的表達及Caspase-3的活化起抑制作用,推測丹酚酸A、C及分子藥對配伍可能通過影響HK-2細胞內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關凋亡蛋白的表達,干預內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激凋亡相關途徑,減少腎臟固有細胞的凋亡,從而在延緩腎臟纖維化的進程中起作用。
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本文編號：1664959