本文選題：丹酚酸A　切入點(diǎn)：丹酚酸C　出處：《遵義醫(yī)學(xué)院》2017年碩士論文

【摘要】：目的:研究丹酚酸A、C分子藥對(duì)配伍對(duì)HSA誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)凋亡蛋白的影響。方法:在體外培養(yǎng)HK-2細(xì)胞,并隨機(jī)分成5組:正常組、模型組、丹酚酸A組(SalA組)、丹酚酸C組(SalC組)、丹酚酸A+C組(即配伍組,丹酚酸A、C按1:1的比例配伍)。同步化24h后,除正常組外,其余各組均給予HSA誘導(dǎo)造模,且3個(gè)給藥組給予相應(yīng)的藥物干預(yù)共同培養(yǎng)。分組培養(yǎng)干預(yù)24h、48h、72h后收集細(xì)胞,采用免疫印跡法(WB)檢測(cè)GRP78、ATF-4、Caspase-12和CHOP蛋白的定量表達(dá);細(xì)胞免疫熒光技術(shù)檢測(cè)CHOP、ATF-4蛋白的定位表達(dá);流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)Caspase-3活化率和細(xì)胞凋亡率。結(jié)果:1.各時(shí)間段各組細(xì)胞凋亡率FCM檢測(cè):與正常組比較,三個(gè)時(shí)間段的模型組細(xì)胞凋亡率均明顯增高(P0.05);與模型組比較,各給藥組三個(gè)時(shí)間段的細(xì)胞凋亡率均明顯降低(P0.05);各給藥組比較,配伍組在三個(gè)時(shí)間段的凋亡率均明顯低于SalA組、SalC組(P0.05),SalA、C組在24h、48h時(shí)間段差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.各時(shí)間段各組細(xì)胞Caspase-3活化率FCM檢測(cè):與正常組比較,三個(gè)時(shí)間段的模型組Caspase-3活化率均明顯升高(P0.05);與模型組比較,各給藥組在三個(gè)時(shí)間段的Caspase-3活化率均明顯降低(P0.05);各給藥組比較,24h時(shí)間段各給藥組Caspase-3活化率無(wú)顯著差異(P0.05),48h時(shí)間段配伍組、SalA組的Caspase-3活化率明顯低于SalC組(P0.05),但SalA組、配伍組的Caspase-3活化率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),72h時(shí)間段配伍組Caspase-3活化率均明顯低于SalA組和SalC組(P0.05)。3.各時(shí)間段各組細(xì)胞GRP78蛋白表達(dá)WB檢測(cè):與正常組比較,三個(gè)時(shí)間段模型組細(xì)胞GRP78的相對(duì)表達(dá)量均明顯增多(P0.05);與模型組比較,各給藥組在三個(gè)時(shí)間段的GRP78相對(duì)表達(dá)量均明顯減少(P0.05);各給藥組比較,24h時(shí)間段SalC組GRP78相對(duì)表達(dá)量較其他給藥組明顯減少(P0.05),各給藥組GRP78在48h時(shí)間段的相對(duì)表達(dá)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),72h時(shí)間段配伍組GRP78相對(duì)表達(dá)量較其他給藥組明顯減少(P0.05)。4.各時(shí)間段各組細(xì)胞Caspase-12蛋白表達(dá)WB檢測(cè):與正常組比較,模型組細(xì)胞在三個(gè)時(shí)間段的Caspase-12相對(duì)表達(dá)量均明顯增多(P0.05);與模型組比較,各給藥組在三個(gè)時(shí)間段的Caspase-12相對(duì)表達(dá)量均明顯減少(P0.05);各給藥組比較,配伍組在三個(gè)時(shí)間段的Caspase-12相對(duì)表達(dá)量均較其他給藥組明顯減少(P0.05)。5.各時(shí)間段各組細(xì)胞CHOP蛋白表達(dá)檢測(cè):(1)WB檢測(cè)結(jié)果:與正常組比較,模型組細(xì)胞CHOP的相對(duì)表達(dá)量在三個(gè)時(shí)間段均明顯增多(P0.05);與模型組比較,各給藥組在三個(gè)時(shí)間段的CHOP相對(duì)表達(dá)量均明顯減少(P0.05);各給藥組比較,三個(gè)時(shí)間段配伍組CHOP相對(duì)表達(dá)量較其他給藥組均明顯減少(P0.05)。(2)細(xì)胞免疫熒光技術(shù)檢測(cè)結(jié)果:CHOP陽(yáng)性表達(dá)為綠色熒光信號(hào),在HK-2細(xì)胞的表達(dá)部位主要位于細(xì)胞核。6.各時(shí)間段各組細(xì)胞ATF-4蛋白表達(dá)檢測(cè):(1)WB檢測(cè)結(jié)果:與正常組比較,三個(gè)時(shí)間段模型組細(xì)胞ATF-4的相對(duì)表達(dá)量均明顯增多(P0.05);與模型組比較,各給藥組三個(gè)時(shí)間段ATF-4相對(duì)表達(dá)量均明顯減少(P0.05);各給藥組比較,三個(gè)時(shí)間段配伍組ATF-4相對(duì)表達(dá)量較其他給藥組均明顯減少(P0.05)。(2)細(xì)胞免疫熒光技術(shù)檢測(cè)結(jié)果:ATF-4陽(yáng)性表達(dá)為綠色熒光信號(hào),在HK-2細(xì)胞的表達(dá)部位主要位于細(xì)胞核。結(jié)論:丹酚酸A、C及分子藥對(duì)配伍對(duì)HSA誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞的GRP78、Caspase-12、CHOP和ATF-4的表達(dá)及Caspase-3的活化起抑制作用,推測(cè)丹酚酸A、C及分子藥對(duì)配伍可能通過(guò)影響HK-2細(xì)胞內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)凋亡蛋白的表達(dá),干預(yù)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激凋亡相關(guān)途徑,減少腎臟固有細(xì)胞的凋亡,從而在延緩腎臟纖維化的進(jìn)程中起作用。
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本文編號(hào)：1664959