本文選題：前列腺癌　切入點：雄激素受體　出處：《吉林大學》2015年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：2012年的統(tǒng)計數(shù)據(jù)表明，在全球范圍內，前列腺癌的發(fā)病率居男性惡性腫瘤的第二位，死亡率居第五位。近十余年來，我國前列腺癌的發(fā)病率和死亡率均明顯上升，其發(fā)病率已位居我國男性惡性腫瘤的第七位。2011年，我國將前列腺癌研究列入國家“973”計劃項目。 雄激素受體（Androgen Receptor, AR）在前列腺癌的發(fā)生和發(fā)展中具有關鍵作用。AR與其配體——雄激素結合后轉移至細胞核，與靶基因啟動子中的特異序列（雄激素反應元件，Androgen Response Elements, AREs）結合，從而調節(jié)靶基因的表達。前列腺特異性抗原（Prostate Specific Antigen, PSA）是受AR調節(jié)的重要靶基因之一，也是公認的前列腺癌診斷和預后的監(jiān)測標志物。鑒于AR信號通路在前列腺癌發(fā)生與發(fā)展中的重要作用，內分泌療法（或稱雄激素剝奪療法，Androgen DeprivationTherapy, ADT）一直作為治療晚期前列腺癌的經(jīng)典療法。在我國，由于前列腺癌早期篩查未得到普及，大部分病人就診時已是晚期，因此ADT是主要的治療方法。 在ADT治療初期，伴隨病人血清中PSA濃度的降低，ADT對絕大多數(shù)病人具有較好的療效，但幾乎所有病人最終都會對該療法產(chǎn)生抗性，并發(fā)展為去勢抵抗性前列腺癌（Castration-Resistant Prostate Cancer, CRPC）。CRPC是前列腺癌治療領域的難點，也是導致病人因前列腺癌而死亡的主要原因。美國食品和藥物管理局最近批準的治療CRPC的新型內分泌藥物恩雜魯胺（Enzalutamide）和阿比特龍（Abiraterone）都是以AR為靶點，阻止其活化。使用新藥可使CRPC病人的存活期延長4-5個月，但絕大多數(shù)病人在服藥數(shù)月后即對藥物產(chǎn)生耐受性，并伴有血清PSA濃度的升高，提示病人CRPC細胞中AR信號通路再激活。 在CRPC中，AR剪切突變體（AR splice variants, AR-Vs）的表達量普遍高于激素依賴性前列腺癌（Hormone-Naive Prostate Cancer）。迄今為止，在前列腺癌細胞系及組織中共發(fā)現(xiàn)25種AR-Vs，其中AR-V7（又稱AR3）及ARv567es是最具有臨床意義的2種AR-Vs。相關臨床研究表明，若前列腺癌組織中AR-V7高表達，則該病人手術后前列腺癌復發(fā)的幾率更高；在CRPC組織中若存在AR-V7高表達或ARv567es的表達，則更易發(fā)生癌癥的遠端轉移和病人的生存期縮短。而CRPC中AR-Vs表達上調可能是前列腺癌經(jīng)ADT（包括恩雜魯胺和阿比特龍）治療后，CRPC生長與增殖的主要適應途徑。 本研究通過細胞模型，揭示AR-Vs/AR-Vs、AR-FL/AR-Vs之間的相互作用，闡明AR-Vs調控靶基因表達的方式以及促進CRPC發(fā)生發(fā)展的分子機制。利用分子克隆技術將AR-FL、AR-V7及ARv567es的cDNA克隆至雙分子熒光片段互補（BiFc）系統(tǒng)中，并通過脂質體轉染的方法，分別將上述表達質粒轉染至AR null前列腺癌細胞系PC-3中。Western Blot技術檢測目的蛋白的表達情況；熒光顯微鏡觀察轉染后細胞中AR-Vs/AR-Vs及AR-FL/AR-Vs的二聚化情況，探尋發(fā)生二聚化的作用位點；流式細胞術對熒光強度進行量化；激光共聚焦顯微鏡觀察二聚化的AR-Vs/AR-Vs及AR-FL/AR-Vs的細胞內定位；雄激素反應元件報告基因系統(tǒng)檢測AR-Vs/AR-Vs二聚體及AR-FL/AR-Vs二聚體的轉錄活性；qRT-PCR檢測AR-Vs/AR-Vs二聚體及AR-FL/AR-Vs二聚體對靶基因（UBE2C、PSA）表達的影響；SRB檢測AR-Vs/AR-Vs二聚化及AR-FL/AR-Vs二聚化促進前列腺癌細胞去勢抵抗性生長的影響。 Western blot結果表明，成功構建BiFc表達質粒BiFc-AR-FL、BiFc-AR-V7及BiFc-ARv567es；利用BiFc系統(tǒng)在熒光顯微鏡下觀察及流式細胞術定量結果表明，AR-Vs/AR-Vs二聚化主要由D-box介導，而AR-FL/AR-Vs二聚化主要由FxxFL及D-box介導；激光共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，AR-Vs二聚化對于其細胞定位并無影響，提示AR-Vs進入細胞核并不依賴于二聚化，而AR-FL/AR-Vs的二聚化對于AR-FL非雄激素介導的細胞核轉移是必要的；雄激素反應元件報告基因及qRT-PCR結果顯示，AR-Vs/AR-Vs二聚體及AR-FL/AR-Vs二聚體具有轉錄活性，可以調控其靶基因的表達；SRB結果表明，AR-Vs/AR-Vs二聚化或/和AR-FL/AR-Vs二聚化共同作用，可促進前列腺癌細胞去勢抵抗性生長。 以上研究提示，在ADT條件下，AR-Vs可通過AR-Vs/AR-Vs和/或AR-FL/AR-Vs二聚體調控靶基因的表達，，促使前列腺癌細胞去勢抵抗性生長。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.25

【共引文獻】

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本文編號：1602526