本文選題：足細胞　切入點：細胞培養(yǎng)技術(shù)　出處：《廣東醫(yī)學(xué)》2017年06期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的建立簡便的大鼠足細胞原代培養(yǎng)體系,檢測其去氧腎上腺素(Nephrin)mRNA及蛋白的表達水平。方法無菌取腎,分離腎皮質(zhì),膠原酶消化法分離腎小球,培養(yǎng)9~10 d,胰蛋白酶差異消化法傳代,過篩去除腎小球繼續(xù)培養(yǎng)5~7 d:形態(tài)學(xué)觀察和間接免疫熒光法進行足細胞鑒定;流式細胞儀分析足細胞純度;實時定量PCR(qRT-PCR)、間接免疫熒光法和Western blot法比較前三代足細胞中Nephrin mRNA及蛋白的表達水平。結(jié)果接種5 d后大部分腎小球貼壁,腎小球周圍有細胞爬出,其最外緣有樹枝狀細胞分布,形態(tài)學(xué)及特異性抗體Nephrin、WT-1鑒定為足細胞;流式細胞儀分析足細胞純度為94.7%;間接免疫熒光和qRT-PCR均顯示:與第二、三代足細胞相比,第一代足細胞中Nephrin mRNA和蛋白表達均較高(均P0.05);Western blot示體外培養(yǎng)大鼠足細胞表達兩種分子量的Nephrin,且第一代足細胞Nephrin灰度值高于第二、三代足細胞(P0.05)。結(jié)論酶消化法結(jié)合差異過篩法接種可促進腎小球貼壁,有利于培養(yǎng)純度高的足細胞;大鼠足細胞體外培養(yǎng)條件下能特異性表達Nephrin結(jié)構(gòu)及功能蛋白。
[Abstract]:Objective to establish a simple primary culture system of rat podocytes and to detect the expression of Nephrinn mRNA and protein in rat podocytes. After culture for 9 ~ 10 days, trypsin differential digestion method was passed through and the glomeruli were removed from the screen for 5 ~ 7 days. Morphological observation and indirect immunofluorescence assay were used to identify the podocytes, flow cytometry was used to analyze the purity of podocytes. The expression levels of Nephrin mRNA and protein in the first three generations of podocytes were compared with indirect immunofluorescence assay and Western blot method. Results after 5 days of inoculation, most of the glomeruli adhered to the wall, the cells around the glomeruli crawled out, and the dendritic cells were distributed in the outer edge of the cells. Morphology and specific antibody Nephrinn WT-1 were identified as podocytes. Flow cytometry showed that the purity of podocytes was 94.7. Indirect immunofluorescence and qRT-PCR showed that compared with the second and third generation podocytes, The expression of Nephrin mRNA and protein in the first generation of podocytes was higher than that in the first generation of podocytes (both P0.05 blot showed that the rat podocytes expressed two molecular weights of Nephrinin, and the grayscale value of Nephrin in the first generation of podocytes was higher than that in the second generation. Conclusion Enzymatic digestion combined with differential sieve method can promote glomerular adhesion and promote the culture of podocytes with high purity, and rat podocytes can specifically express Nephrin structure and functional proteins in vitro.
【作者單位】： 石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院;石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院腎內(nèi)科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(編號:81160090)
【分類號】：R692

【參考文獻】

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本文編號：1602140