發(fā)布時間：2018-03-02 10:39

  本文關鍵詞： 腎細胞癌 TIM-3 多態(tài)性 腫瘤浸潤淋巴細胞 調(diào)節(jié)性B細胞　出處：《第二軍醫(yī)大學》2016年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：研究目的近年腎細胞癌發(fā)病率在男性惡性腫瘤中位居第7,作為泌尿系統(tǒng)常見腫瘤之一發(fā)病率以每年2-4%的幅度遞增。外科手術對于大多數(shù)腎細胞癌患者而言是最主要的治療方式,它在早期腎癌患者中已取得很好的療效,但對多數(shù)腎癌患者而言,切除腎臟原發(fā)灶后,影響患者生存率和死亡率的主要因素仍然是腫瘤的復發(fā)和轉(zhuǎn)移。而且腎癌對放化療敏感性較差,5年生存率在發(fā)生轉(zhuǎn)移后降至5-10%。因此,進一步探索新的抗腎癌手段,增強機體抗腫瘤的能力,具有極為重要的意義。T細胞免疫球蛋白粘蛋白分子3(TIM-3)作為免疫球蛋白超族成員,在完全分化的Th1淋巴細胞上高表達,同時也是Th1 CD4+細胞的特異性細胞標志物。已有研究表明TIM-3可以抑制IL-2和γ-IFN的產(chǎn)生,從而加速腫瘤細胞的擴散;同時在部分腫瘤(胃癌、大腸癌等)患者及動物的CD4+、CD8+T淋巴細胞上大量表達的TIM-3還能發(fā)揮負向調(diào)節(jié)T細胞免疫應答的作用,誘導T淋巴細胞的功能減弱及凋亡,進而削弱機體抗腫瘤免疫能力。但是TIM-3在腎癌患者中起到何種作用,其對腫瘤患者的哪些免疫細胞有調(diào)節(jié)作用,其具體機制如何,目前尚未見報道。一個生物群體中同時和經(jīng)常存在兩種或兩種以上的不連續(xù)的變異型或基因型或等位基因被稱為多態(tài)性,單核苷酸多態(tài)性是最常見的多態(tài)性類型之一�；蚨鄳B(tài)性在臨床工作中的重要意義在于被用于分析人體對疾病、毒物等的易感性和耐受性、疾病臨床表現(xiàn)多樣性及對藥物治療反應性等。目前關于TIM-3的多態(tài)性表現(xiàn)已有文獻報道,但是關于其與腎癌易感性之間的相關性如何未見報道。本課題基于上述原因擬研究TIM-3多態(tài)性與腎癌易感性之間的關系,同時探討不同腎癌分期患者體內(nèi)TIM-3的分布情況、TIM-3與不同分期腎癌患者Th1、CD4+、CD8+Treg、Breg等免疫細胞功能的關系,探討TIM-3參與細胞免疫調(diào)節(jié)的作用及機制,進一步明確不同分期的腎癌患者體內(nèi)TIM-3所起的作用是否不同,為探索新的治療腎癌的方法充實理論基礎。研究方法第一部分:本實驗首先收集322名腎癌患者和402名健康人的血液,主要運用聚合酶鏈式反應-限制片段長度多態(tài)性分析技術,對TIM-3基因多態(tài)性中最常見的三種類型(即-1516G/T,-574G/T和+4259T/G)進行基因分型,據(jù)此評估在中國人群中,TIM-3多態(tài)性是否和腎癌的易感性存在有關性。第二部分:在實驗的第二部分,我們收集了30名腎癌患者的腫瘤組織標本及外周血,同時采集來自10名健康體檢人群的外周血標本作為實驗對照,使用流式細胞術、實時定量PCR等技術,研究TIM-3在TIL CD4+T細胞和TIL CD8+T細胞上的表達及功能情況,用于明確TIM-3在腎癌中對腫瘤浸潤淋巴細胞發(fā)揮的作用。第三部分:我們收集了8名I、II期腎癌患者與7名III、IV期腎癌患者的腫瘤組織標本及外周血,統(tǒng)計腫瘤大小及有無遠處轉(zhuǎn)移等情況,通過細胞分離、ELISAs及T細胞增殖和促炎性細胞因子檢測等方法,分別研究外周血及腫瘤組織的各類細胞中,IL-10+細胞的分布情況、腫瘤浸潤淋巴細胞中IL-10分泌型B細胞的表型、腫瘤浸潤型B細胞中抗體的分泌情況、腫瘤組織中IL-10分泌型B細胞的免疫抑制功能及其與TIM-3和腎癌臨床進展的相關性。結果1.第一部分(1)-574G/T和+4259T/G單核苷酸多態(tài)性在腎癌患者中的發(fā)生率明顯高于對照組,而-1516G/T SNP單核苷酸多態(tài)性的發(fā)生率沒有統(tǒng)計學差異。同時,-574G/T和+4259T/G等位基因在腎癌患者中也明顯增加。(2)TIM-3-574G/T和+4259T/G SNPs互相之間具有較強的LD,而-1516G/T和-574G/T,或者-1516G/T和+4259T/G之間沒有LD,腎癌患者中TTG的單體型的發(fā)生率明顯高于對照組。(3)與未發(fā)生轉(zhuǎn)移的患者相比,轉(zhuǎn)移患者中+4259T/G等位基因的發(fā)生率明顯增加,然而這些多態(tài)性在糖尿病和腫瘤組織學類型中并沒有顯示出任何差別。2.第二部分(1)TIM-3在腎癌患者的TIL CD4+和TIL CD8+細胞上的表達顯著升高了,而且與腫瘤分期具有一定的相關性;(2)在TIL TIM-3(+)細胞上,GATA-3和IFN-γ表達下調(diào)了,而T-bet的表達上調(diào)了。此外,研究結果顯示TIM-3陽性CD8+T細胞的STAT5的磷酸化水平較TIM-3陰性對照組降低了60.5%,同樣的,與TIM-3(-)相比,p38在TIL TIM-3(+)CD8+T細胞中的磷酸化水平下降了30.6%,這些結果提示在腎細胞癌中TIM-3陽性腫瘤浸潤性T細胞的Stat5和p38信號通路受損;(3)使用s TIM-3處理過TIL CD4+T和CD8+T細胞后,其中的CFSE細胞的百分比顯著提高,這一結果表明阻斷TIM-3通路可以強化TIL增殖。此外,TIL CD4+T和CD8+T細胞中IFN-γ水平在加入s TIM-3后顯著上調(diào),提示這些細胞的免疫功能因TIM-3的表達被阻斷而提升。3.第三部分(1)我們分別對循環(huán)型和腫瘤浸潤型淋巴細胞中的T細胞(CD3+)和B細胞(CD19+)分型進行檢測,流式分析結果顯示均有IL-10分泌型細胞的存在。IL-10+的細胞相對分布在T細胞、B細胞和其它(非T或非B)這三種細胞分型中因病人不同而有所區(qū)別,但是與循環(huán)淋巴細胞相比,IL-10陽性細胞在腫瘤浸潤型細胞的B細胞中的相對分布值更高。我們還比較了腫瘤浸潤型淋巴細胞與外周血淋巴細胞中的IL-10+細胞,發(fā)現(xiàn)IL-10陽性細胞在腫瘤浸潤型淋巴細胞中所占比例顯著上調(diào)。在總淋巴細胞或T細胞、B細胞中,未發(fā)現(xiàn)外周血IL-10陽性細胞頻率和腫瘤浸潤型IL-10陽性細胞頻率之間存在相關性;(2)我們對外周血對照組和腫瘤浸潤型淋巴細胞進行比較,發(fā)現(xiàn)IL-10在腫瘤浸潤型淋巴細胞中的分泌水平顯著提高,且腫瘤組織中的IL-10分泌型B細胞的相對貢獻率,即IL-10分泌型B細胞與IL-10分泌型T細胞的相對比值顯著提升;(3)對非IL-10分泌型B細胞和IL-10分泌型B細胞進行比較,發(fā)現(xiàn)IL-10分泌型B細胞表達CD19和CD20明顯呈現(xiàn)低水平,同時也缺乏Ig M和Ig D的表達,而CD27的水平卻呈現(xiàn)提高。在未受刺激的情況下,與自體同源的外周血B細胞相比,腫瘤浸潤型B細胞上清液中Ig G和Ig A的濃度更高。尤其是,與外周血相比,在腫瘤組織中Ig A的相對濃度(Ig A在總適應性免疫抗體Ig G+Ig A中的占比)顯著升高;(4)對腫瘤浸潤型B細胞進行檢測發(fā)現(xiàn)IL-10陽性細胞的頻率與分泌IFN-γ和TNF-α的腫瘤浸潤型T細胞的頻率之間存在負相關性,同時TIM-3在IL-10陽性腫瘤浸潤型B細胞高表達的病人中的表達也上調(diào)了。分別使用腫瘤浸潤型B細胞上清液和外周血B細胞上清液培養(yǎng)T細胞,并檢測兩組間IFN-γ分泌水平和T細胞增生水平,結果顯示腫瘤浸潤型B細胞上清液培養(yǎng)T細胞IFN-γ分泌水平和T細胞增生水平顯著降低;(5)IL-10分泌型B細胞頻率和切除的腫瘤組織大小之間存在正相關性,而且III期+IV期腫瘤與I期+II期腫瘤相比,IL-10分泌型B細胞頻率出現(xiàn)明顯提高。此外,III期+IV期腫瘤與I期+II期腫瘤之間分泌IL-10的腫瘤浸潤型B細胞的頻率的差別不是由性別造成的。結論本研究首次證明了TIM-3 SNPs和單體型增加了中國人腎細胞癌發(fā)生的風險,同時+4259T/G SNP與腎細胞癌的轉(zhuǎn)移密切相關。在腎癌腫瘤組織中,TIM-3的表達水平對T細胞的功能紊亂有指向作用,且對于免疫細胞的細胞因子分泌以及殺滅腫瘤細胞有明顯的抑制作用。IL-10分泌B細胞作為成漿細胞中的嶄新細胞亞型,對T細胞產(chǎn)生免疫抑制作用,而TIM-3則可能是B細胞的一個主要作用途徑,即B細胞通過上調(diào)T細胞中TIM-3表達這一過程,抑制了T細胞的功能,并進而導致腫瘤免疫逃避的效果。以上結果為將TIM-3作為腎細胞癌可能的治療途徑提供了理論依據(jù),預示著抗TIM-3抗體在將來可能成為一種新型的治療腎細胞癌的免疫療法,為腎癌的免疫治療提供一種新的潛在選擇。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.11

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 趙自然;;新鮮空氣使干細胞分化[J];基礎醫(yī)學與臨床;2010年03期

2 張玉勤;;細胞分化再活化治療腫瘤[J];國外醫(yī)學情報;1991年01期

3 David　Tenenbaum,饒新華;細胞之源[J];世界科學;2000年11期

4 閆貴新;干細胞研究的重大進展[J];畜牧獸醫(yī)科技信息;2000年11期

5 趙志力;付小兵;;正常與異常的細胞分化[J];感染.炎癥.修復;2001年03期

6 趙志力;付小兵;;修復細胞分化的調(diào)控機制與鑒別[J];感染.炎癥.修復;2001年04期

7 趙志力;修復細胞分化的調(diào)控機制與鑒別[J];中國危重病急救醫(yī)學;2002年02期

8 趙志力;付小兵;;不同發(fā)育階段細胞的分化與調(diào)控機制[J];感染.炎癥.修復;2002年01期

9 戴新貴;姚詠明;艾宇航;;輔助性T細胞17的研究進展[J];生理科學進展;2008年04期

10 ;細胞分化:一個兩階段的過程[J];中華婦幼臨床醫(yī)學雜志;2009年02期

相關會議論文 前10條

1 徐志彥;;《細胞分化》教學案例(教學內(nèi)容安排1課時)[A];河北省教師教育學會第二屆中小學教師教學案例展論文集[C];2013年

2 尹青;張雷;李莉;謝丹丹;龔淼;;體外心肌樣環(huán)境對P19細胞向心肌細胞分化的誘導作用[A];中國解剖學會2012年年會論文文摘匯編[C];2012年

3 丁建東;;圖案化表面與干細胞分化[A];2013年全國高分子學術論文報告會論文摘要集——大會邀請報告[C];2013年

4 陳思;黃欣;陳少華;楊力建;鄭海濤;李揚秋;;BCL11B基因在T細胞分化和增殖中調(diào)節(jié)作用的研究[A];中國病理生理學會第九屆全國代表大會及學術會議論文摘要[C];2010年

5 江鍵;崔黎麗;宋誠榮;王小平;宋茂海;;負極性駐極體誘導3T3細胞表面電荷和游離鈣濃度的變化[A];第四屆中國功能材料及其應用學術會議論文集[C];2001年

6 梁冀;于會梅;傅繼東;郭昂;楊黃恬;;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣離子釋放受體對干細胞分化的調(diào)控[A];中國病理生理學會受體、腫瘤和免疫專業(yè)委員會聯(lián)合學術會議論文匯編[C];2010年

7 羅家江;;TH17細胞的研究進展[A];全國中西醫(yī)結合血液學學術會議論文匯編[C];2010年

8 項盈;金潔;沈丹;鄭強;謝純剛;賈冰冰;黃國平;王金福;;復蘇的人骨髓間充質(zhì)干細胞的分離、培養(yǎng)及向多系細胞分化的誘導[A];第10屆全國實驗血液學會議論文摘要匯編[C];2005年

9 汪洋;朱椰凡;余華軍;符竣惠;徐啟綱;曾其強;吳建波;張啟瑜;;三種全肝臟去細胞化流程對細胞外基質(zhì)的影響及細胞組分殘留量的研究[A];2013年浙江省外科學學術年會論文匯編[C];2013年

10 常平安;陳瑞;李薇;伍一軍;;神經(jīng)病靶標酯酶的增強表達抑制哺乳動物細胞的增殖[A];中國環(huán)境誘變劑學會抗誘變劑和抗癌劑專業(yè)委員會第三次全國學術會議、中國毒理學會生化與分子毒理專業(yè)委員會第五屆學術交流會、貴州省環(huán)境誘變劑學會成立大會暨首屆學術交流會論文集[C];2004年

相關重要報紙文章 前10條

1 徐榮祥;人類生命細胞 再生物質(zhì)的發(fā)現(xiàn)與研究[N];健康報;2007年

2 張佳星;干細胞分化路徑存在差異性[N];中國礦業(yè)報;2008年

3 史軍;剝開黏合的細胞之書[N];健康報;2012年

4 常麗君;美生物學家打造出“細胞黑客”[N];科技日報;2010年

5 張佳星;分化之路 殊途同歸[N];科技日報;2008年

6 記者 施嘉奇　通訊員 王姿英;探索中藥對干細胞分化的作用[N];文匯報;2009年

7 記者陳超;日開發(fā)細胞間隔離培養(yǎng)技術[N];科技日報;2003年

8 陳超;科學家發(fā)現(xiàn)引發(fā)細胞分化的分子通道[N];科技日報;2010年

9 記者 白毅;我國科學家用iPS細胞首獲克隆豬[N];中國醫(yī)藥報;2013年

10 記者 錢錚;日本用人類iPS細胞首次制成血小板[N];新華每日電訊;2009年

相關博士學位論文 前10條

1 唐紹燦;IL-27、Th1及Th17細胞在MS中的表達及其作用機制研究[D];山東大學;2015年

2 常凱凱;子宮內(nèi)膜異位灶微環(huán)境IL-10~+Th17細胞的形成及作用機制[D];復旦大學;2014年

3 高華嵩;細胞重編程技術和移植治療視神經(jīng)損傷的實驗研究[D];復旦大學;2014年

4 李艷明;Hsa-miR-200a調(diào)控紅細胞分化的功能及分子機制研究[D];中國科學院北京基因組研究所;2015年

5 張林;C-反應蛋白通過對T細胞分化的直接調(diào)控參與后天免疫應答[D];蘭州大學;2015年

6 蔣云秋;樹突狀細胞Notch信號在1，25-二羥維生素D3調(diào)節(jié)Th17分化中的作用研究[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

7 史莉瑾;急性腦出血患者外周血調(diào)節(jié)性T細胞與腦相關抗原的特征及其相關性研究[D];鄭州大學;2015年

8 陳博;可注射細胞微球明膠復合物聯(lián)合血小板裂解液在牙組織工程中的應用研究[D];第四軍醫(yī)大學;2015年

9 章麗雅;血紅素加氧酶-1調(diào)抑Th17細胞在炎癥性腸病中的作用及機制研究[D];上海交通大學;2013年

10 曹際森;miR-146a調(diào)控Treg細胞抑制小鼠心臟移植免疫排斥的研究[D];天津醫(yī)科大學;2015年

相關碩士學位論文 前10條

1 丁佳敏;芪藍制劑對人舌鱗癌Tca8113細胞的抗增殖和促凋亡作用的機制研究[D];福建醫(yī)科大學;2015年

2 張卓亞;間充質(zhì)干細胞對B6.MRL-Fas~(lpr)小鼠濾泡輔助T細胞的調(diào)節(jié)作用及機制研究[D];南京大學;2015年

3 周明;As_2O_3聯(lián)合γ分泌酶抑制劑影響肝癌HepG_2細胞耐藥性的研究[D];石河子大學;2015年

4 劉冰慧;凋亡細胞對巨噬細胞IL-12家族細胞因子調(diào)控的研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

5 韓青青;Th22細胞及其效應因子IL-22與類風濕關節(jié)炎及合并間質(zhì)性肺病相關性的研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

6 張騰飛;吉西他濱與AMD3100聯(lián)合應用于膽管癌RBE細胞株對CXCR4/CXCL12軸的作用[D];河北醫(yī)科大學;2015年

7 王們X ;EAAL細胞聯(lián)合全反式維甲酸對人肺腺癌細胞株A549體內(nèi)外作用的研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

8 李超楠;兩種典型OPFRs對PC12細胞的神經(jīng)毒性及其機制探究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2015年

9 楊明;促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子1型受體經(jīng)cAMP/PKA信號通路對U87MG細胞凋亡機制的研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

10 李廣康;RNAi沉默Rap2B基因?qū)盒赞D(zhuǎn)化BEAS-2B細胞的作用[D];鄭州大學;2015年

，

本文編號：1556177