本文關(guān)鍵詞： 組織工程 脫細(xì)胞腎臟骨架 細(xì)胞相容性　出處：《中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景：目前，，慢性腎臟�。╟hronic kidney disease, CKD）的發(fā)病率逐年增加，進(jìn)入CKD終末期的患者數(shù)量也在上升。透析和腎移植是目前主要的替代治療方式，而腎移植是最有效和理想的治療模式，但它的前提是必須有充分的器官來(lái)源，而我們國(guó)家器官短缺的問(wèn)題非常突出。此外，異體移植的腎臟在宿主體內(nèi)會(huì)受到免疫系統(tǒng)的攻擊，腎臟移植患者需長(zhǎng)期口服免疫抑制劑以避免排異反應(yīng)，但藥物的副作用也是眾所周知的。近年來(lái)組織工程的發(fā)展使再生器官作為移植器官的來(lái)源成為可能。良好的組織工程材料是器官再生的關(guān)鍵，但由于腎臟結(jié)構(gòu)非常復(fù)雜，目前人工合成材料無(wú)法構(gòu)建如此復(fù)雜的結(jié)構(gòu)。器官脫細(xì)胞的方法的出現(xiàn)使無(wú)細(xì)胞成分的器官骨架作為器官再生的組織工程材料成為可能。脫細(xì)胞的腎臟骨架保留了腎臟的復(fù)雜結(jié)構(gòu)，而且其細(xì)胞外基質(zhì)成分中有誘導(dǎo)細(xì)胞定植與分化的信號(hào)，這些因素都有利于腎臟再生。目前國(guó)外已有一些器官細(xì)胞洗脫方面的研究，但國(guó)內(nèi)這方面的研究還很少。 目的：利用細(xì)胞洗脫的方法構(gòu)建無(wú)細(xì)胞成分的腎臟骨架；對(duì)骨架的微觀結(jié)構(gòu)和細(xì)胞外基質(zhì)成分進(jìn)行檢測(cè)和鑒定；檢測(cè)脫細(xì)胞腎臟骨架對(duì)多種細(xì)胞的毒性；觀察大鼠誘導(dǎo)多能干細(xì)胞在脫細(xì)胞腎臟骨架中的存活情況。 方法：（1）取出帶有動(dòng)靜脈通路的腎臟，通過(guò)動(dòng)脈向腎臟內(nèi)持續(xù)依次灌注1%的十二烷基磺酸鈉（sodium dodecylsulfatesodium salt，SDS）溶液和1%的Triton-X100溶液，在多個(gè)時(shí)間點(diǎn)觀察腎臟形態(tài)和顏色的變化，并利用蘇木素-伊紅染色（Hematoxylin and Eosin stain，HE）觀察是否有細(xì)胞成分殘留，腎臟骨架結(jié)構(gòu)是否完整；電鏡觀察腎臟骨架的超微結(jié)構(gòu)；并用免疫組化及過(guò)碘酸 希夫氏染色（Periodic Acid-Schiff stain）的方法檢測(cè)腎臟骨架細(xì)胞外基質(zhì)成分的保留情況。 （2）利用浸泡過(guò)脫細(xì)胞腎臟骨架的培養(yǎng)基（脫細(xì)胞腎臟骨架浸提液）處理大鼠腎臟系膜細(xì)胞系、大鼠成纖維細(xì)胞系49F細(xì)胞、人腎小管上皮細(xì)胞系HK-2細(xì)胞、小鼠條件永生化足細(xì)胞系（MPC5），用MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的增殖能力，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞的凋亡率和壞死率。 （3）培養(yǎng)大鼠的誘導(dǎo)多能干細(xì)胞，收集1×107數(shù)量的細(xì)胞，通過(guò)脫細(xì)胞腎臟骨架的動(dòng)脈灌注到腎臟骨架中培養(yǎng)，觀察大鼠誘導(dǎo)多能干細(xì)胞在骨架中的存活情況。 結(jié)果：（1）依次用1%的SDS溶液灌注12h，1%的Triton-X100溶液灌注30min后，腎臟變?yōu)榘咨胪该鳡�，HE染色顯示脫細(xì)胞腎臟骨架無(wú)細(xì)胞成分殘留，重要的細(xì)胞外基質(zhì)成分Ⅳ型膠原、層粘連蛋白、彈性蛋白、糖蛋白都得到保留，電鏡顯示脫細(xì)胞腎臟骨架內(nèi)無(wú)明顯細(xì)胞成分殘留，基底膜連續(xù)完整，系膜基質(zhì)也得到保留。 （2）MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示腎臟骨架浸提液處理過(guò)的大鼠腎臟系膜細(xì)胞、49F細(xì)胞、HK-2細(xì)胞增殖能力與對(duì)照組無(wú)明顯差異；流式細(xì)胞儀檢測(cè)浸提液處理后細(xì)胞的凋亡率和壞死率與對(duì)照組也無(wú)明顯差異。 （3）大鼠脫細(xì)胞腎臟骨架內(nèi)有iPSCs存活。結(jié)論：(1)利用1%SDS溶液和1%Triton-X100溶液能成功洗脫大鼠腎臟細(xì)胞，洗脫后的腎臟骨架內(nèi)無(wú)細(xì)胞殘留，結(jié)構(gòu)基本完整，重要的細(xì)胞外基質(zhì)成分也得到保留。（2）脫細(xì)胞腎臟骨架浸提液對(duì)大鼠腎臟系膜細(xì)胞系、49F細(xì)胞、HK-2細(xì)胞、MPC5細(xì)胞的凋亡率、壞死率及增殖能力無(wú)明顯影響。（3）大鼠iPSCs可以部分在脫細(xì)胞腎臟骨架內(nèi)存活。
[Abstract]:Background : At present , the incidence of chronic kidney disease ( CKD ) is increasing year by year , and the number of patients entering the end stage of CKD is also rising . dialysis and kidney transplantation are the most effective and ideal treatment modes . Objective : To construct a kidney matrix without cellular components by using the method of cell elution , to detect and identify the microscopic structure and extracellular matrix components of the skeleton , to detect the toxicity of the acellular kidney matrix to various cells , and to observe the survival of the rat induced pluripotent stem cells in the acellular kidney matrix .

鏂規(guī)硶錛

本文編號(hào)：1543874