本文關鍵詞： 銀杏葉提取物 血管鈣化 血管平滑肌細胞 氧化應激 慢性腎臟病　出處：《山東大學》2016年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的心血管疾病(cardiovascular disease, CVD)是慢性腎臟病(chronic kidney disease, CKD)患者的主要并發(fā)癥之一,也是CKD患者的主要致死亡原因。血管鈣化是CKD中普遍存在的臨床表現(xiàn),是發(fā)生心血管致死的強大的預測因素。對于血管鈣化,至今仍沒有公認有效的治療方案,因此,了解CKD血管鈣化發(fā)生的機制及其可能的有效防治措施,對于防治慢性腎臟病患者心血管并發(fā)癥意義重大。近年來的研究表明,CKD血管鈣化由血管鈣化的促進與抑制因子失衡引起,其機制極為復雜,與多種危險因素相關。大量流行病學和臨床研究的資料表明高磷血癥是CKD患者血管鈣化、血管硬度增加繼而發(fā)生CVD的主要危險因素。近年來,很多中藥制劑因其毒副作用少、治療效果肯定在臨床上得到了廣泛應用。EGb 761是應用現(xiàn)代工藝獲得的銀杏葉標準提取物,其通過抗氧化、抗炎、抗血小板聚集、抗凋亡、調節(jié)血管生成及功能等多個信號途徑,對改善心肌缺血、內皮細胞損傷、動脈粥樣硬化斑塊形成具有明顯的效果。然而,EGb 761對高磷介導的大鼠血管平滑肌細胞鈣化有何影響尚不明確,而且EGb 761對慢性腎臟病血管鈣化的影響尚未見報道。由于高磷通過增加線粒體ROS的產生促進血管平滑肌細胞向成骨細胞轉分化誘導鈣化,而EGb 761具有抗氧化活性,可減少線粒體ROS產生,因此我們推測,EGb 761可能通過減少線粒體ROS的產生而抑制平滑肌細胞鈣化,從而對慢性腎臟病血管鈣化發(fā)揮一定程度的改善作用。材料與方法為了探明EGb 761對慢性腎臟病血管鈣化的作用,本研究將分為體外細胞實驗和在體動物實驗。第一部分以體外培養(yǎng)的大鼠血管平滑肌細胞為模型,通過在高磷狀態(tài)下誘導其向成骨細胞分化,檢測相關信號通路和成骨信號分子的表達以及細胞鈣含量,觀察β-磷酸甘油聯(lián)合或不聯(lián)合EGb 761對血管平滑肌細胞鈣化的影響。第二部分通過高磷飲食誘導建立殘腎大鼠慢性腎臟病血管鈣化模型,給予含EGb 761的飼料進行干預,觀察其對動物動脈鈣化的影響,進一步探明其作用及分子機制。實驗步驟如下：1.采用組織塊貼壁法對大鼠主動脈血管平滑肌細胞培養(yǎng)并鑒定后,分組使用p-磷酸甘油、不同濃度的EGb 761于預培養(yǎng)7天。2.分組對細胞內鈣含量、細胞內蛋白含量、堿性磷酸酶活性、線粒體活性氧自由簇含量和NF-κB活性進行測定,并定量PCR檢測大鼠血管平滑肌細胞核心結合因子(Cbfa1)、α-平滑肌肌動蛋白(a-smoot muscle actin, a-SM actin) mRNA的表達情況,以判斷不同濃度EGb 761在血管平滑肌細胞鈣化過程中的作用。3.通過高磷誘導建立殘腎大鼠慢性腎臟病血管鈣化模型,并應用EGb 761進行干預16周后測定大鼠血清尿素氮、肌酐、鈣、磷指標。4.用Von Kossa染色測定大鼠胸主動脈鈣化的情況,并對大鼠腹主動脈鈣含量進行測定,蛋白免疫印跡法檢測大鼠胸主動脈上段NF-κB p65、核心結合因子α1 (Cbfα1)和a-SM actin的蛋白含量,探討EGb 761在慢性腎臟病血管鈣化中的作用。結果1.BGP鈣化干預組細胞內鈣含量顯著高于陰性對照組(P0.01),加入不同濃度的EGb 761后,大鼠血管平滑肌細胞內鈣含量降低(P0.05),而且降低程度跟加入的EGb 761呈濃度依賴性。2.高磷可誘導細胞堿性磷酸酶的高表達、上調NF-κB活性、增加線粒體ROS產生、增加Cbfa1 mRNA的基因表達、降低a-SM actin mRNA的基因表達(P0.05),在培養(yǎng)液中加入相應濃度的EGb 761后,堿性磷酸酶的表達下降、NF-κB活性下降、線粒體ROS減少、Cbfα1 mRNA的基因表達下降、a-SM actin mRNA的基因表達上調(P0.05),而且效果與加入的EGb 761呈劑量依賴關系。3.殘腎大鼠慢性腎臟病血管鈣化模型干預16周后取血化驗發(fā)現(xiàn)血清尿素氮、肌酐、磷明顯高于陰性對照組,說明5/6腎切除+高磷飲食法誘導大鼠慢性腎功能衰竭成功,但EGb 761干預組和單純高磷飲食組之間差異無統(tǒng)計學意義。4.大鼠胸主動脈Von Kossa染色和腹主動脈鈣含量測定證實高磷可誘導殘腎大鼠慢性腎臟病血管鈣化,加入EGb 761干預可以減輕血管鈣化。5.EGb 761可以抑制慢性腎臟病血管鈣化大鼠主動脈中NF-κB p65、cbfa1的蛋白表達,上調a-SM actin蛋白表達,抑制血管平滑肌細胞的表型轉化。結論1、EGb 761可降低13-磷酸甘油誘導的大鼠動脈血管平滑肌細胞的鈣化,它不但降低鈣離子的沉積,而且抑制血管平滑肌細胞表型轉化,具體機制與降低堿性磷酸酶的表達、減少血管平滑肌細胞線粒體活性氧自由簇的產生、下調NF-κB的活性有關。2、EGb 761通過ROS-NF-κB信號通道減少氧化應激、抑制大鼠血管平滑肌細胞向成骨細胞的轉化,對慢性腎功能衰竭大鼠的血管鈣化起到保護作用。但是研究發(fā)現(xiàn)還存在著其它信號通路參與高磷誘導血管鈣化過程,EGb 761的保護機制需要更進一步的研究。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R692

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 ;血管鈣化轉化醫(yī)學研究進展研討會第一輪通知[J];中國病理生理雜志;2011年04期

2 ;血管鈣化轉化醫(yī)學研究進展研討會第二輪通知[J];生理科學進展;2011年03期

3 張曉敏;湯日寧;劉必成;;血管鈣化相關抑制因子的研究進展[J];中華高血壓雜志;2013年03期

4 邵文;李書國;;血管平滑肌細胞與血管鈣化機制的研究進展[J];醫(yī)學綜述;2013年16期

5 江太發(fā);;血管鈣化也危險[J];山西老年;2011年02期

6 張寶紅,杜軍保;血管鈣化的調節(jié)機制[J];心血管病學進展;2003年03期

7 楊英;血管鈣化[J];內蒙古醫(yī)學院學報;2004年02期

8 楊曉玲,曹軍;血管鈣化的分子機制[J];寧夏醫(yī)學院學報;2005年04期

9 闕利亞;侯蘭;劉梅瑩;;終末期腎功能衰竭患者血管鈣化發(fā)生事件分析[J];中國熱帶醫(yī)學;2007年03期

10 張訓;;血液透析患者血管鈣化的防治[J];中國血液凈化;2007年05期

相關會議論文 前10條

1 王莉;丁涵露;;血管鈣化與鈣磷[A];中華醫(yī)學會腎臟病學分會2010學術年會專題講座匯編[C];2010年

2 齊永芬;唐朝樞;;血管鈣化發(fā)病機制研究新進展[A];中華醫(yī)學會第十三次全國心血管病學術會議專題報告專輯[C];2011年

3 張訓;;慢性腎臟病病人的血管鈣化[A];中華醫(yī)學會腎臟病學分會2006年學術年會專題講座[C];2006年

4 游懷舟;丁峰;楊海春;顧勇;林善錟;;尿毒癥患者體內高級蛋白氧化產物對血管鈣化的作用及其機制探討[A];中華醫(yī)學會腎臟病學分會2006年學術年會論文集[C];2006年

5 孫文學;劉毅;阮吉;徐玉蘭;;雌激素對大鼠血管鈣化消退影響的研究[A];2012年浙江省腎臟病學術年會論文集[C];2012年

6 劉毅;;慢性腎功能衰竭血管鈣化防治研究進展[A];中華醫(yī)學會第11屆全國內科學術會議論文匯編[C];2007年

7 王中群;;尿毒癥大鼠血管鈣化的實驗研究[A];中國微循環(huán)學會2011年全國學術會議論文匯編[C];2011年

8 李開龍;王燕;李柱宏;陳菁;林利容;李開斌;何婭妮;;他汀類藥物對維持性血透患者血管鈣化的影響[A];西南地區(qū)第12屆腎臟病學術會議暨貴州省醫(yī)學會腎臟病學分會2012年學術會議論文集[C];2012年

9 李開龍;何婭妮;王惠明;蘇楠;詹俊;趙玲;陳林;;維持性血透患者外周血成纖維細胞生長因子23水平與血管鈣化關系的研究[A];第十一屆全國中西醫(yī)結合腎臟病學術會議論文匯編[C];2010年

10 江瑛;王梅;;高磷與慢性腎衰竭大鼠血管鈣化的關系研究[A];中華醫(yī)學會腎臟病學分會2006年學術年會論文集[C];2006年

相關博士學位論文 前8條

1 魯燕;脂聯(lián)素在內質網應激致血管鈣化過程中的作用及其機制[D];山西醫(yī)科大學;2015年

2 李恩剛;銀杏葉提取物對高磷誘導的慢性腎臟病大鼠血管鈣化作用的研究[D];山東大學;2016年

3 游懷舟;高級蛋白氧化產物在血管鈣化中的作用及其機制探討[D];復旦大學;2007年

4 張萍;高磷和慢性炎癥對血管平滑肌細胞鈣化的影響及相關調節(jié)機制的研究[D];浙江大學;2004年

5 王寧寧;尿毒癥患者血管鈣化的組織學研究及相關分子機制的探討[D];南京醫(yī)科大學;2006年

6 劉立新;體外血管鈣化與細胞增殖的關系及其氟伐他汀對鈣化影響的實驗研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院;2003年

7 趙安菊;血管鈣化相關因子在糖尿病鼠腎小動脈中的表達及其與血管內膜/中膜增厚關系的初步探討[D];四川大學;2007年

8 張靜;KLF5介導高磷誘導的Runx2表達和血管平滑肌細胞成骨樣分化[D];河北醫(yī)科大學;2014年

相關碩士學位論文 前10條

1 劉國棟;白藜蘆醇抑制維生素D3和尼古丁誘導大鼠血管鈣化的作用及機制研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學院;2015年

2 靳晶晶;鎂通過調節(jié)鈣化相關因子的表達抑制血管鈣化[D];河北醫(yī)科大學;2015年

3 楊銳;硫化氫抑制內質網應激改善大鼠主動脈血管鈣化[D];河北醫(yī)科大學;2015年

4 孟蕓;大鼠牙周炎與血管鈣化關系的研究[D];青島大學;2015年

5 徐燕;血液透析患者血清FGF-23水平與血管鈣化的相關性研究[D];蘇州大學;2015年

6 陳瑤;CD137分子對小鼠血管鈣化的影響[D];江蘇大學;2016年

7 張正楊;鉀離子抗血管鈣化的分子機制研究[D];川北醫(yī)學院;2014年

8 閆鐵昆;終末期腎病患者橈動脈局部醛固酮—鹽皮質激素受體活性改變及其與血管鈣化的關系[D];天津醫(yī)科大學;2009年

9 陳晶晶;C-型利鈉利尿肽抑制血管鈣化的作用及機制研究[D];南華大學;2008年

10 李相;終末期腎臟疾病血管鈣化多因素關聯(lián)性分析[D];吉林大學;2012年

，

本文編號：1507335