本文關(guān)鍵詞：過表達(dá)及沉默細(xì)胞黏附分子1基因膀胱癌細(xì)胞株的構(gòu)建

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【摘要】：目的構(gòu)建過表達(dá)及沉默細(xì)胞黏附分子1(CADM1)基因的膀胱癌細(xì)胞株。方法培養(yǎng)并收集膀胱癌細(xì)胞株T24。1過表達(dá)CADM1基因T24細(xì)胞構(gòu)建:將T24細(xì)胞分為1、2、3組,real-time PCR擴(kuò)增CADM1基因全長,與慢病毒載體p HBLV-IRES-Zs Green-PGK-puro進(jìn)行連接(1組),并設(shè)載體對(duì)照組(2組)和空白對(duì)照(3組);經(jīng)酶切及測(cè)序鑒定正確后在293T細(xì)胞中包裝病毒,病毒濃縮后感染T24細(xì)胞。2沉默CADM1基因T24細(xì)胞構(gòu)建:將T24細(xì)胞分為A、B、C、D、E組,設(shè)計(jì)3條針對(duì)CADM1基因的干擾序列(siRNA1/2/3)分別與載體p HBLV-U6-shRNA-ZsGreen-Puro進(jìn)行連接(A、B、C組),D組與p HBLV-U6-Zs Green-Puro進(jìn)行連接,E組為空白對(duì)照;經(jīng)雙酶切、PCR及測(cè)序鑒定連接載體,在293T細(xì)胞中包裝病毒,病毒濃縮后感染T24細(xì)胞。采用real-time PCR檢測(cè)T24細(xì)胞中的CADM1 mRNA,Western blotting法檢測(cè)CADM1蛋白。結(jié)果過表達(dá)和沉默CADM1基因的慢病毒載體及細(xì)胞株均正確構(gòu)建。1、2、3組CADM1 mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為4.84±0.02、1.12±0.03、1.00±0.00,CADM1蛋白相對(duì)表達(dá)量分別為4.53±0.03、1.05±0.04、1.00±0.01,1組CADM1 mRNA及蛋白相對(duì)表達(dá)量高于2、3組(P均0.05)。A、B、C、D、E組CADM1 mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為0.28±0.05、0.98±0.02、0.74±0.01、0.99±0.01、1.00±0.00,CADM1蛋白相對(duì)表達(dá)量分別為0.33±0.04、0.86±0.12、0.67±0.07、1.00±0.04、1.00±0.03,A組CADM1 mRNA及蛋白相對(duì)表達(dá)量低于B、C、D、E組(P均0.05)。結(jié)論成功構(gòu)建了過表達(dá)及沉默CADM1基因的膀胱癌細(xì)胞株T24。
【作者單位】： 天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院;天津市泌尿外科研究所;
【基金】：天津市自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目(12JCZDJC23700)
【分類號(hào)】：R737.14
【正文快照】： 膀胱癌是我國最常見的泌尿系統(tǒng)腫瘤,膀胱癌的預(yù)后與多種因素相關(guān)[1,2]。近年來,許多腫瘤標(biāo)記物相繼被發(fā)現(xiàn)可用于膀胱癌的預(yù)后判斷。細(xì)胞黏附分子1(CADM1)是2001年由Kuramochi等[3]在人類非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)中發(fā)現(xiàn)的一種抑癌基因。大量研究顯示,CADM1在食管癌[4]、黑色素瘤[5]

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1302072