本文關(guān)鍵詞：精子相關(guān)抗原SPAG6與TAC1和TCTE3蛋白相互作用關(guān)系的探討

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【摘要】：目的：探討精子相關(guān)抗原SPAG6與TAC1和TCTE3之間是否存在相互作用。 方法：提取健康成年雄性小鼠（18-20g）睪丸、腦、肝、腎、心、肺、脾、肌肉8種組織的總RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，設(shè)計(jì)小鼠Tac1與Tcte3的特異性引物，PCR法觀察Tac1及Tcte3在各組織中的表達(dá)；以小鼠睪丸組織cDNA為模版，PCR擴(kuò)增Tac1和Tcte3序列，構(gòu)建Tac1/pGADT7、Tac1/pEGFPN2、Tcte3/pGADT7、Tcte3/pEGFPN2的重組質(zhì)粒，將含有pEGFP-N2載體的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至CHO細(xì)胞和COS-1細(xì)胞中，采用免疫熒光染色及WesternBlot檢測(cè)TAC1和TCTE3在細(xì)胞中的定位和蛋白表達(dá)。將Tac1/pGADT7、Tcte3/pGADT7與SPAG6/PGBKT7進(jìn)行酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)，提取酵母蛋白，Western Blot檢測(cè)TAC1與SPAG6、TCTE3與SPAG6之間是否存在相互作用。 結(jié)果：Tac1主要在睪丸、腦、心臟中表達(dá)，Tcte3在睪丸、腦、肝、腎、肺、脾、肌肉中均有表達(dá)。酶切和測(cè)序鑒定表明，，Tac1/pGADT7、Tac1/pEGFPN2、Tcte3/pGADT7、Tcte3/pEGFPN2的重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)TAC1和TCTE3分別表達(dá)于整個(gè)胞體和胞漿，當(dāng)共轉(zhuǎn)染SPAG6質(zhì)粒后，TAC1及TCTE3的定位均被轉(zhuǎn)移至細(xì)胞微管中。酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)顯示TACl/SPAG6和TCTE3/SPAG6組合在缺少三種氨基酸（Leu、Trp、His）的培養(yǎng)板上有菌落生成，Western Blot顯示菌落中TAC1、TCTE3、SPAG6蛋白表達(dá)顯著，分子量正確。 結(jié)論：通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)以及酵母雙雜交試驗(yàn)，證實(shí)精子相關(guān)抗原SPAG6與TAC1和TCTE3之間存在直接地相互作用。
【學(xué)位授予單位】：武漢科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R698.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1263504