本文關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1通過(guò)Smad3調(diào)控補(bǔ)體應(yīng)答基因32轉(zhuǎn)錄的分子機(jī)制

  更多相關(guān)文章： 補(bǔ)體應(yīng)答基因 上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β 轉(zhuǎn)錄調(diào)控

【摘要】：目的:前期工作發(fā)現(xiàn)補(bǔ)體應(yīng)答基因32(RGC-32)是轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGF-β)誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)過(guò)程中Smad信號(hào)下游的關(guān)鍵調(diào)控分子。本研究擬進(jìn)一步明確TGF-β誘導(dǎo)腎小管EMT過(guò)程中RGC-32的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制。方法:體外培養(yǎng)NRK-52E細(xì)胞,利用熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)檢測(cè)RGC-32啟動(dòng)子活性以確定Smad結(jié)合元件(SBE)是否為TGF-β誘導(dǎo)的RGC-32轉(zhuǎn)錄調(diào)控位點(diǎn);通過(guò)凝膠遷移率實(shí)驗(yàn)(EMSA)明確與之結(jié)合的轉(zhuǎn)錄調(diào)控分子。結(jié)果:(1)轉(zhuǎn)染野生型SBE片段的NRK-52E細(xì)胞熒光素酶活性明顯增高,而轉(zhuǎn)染突變的SBE片段的細(xì)胞無(wú)此表現(xiàn),表明SBE是調(diào)控TGF-β誘導(dǎo)的RGC-32轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)的關(guān)鍵位點(diǎn)。(2)合成32P標(biāo)記的包含SBE的寡核苷酸探針行EMSA可見TGF-β誘導(dǎo)的核蛋白與探針復(fù)合物生成,且加入包含SBE序列的競(jìng)爭(zhēng)片段可以抑制此核蛋白-探針復(fù)合物的形成,表明有蛋白與SBE結(jié)合并調(diào)控RGC-32的轉(zhuǎn)錄。(3)當(dāng)加入不同的Smad抗體行超遷移實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Smad2和Smad3抗體可以和復(fù)合物相互作用,表明Smad2和Smad3可能是TGF-β誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄復(fù)合物的組成部分。(4)將Smad2和Smad3分別與p-1500RGCluc共同轉(zhuǎn)染NRK-52E細(xì)胞,Smad3可以顯著增加RGC-32啟動(dòng)子活性,表明Smad3是TGF-β誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄復(fù)合物的組成部分,而不是Smad2。結(jié)論:在TGF-β誘導(dǎo)腎小管EMT過(guò)程中,Smad3通過(guò)與RGC-32啟動(dòng)子區(qū)SBE結(jié)合,從而調(diào)控腎小管EMT過(guò)程。
【作者單位】： 上海交通大學(xué)附屬兒童醫(yī)院腎臟風(fēng)濕科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81370813) 上海市科委(114119a1700) 上海市衛(wèi)生局優(yōu)秀學(xué)科帶頭人項(xiàng)目(XBR2011010)
【分類號(hào)】：R692
【正文快照】： 慢性腎臟病(CKD)一直是困擾全世界的難題,并嚴(yán)重威脅著人類健康。而腎小管間質(zhì)纖維化的程度與腎功能下降及CKD的進(jìn)程密切相關(guān)[1-3]。腎小管間質(zhì)纖維化的一個(gè)重要過(guò)程是上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)[3-5],主要表現(xiàn)為上皮細(xì)胞的表型和功能丟失,上皮細(xì)胞標(biāo)志物如E-鈣黏蛋白表達(dá)降低,

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳偉 ,付小兵 ,盛志勇;Review of current progress in the structure and function of Smad proteins[J];Chinese Medical Journal;2002年03期

2 王啟偉;Smad蛋白信號(hào)網(wǎng)絡(luò)[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊(cè));2003年04期

3 張遠(yuǎn)強(qiáng),胡靜,劉新平,許若軍;EXPRESSION AND LOCALIZATION OF SMAD4 PROTEIN IN RAT TESTIS DURING THE POSTNATAL DEVELOPMENT[J];Chinese Medical Sciences Journal;2003年03期

4 徐新保,冷希圣,何振平,梁志清,林凱,魏玉華,于鑫,彭吉潤(rùn);Inhibitory effect of retroviral vector containing anti-sense Smad_4 gene on Ito cell line, LI90[J];Chinese Medical Journal;2004年08期

5 鄭啟新;王運(yùn)濤;郭曉東;;Wild-type Smad3 Gene Enhances the Osteoblastic Differentiation of Rat Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells in Vitro[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)英德文版);2005年06期

6 王運(yùn)濤,鄭啟新,郭曉東,吳永超,郝杰;Influence of Exogenous TGFβ_1 on the Expression of Smad2 and Smad3 in Rat Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)英德文版);2005年01期

7 ;HSP70 decreases receptor-dependent phosphorylation of Smad2 and blocks TGF-β-induced epithelial-mesenchymal transition[J];遺傳學(xué)報(bào);2011年03期

8 ;Berbamine inhibits proliferation and induces apoptosis of KU812 cells by increasing Smad3 activity[J];Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology);2011年07期

9 尚政軍;修復(fù)相關(guān)基因Smad3的研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊(cè));2001年05期

10 楊曉 ,孫彥洵 ,周江 ,黃培堂 ,黃翠芬 ,徐曉玲 ,李翠玲 ,GotayJessica ,陳林 ,鄧初夏;Establishment of murine Smad5 double knockout ES cells and the studies on their properties[J];Science in China(Series C:Life Sciences);2001年02期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 霍艷英;李剛;胡迎春;周平坤;吳德昌;;THE SIGNIFICANCE OF SMAD7 IN TGF-β-MEDIATED SMADS AND ERK/MAPK SIGNAL PATHWAY IN RADIATION-INDUCED TUMORIGENIC HUMAN BRONCHIAL EPITHELIAL CELLS[A];海峽兩岸第三屆毒理學(xué)研討會(huì)論文摘要[C];2005年

2 張素平;張然;陳峰;張麗霞;陳曄光;;Smad7 antagonises TGF-β signaling in the nucleus[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)2005年學(xué)術(shù)大會(huì)、青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2005年

3 王劍;楊曉;;Gene expression profile in cardiomyocyte-specific Smad4 knock-out mice[A];中國(guó)遺傳學(xué)會(huì)第八次代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要匯編（2004-2008）[C];2008年

4 劉昭廷;王強(qiáng);孟安明;;基因組水平上受斑馬魚Smad2調(diào)控的靶基因[A];“細(xì)胞活動(dòng) 生命活力”——中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)全體會(huì)員代表大會(huì)暨第十二次學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2011年

5 ;HSP70 decreases receptor-dependent phosphorylation of Smad2 and blocks TGF-β-induced epithelial-mesenchymal transition[A];“細(xì)胞活動(dòng) 生命活力”——中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)全體會(huì)員代表大會(huì)暨第十二次學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2011年

6 ;Maternal Smad3 Deficiency Compromises Decidualization in Mice[A];“細(xì)胞活動(dòng) 生命活力”——中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)全體會(huì)員代表大會(huì)暨第十二次學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2011年

7 Jingmin Zhao;Jia Wang;Jun Yu;;Inhibitory role of Smad7 in hepatocarcinogenesis in mice and in vitro[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十六次全國(guó)病毒性肝炎及肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

8 Bensoussan D.;Stoltz J.F.;de Isla N;;Differentiation of human bone marrow mesenchymal stem cells induced by biaxial tension involves Smad3 activation[A];中國(guó)生理學(xué)會(huì)第23屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨生理學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要文集[C];2010年

9 ;Function of TGF-β/Smad4 Signaling in the Maintenance of Tissue Homeostasis[A];中國(guó)的遺傳學(xué)研究——遺傳學(xué)進(jìn)步推動(dòng)中國(guó)西部經(jīng)濟(jì)與社會(huì)發(fā)展——2011年中國(guó)遺傳學(xué)會(huì)大會(huì)論文摘要匯編[C];2011年

10 楊曉;;Targeted disruption of Smad4 in mouse epidemis results in failure of hair follicle cycling and formation of skin tumors[A];中國(guó)遺傳學(xué)會(huì)七屆一次青年研討會(huì)暨上海高校模式生物E——研究院第一屆模式生物學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2005年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 記者 李天舒;先天性心臟病病因被發(fā)現(xiàn)[N];健康報(bào);2009年

2 通訊員 俞志新　記者 李水根;骨碎補(bǔ)總黃酮可以促進(jìn)骨形成[N];健康報(bào);2010年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 黎錦;氨氯地平通過(guò)調(diào)節(jié)Smad的表達(dá)防止腎臟纖維化[D];武漢大學(xué);2014年

2 張俊文;TGF-β信號(hào)通路中兩個(gè)與TβRI相互作用蛋白的功能研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

3 霍艷英;在輻射誘發(fā)人支氣管上皮細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化過(guò)程中Smad7基因的作用機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2003年

4 于鴻;Smad7過(guò)表達(dá)對(duì)大鼠腎小球系膜細(xì)胞基質(zhì)代謝的影響[D];復(fù)旦大學(xué);2004年

5 齊心;Smad4在維持胚胎心臟增殖中的作用研究[D];南京大學(xué);2010年

6 孫彥洵;Smad5基因在小鼠胚胎干細(xì)胞增殖、分化及凋亡中的功能與機(jī)制[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2005年

7 賀文芳;Smad2在氧糖剝奪再灌注損傷中的表達(dá)及其作用機(jī)制研究[D];中南大學(xué);2012年

8 肖煒;腎康丸對(duì)糖尿病腎病TGF-β_1/Smad信號(hào)通路的影響[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2006年

9 王惕;慢病毒介導(dǎo)Smad7基因?qū)悄ぴ鲋撑c纖維化的抑制作用[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

10 徐業(yè)芬;Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)基因表達(dá)與湖羊高繁殖力關(guān)系的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 林琳;SnoN蛋白在RPE細(xì)胞TGF-β/Smad信號(hào)通路中的作用[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 丁雪峰;芪藶強(qiáng)心提取物阻斷Smad3信號(hào)通路抑制血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的心臟成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的機(jī)制研究[D];川北醫(yī)學(xué)院;2015年

3 李祥亭;N-乙酰半胱氨酸對(duì)大鼠肺纖維化模型肺組織Smad家族基因表達(dá)的影響[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2015年

4 李鑫靜;Smad4、Kindlin-2和Anxa2基因在胃癌組織中的表達(dá)及臨床病理意義[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

5 汪呈;靶向Smurf1 HECT結(jié)構(gòu)域的小分子抑制劑的細(xì)胞學(xué)水平驗(yàn)證[D];石河子大學(xué);2015年

6 田茜華;補(bǔ)腎法、疏肝法對(duì)體外培養(yǎng)IVF-ET患者卵巢顆粒細(xì)胞中ACTA及其Smads信號(hào)通路的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

7 李春杰;新生大鼠高氧性肺損傷肺組織中Smad3及PPAR-γ的蛋白和mRNA表達(dá)及羅格列酮的干預(yù)作用[D];蘇州大學(xué);2015年

8 孫景英;CXCL9和Smad3的表達(dá)與新疆維吾爾族銀屑病發(fā)病關(guān)系的研究[D];石河子大學(xué);2015年

9 黃海平;MiR-145通過(guò)靶向作用于Smad3抑制鼻咽癌的侵襲和轉(zhuǎn)移能力[D];蘇州大學(xué);2015年

10 劉昌偉;Smad2通過(guò)抑制TGF-β1/Smad3介導(dǎo)的膠原合成在肝纖維化中起保護(hù)作用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：1247860