本文關鍵詞：轉化生長因子β1通過Smad3調控補體應答基因32轉錄的分子機制

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【摘要】：目的:前期工作發(fā)現(xiàn)補體應答基因32(RGC-32)是轉化生長因子β(TGF-β)誘導的腎小管上皮細胞-間充質轉化(EMT)過程中Smad信號下游的關鍵調控分子。本研究擬進一步明確TGF-β誘導腎小管EMT過程中RGC-32的轉錄調控機制。方法:體外培養(yǎng)NRK-52E細胞,利用熒光素酶報告基因實驗檢測RGC-32啟動子活性以確定Smad結合元件(SBE)是否為TGF-β誘導的RGC-32轉錄調控位點;通過凝膠遷移率實驗(EMSA)明確與之結合的轉錄調控分子。結果:(1)轉染野生型SBE片段的NRK-52E細胞熒光素酶活性明顯增高,而轉染突變的SBE片段的細胞無此表現(xiàn),表明SBE是調控TGF-β誘導的RGC-32轉錄啟動的關鍵位點。(2)合成32P標記的包含SBE的寡核苷酸探針行EMSA可見TGF-β誘導的核蛋白與探針復合物生成,且加入包含SBE序列的競爭片段可以抑制此核蛋白-探針復合物的形成,表明有蛋白與SBE結合并調控RGC-32的轉錄。(3)當加入不同的Smad抗體行超遷移實驗發(fā)現(xiàn)Smad2和Smad3抗體可以和復合物相互作用,表明Smad2和Smad3可能是TGF-β誘導的轉錄復合物的組成部分。(4)將Smad2和Smad3分別與p-1500RGCluc共同轉染NRK-52E細胞,Smad3可以顯著增加RGC-32啟動子活性,表明Smad3是TGF-β誘導的轉錄復合物的組成部分,而不是Smad2。結論:在TGF-β誘導腎小管EMT過程中,Smad3通過與RGC-32啟動子區(qū)SBE結合,從而調控腎小管EMT過程。
【作者單位】： 上海交通大學附屬兒童醫(yī)院腎臟風濕科;
【基金】：國家自然科學基金資助項目(81370813) 上海市科委(114119a1700) 上海市衛(wèi)生局優(yōu)秀學科帶頭人項目(XBR2011010)
【分類號】：R692
【正文快照】： 慢性腎臟病(CKD)一直是困擾全世界的難題,并嚴重威脅著人類健康。而腎小管間質纖維化的程度與腎功能下降及CKD的進程密切相關[1-3]。腎小管間質纖維化的一個重要過程是上皮細胞-間充質轉化(EMT)[3-5],主要表現(xiàn)為上皮細胞的表型和功能丟失,上皮細胞標志物如E-鈣黏蛋白表達降低,

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