本文關(guān)鍵詞：Nampt在糖尿病發(fā)病過程中對腎臟細(xì)胞NF-κBp65和Sirt1的調(diào)控及相互關(guān)系

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【摘要】：目的:通過檢測糖尿病發(fā)病過程中Nampt,NF-κBp65,Sirt1基因表達(dá)變化,探討Nampt對NF-κBp65和Sirt1基因的調(diào)控作用,為揭示糖尿病腎病的發(fā)病機理和新的治療方法提供理論依據(jù)。方法:1.應(yīng)用高濃度葡萄糖(35mmol/L)1640培養(yǎng)基培養(yǎng)NRK-52E細(xì)胞,在不同培養(yǎng)時間(0h,24h,48h,72h,96h,120h)提取各組蛋白,用蛋白質(zhì)印記技術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)Nampt,NF-κBp65,Sirt1基因的蛋白表達(dá)情況;在培養(yǎng)過程中,觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化,同時免疫熒光技術(shù)檢測細(xì)胞中Nampt,NF-κBp65和Sirt1基因的表達(dá)情況。2.通過2型糖尿病SD大鼠模型研究,應(yīng)用免疫組化方法檢測胰腺和腎臟中Nampt,NF-κBp65和Sirt1的蛋白表達(dá),綜合評價Nampt與NF-κBp65和Sirt1基因表達(dá)的關(guān)系,分析其在糖尿病及糖尿病腎病發(fā)病之間的作用及其相互關(guān)系。結(jié)果:1.NRK-52E細(xì)胞在高濃度葡萄糖環(huán)境中,Nampt隨著培養(yǎng)時間延長,表達(dá)量明顯升高,此時NF-κBp65表達(dá)也隨之增加,而Sirt1的蛋白表達(dá)水平則隨著Nampt表達(dá)的增加而逐漸降低;形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn),與對照組比較,高濃度葡萄糖培養(yǎng)的NRK-52E細(xì)胞,細(xì)胞核體積明顯變大,細(xì)胞呈現(xiàn)出不規(guī)則的變化;熒光顯微鏡下發(fā)現(xiàn),Nampt在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)明顯增加,且胞漿和胞核中均見有表達(dá),NF-κBp65蛋白表達(dá)也明顯增強,此時Sirt1表達(dá)則低于正常糖濃度組;NF-κBp65表達(dá)隨著Nampt蛋白的增加而增加,而Sirt1表達(dá)隨著Nampt蛋白的增加而降低;2.在2型糖尿病模型大鼠的胰腺組織中,在胰島中Nampt、NF-κBp65和Sirt1均見有表達(dá),模型組中Nampt和NF-κBp65表達(dá)明顯高于正常對照組,而Sirt1的表達(dá)低于正常對照組;在腎臟組織中,Nampt,NF-κBp65和Sirt1蛋白主要表達(dá)于腎小管和腎小球部位部分有表達(dá),其中Nampt和NF-κBp65明顯高于對照組,而Sirt1蛋白表達(dá)則低于對照組。結(jié)論:1.在高糖濃度培養(yǎng)的NRK-52E細(xì)胞中Nampt、NF-κBp65增加,而Sirt1表達(dá)則明顯降低;2.在2型糖尿病模型SD大鼠胰腺和腎臟組織中,Nampt,Nampt和NF-κBp65表達(dá)增加,Sirt1蛋白表達(dá)減少。在糖尿病及糖尿病腎病的發(fā)病中,Nampt可能作為關(guān)鍵因子在調(diào)節(jié)NF-κBp65和Sirt1蛋白表達(dá)方面發(fā)揮中作用。
【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R587.2;R692.9

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本文編號：1209288