本文關鍵詞：利用體內(nèi)噬菌體展示技術篩選膀胱癌特異性結合肽

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【摘要】：目的:利用體內(nèi)噬菌體展示技術篩選與人膀胱移行細胞癌特異性結合的小分子多肽。方法:將人膀胱移行細胞癌細胞BIU87接種于裸鼠體內(nèi),制備膀胱癌荷瘤小鼠模型,尾靜脈注射噬菌體展示環(huán)七肽庫,然后篩選與膀胱移行細胞癌特異性結合的含外源多肽的噬菌體,經(jīng)過3輪體內(nèi)篩選后,免疫組織化學法及ELISA法鑒定單克隆噬菌體對BIU87的親和力。提取陽性單克隆噬菌體單鏈DNA進行測序,并推導出外源多肽氨基酸序列,化學合成多肽、制備分子探針后采用激光掃描共聚焦顯微鏡術及流式細胞術鑒定多肽對膀胱癌細胞和組織的特異性。結果:3輪體內(nèi)篩選后,噬菌體富集率達到4.334×102倍。免疫組化結果顯示,腫瘤組織中噬菌體肽的含量隨著每一輪篩選呈增長趨勢,且結合逐漸增強,同時由于噬菌體經(jīng)肝、腎代謝,可見肝臟結合大量非特異性的噬菌體。ELISA結果顯示,隨機挑選的30個單克隆噬菌體斑中,有24個陽性噬菌體,其中10個噬菌體對BIU87有較強的親和力,對其測序并推導出3種多肽序列,重復率最高的序列CSSPIGRHC(8/10)命名為NYZL1。化學合成FITC-C6-NYZL1,通過激光掃描共聚焦顯微鏡術、流式細胞術均證明多肽NYZL1可以特異性結合膀胱癌細胞。結論:利用體內(nèi)噬菌體展示技術篩選出了與人膀胱移行細胞癌特異性結合的小分子多肽NYZL1,為膀胱癌早期診斷和靶向治療提供一定的理論依據(jù)。
【作者單位】： 山西醫(yī)科大學微生物學與免疫學教研室;山西醫(yī)科大學第一醫(yī)院泌尿外科;
【基金】：國家自然科學基金項目(81172444)
【分類號】：R737.14
【正文快照】： 膀胱癌(Bladder carcinoma)是最常見的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤之一,其中75%~85%為淺表性膀胱腫瘤,又稱為非肌肉浸潤性腫瘤(Non muscle invasivebladder tumor,NMIBC)。雖然采取膀胱癌手術及術后綜合療法顯著提高了患者5年生存率,但因膀胱癌早期血尿�？勺孕袦p輕或停止,易給患者造成

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本文編號：1136680