本文關鍵詞：壓應力對PLGA支架上牙齦成纖維細胞COL-I和MMP-1表達的影響

  更多相關文章： 人牙齦成纖維細胞 PLGA支架 壓應力 Ⅰ型膠原 基質金屬蛋白酶-1

【摘要】：目的：①建立人牙齦成纖維細胞(HGFs)PLGA三維培養(yǎng)及力學加載模型,探討HGFs三維培養(yǎng)的方法及力學加載方式；②研究持續(xù)壓應力對PLGA支架上HGFs COL-I和MMP-1的表達的影響,探討壓應力作用下牙齦組織的改建機制。方法：①采用組織塊培養(yǎng)法對HGFs進行原代培養(yǎng),取第4代HGFs鑒定細胞來源。②取第4代HGFs,制備1×105個/ml的混懸液接種于PLGA膜上,3天后對PLGA膜上的HGFs進行熒光電鏡和掃描電鏡觀察,并采用CCK-8法對復合培養(yǎng)的HGFs進行細胞增殖活性檢測。③取復合培養(yǎng)3天后的PLGA-HGFs復合體,采用重物加載方式分別對其施加大小為5、15、25、35g/cm2的壓應力,以0g/cm2組作為對照,加力6h后,采用CCK-8法測定PLGA膜上HGFs的增殖活性,確定最佳加力力值。④取復合培養(yǎng)3天后的PLGA-HGFs復合體,對其施加以上探討出的最佳加力力值,分別作用6、24、48、72h,以未加力、培養(yǎng)相同時間作為對照,分別采用RT-qPCR和ELISA法檢測PLGA-HGFs復合體受力后COL-I、MMP-1 mRNA和蛋白的表達變化。結果：①培養(yǎng)10-14d后,可見成纖維樣細胞從組織塊邊緣爬出。細胞來源鑒定顯示該細胞為中胚層來源,證明所培養(yǎng)的細胞為HGFs。②熒光電鏡結果顯示,PLGA支架上有大量的HGFs密集生長,且同一視野中可觀察到不同清晰度的細胞存在,說明細胞是生長在不同的平面上。掃描電鏡結果顯示,HGFs在支架上貼附緊密,細胞呈現(xiàn)多角形,三維方向上伸展充分,并可見基質的合成。③CCK-8結果顯示：1) HGFs在PLGA膜上復合培養(yǎng)的第3d即進入對數(shù)生長期,且細胞的生長亦符合細胞的生長規(guī)律。2)壓應力刺激以25 g/cm2力值時的OD值最大,細胞的增殖活性最好,力值過小(5 g/cm2)時,則不能起到有效地刺激細胞的作用,力值過大(35 g/cm2)則會抑制細胞的增殖。④25g/cm2壓應力作用于PLGA-HGFs復合體6h后,與對照組相比,COL-I的mRNA和蛋白的表達出現(xiàn)短暫下調,隨后開始上調,且加力時間越長,其表達量越多。MMP-1的mRNA和蛋白的表達在加力6h呈短暫上調,隨后開始下調,且隨著加力時間的延長,其表達量越低。結論：①采用PLGA支架可以實現(xiàn)對HGFs的三維培養(yǎng)。②采用重物加載方式對PLGA-HGFs復合體進行應力刺激,成功構建了HGFs的力學加載模型,且適宜的壓應力刺激可促進HGFs的增殖,本實驗模型最適宜的應力大小為25g/cm2。③壓應力刺激可通過上調HGFs中COL-I的表達和下調MMP-1的表達,進而影響牙齦組織ECM的代謝。
【關鍵詞】：人牙齦成纖維細胞 PLGA支架 壓應力 Ⅰ型膠原 基質金屬蛋白酶-1
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R783.5
【目錄】：

• 個人簡歷3-6
• 英文縮略詞表6-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 第一部分 人牙齦成纖維細胞的體外培養(yǎng)及鑒定14-20
• 1 主要試劑與儀器14
• 2 實驗方法14-16
• 3 實驗結果16-18
• 4 討論18-20
• 5 結論20
• 第二部分 PLGA支架復合人牙齦成纖維細胞三維培養(yǎng)模型的建立20-35
• 1 主要試劑與儀器21
• 2 PLGA支架復合HGFs的三維培養(yǎng)21-24
• 3 實驗結果24-28
• 4 討論28-34
• 5 結論34-35
• 第三部分 壓應力對PLGA支架上人牙齦成纖維細胞COL-I和MMP-1表達的影響35-49
• 1 主要試劑與儀器35
• 2 實驗方法35-39
• 3 實驗結果39-44
• 4 討論44-48
• 5 結論48-49
• 全文總結49-50
• 參考文獻50-56
• 附圖56-57
• 綜述57-69
• 參考文獻64-69
• 臨床病例報告69-80
• 致謝80-81
• 碩士期間發(fā)表論文81

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