本文關(guān)鍵詞：壓應(yīng)力對(duì)PLGA支架上牙齦成纖維細(xì)胞COL-I和MMP-1表達(dá)的影響

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【摘要】：目的：①建立人牙齦成纖維細(xì)胞(HGFs)PLGA三維培養(yǎng)及力學(xué)加載模型,探討HGFs三維培養(yǎng)的方法及力學(xué)加載方式；②研究持續(xù)壓應(yīng)力對(duì)PLGA支架上HGFs COL-I和MMP-1的表達(dá)的影響,探討壓應(yīng)力作用下牙齦組織的改建機(jī)制。方法：①采用組織塊培養(yǎng)法對(duì)HGFs進(jìn)行原代培養(yǎng),取第4代HGFs鑒定細(xì)胞來源。②取第4代HGFs,制備1×105個(gè)/ml的混懸液接種于PLGA膜上,3天后對(duì)PLGA膜上的HGFs進(jìn)行熒光電鏡和掃描電鏡觀察,并采用CCK-8法對(duì)復(fù)合培養(yǎng)的HGFs進(jìn)行細(xì)胞增殖活性檢測。③取復(fù)合培養(yǎng)3天后的PLGA-HGFs復(fù)合體,采用重物加載方式分別對(duì)其施加大小為5、15、25、35g/cm2的壓應(yīng)力,以0g/cm2組作為對(duì)照,加力6h后,采用CCK-8法測定PLGA膜上HGFs的增殖活性,確定最佳加力力值。④取復(fù)合培養(yǎng)3天后的PLGA-HGFs復(fù)合體,對(duì)其施加以上探討出的最佳加力力值,分別作用6、24、48、72h,以未加力、培養(yǎng)相同時(shí)間作為對(duì)照,分別采用RT-qPCR和ELISA法檢測PLGA-HGFs復(fù)合體受力后COL-I、MMP-1 mRNA和蛋白的表達(dá)變化。結(jié)果：①培養(yǎng)10-14d后,可見成纖維樣細(xì)胞從組織塊邊緣爬出。細(xì)胞來源鑒定顯示該細(xì)胞為中胚層來源,證明所培養(yǎng)的細(xì)胞為HGFs。②熒光電鏡結(jié)果顯示,PLGA支架上有大量的HGFs密集生長,且同一視野中可觀察到不同清晰度的細(xì)胞存在,說明細(xì)胞是生長在不同的平面上。掃描電鏡結(jié)果顯示,HGFs在支架上貼附緊密,細(xì)胞呈現(xiàn)多角形,三維方向上伸展充分,并可見基質(zhì)的合成。③CCK-8結(jié)果顯示：1) HGFs在PLGA膜上復(fù)合培養(yǎng)的第3d即進(jìn)入對(duì)數(shù)生長期,且細(xì)胞的生長亦符合細(xì)胞的生長規(guī)律。2)壓應(yīng)力刺激以25 g/cm2力值時(shí)的OD值最大,細(xì)胞的增殖活性最好,力值過小(5 g/cm2)時(shí),則不能起到有效地刺激細(xì)胞的作用,力值過大(35 g/cm2)則會(huì)抑制細(xì)胞的增殖。④25g/cm2壓應(yīng)力作用于PLGA-HGFs復(fù)合體6h后,與對(duì)照組相比,COL-I的mRNA和蛋白的表達(dá)出現(xiàn)短暫下調(diào),隨后開始上調(diào),且加力時(shí)間越長,其表達(dá)量越多。MMP-1的mRNA和蛋白的表達(dá)在加力6h呈短暫上調(diào),隨后開始下調(diào),且隨著加力時(shí)間的延長,其表達(dá)量越低。結(jié)論：①采用PLGA支架可以實(shí)現(xiàn)對(duì)HGFs的三維培養(yǎng)。②采用重物加載方式對(duì)PLGA-HGFs復(fù)合體進(jìn)行應(yīng)力刺激,成功構(gòu)建了HGFs的力學(xué)加載模型,且適宜的壓應(yīng)力刺激可促進(jìn)HGFs的增殖,本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ妥钸m宜的應(yīng)力大小為25g/cm2。③壓應(yīng)力刺激可通過上調(diào)HGFs中COL-I的表達(dá)和下調(diào)MMP-1的表達(dá),進(jìn)而影響牙齦組織ECM的代謝。
【關(guān)鍵詞】：人牙齦成纖維細(xì)胞 PLGA支架 壓應(yīng)力 Ⅰ型膠原 基質(zhì)金屬蛋白酶-1
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R783.5
【目錄】：

• 個(gè)人簡歷3-6
• 英文縮略詞表6-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 第一部分 人牙齦成纖維細(xì)胞的體外培養(yǎng)及鑒定14-20
• 1 主要試劑與儀器14
• 2 實(shí)驗(yàn)方法14-16
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果16-18
• 4 討論18-20
• 5 結(jié)論20
• 第二部分 PLGA支架復(fù)合人牙齦成纖維細(xì)胞三維培養(yǎng)模型的建立20-35
• 1 主要試劑與儀器21
• 2 PLGA支架復(fù)合HGFs的三維培養(yǎng)21-24
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果24-28
• 4 討論28-34
• 5 結(jié)論34-35
• 第三部分 壓應(yīng)力對(duì)PLGA支架上人牙齦成纖維細(xì)胞COL-I和MMP-1表達(dá)的影響35-49
• 1 主要試劑與儀器35
• 2 實(shí)驗(yàn)方法35-39
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果39-44
• 4 討論44-48
• 5 結(jié)論48-49
• 全文總結(jié)49-50
• 參考文獻(xiàn)50-56
• 附圖56-57
• 綜述57-69
• 參考文獻(xiàn)64-69
• 臨床病例報(bào)告69-80
• 致謝80-81
• 碩士期間發(fā)表論文81

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