發(fā)布時(shí)間：2017-08-24 16:01

  本文關(guān)鍵詞：變異鏈球菌自誘導(dǎo)物2信號分子的體外合成與活性檢測

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【摘要】：目的利用分子生物學(xué)的相關(guān)技術(shù)體外合成具有良好生物學(xué)活性的自誘導(dǎo)物2(AI-2)信號分子,為進(jìn)一步研究S-核糖高半胱氨酸裂解酶(Lux S)/AI-2信號系統(tǒng)對于變異鏈球菌和口腔生物膜的致病性、耐藥性的調(diào)節(jié)機(jī)制奠定基礎(chǔ)。方法構(gòu)建穩(wěn)定高效的Lux S和S-腺苷高半胱氨酸核苷酶(Pfs)原核表達(dá)載體,異丙基β-D-1-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)表達(dá)目的蛋白,并進(jìn)行鎳柱層析分離純化與鑒定。利用純化表達(dá)的Lux S蛋白和Pfs蛋白體外合成AI-2信號分子,以哈維氏弧菌菌株BB170作為報(bào)告菌株,通過生物發(fā)光效應(yīng)檢測體外合成的變異鏈球菌AI-2信號分子的生物活性,并以此間接檢測Lux S蛋白和Pfs蛋白的生物學(xué)活性。結(jié)果體外合成的AI-2可誘導(dǎo)哈維氏弧菌菌株BB170強(qiáng)烈發(fā)光。以變異鏈球菌UA159標(biāo)準(zhǔn)株菌液中自然生成的AI-2為對照,體外合成AI-2誘導(dǎo)發(fā)光效果強(qiáng)于菌液。結(jié)論體外合成的AI-2具有良好的生物學(xué)活性,獲得了高效表達(dá)、可溶性的Lux S和Pfs重組蛋白。
【作者單位】： 解放軍第451醫(yī)院口腔科;
【關(guān)鍵詞】： 變異鏈球菌 密度感應(yīng)系統(tǒng) 自誘導(dǎo)物 S-核糖高半胱氨酸裂解酶蛋白
【分類號】：R780.2
【正文快照】： 群體感應(yīng)(quorum sensing,QS)是使用可溶性小分子在細(xì)胞間進(jìn)行信號傳遞,根據(jù)種群密度調(diào)節(jié)細(xì)胞生理行為的過程。自誘導(dǎo)物2(autoinducer-2,AI-2)介導(dǎo)的QS是唯一被革蘭氏陽性和陰性菌共用的QS系統(tǒng),AI-2合成酶S-核糖高半 胱氨酸裂解酶(S-ribosylhomocysteinase,Lux S)廣泛分布于

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本文編號：732189