本文關(guān)鍵詞：SD乳鼠髁突軟骨細(xì)胞和四肢軟骨細(xì)胞生物學(xué)特性比較實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：[目的]探討SD乳鼠髁突軟骨細(xì)胞(Mandibular Condylar Chondrocytes, MCC)和四肢關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的體外培養(yǎng)方法與生物學(xué)特性,MTT法觀察不同濃度外源性轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(transforming growth factor-β 2,TGF-β2)對(duì)兩種軟骨細(xì)胞的增殖作用,研究0.20ng/ml的TGF-β2對(duì)髁突軟骨細(xì)胞和四肢關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞PCNA和Ⅱ型膠原蛋白的mRNA表達(dá)差異。[方法]新生3天SD乳鼠10只,提取雙側(cè)髁突軟骨和四肢關(guān)節(jié)軟骨,聯(lián)合消化法獲取軟骨細(xì)胞,用15%FBS的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)。通過形態(tài)學(xué)、甲苯胺藍(lán)染色和Ⅱ型免疫組化鑒定細(xì)胞；傳代第2代時(shí),兩種軟骨細(xì)胞各分為三個(gè)組,分別加入不同濃度的TGF-β20.10ng/ml、 0.20ng/ml、0.40ng/ml, MTT法觀察不同濃度TGF-β2對(duì)兩種軟骨細(xì)胞的增殖分化作用；篩選合適濃度的TGF-β2,以12h、24h、48h作為監(jiān)測(cè)點(diǎn),MTT檢測(cè)兩種軟骨細(xì)胞各時(shí)間點(diǎn)增殖情況；RT-PCR檢測(cè)在兩種軟骨細(xì)胞中加入0.20ng/ml的TGF-β2作用12h后PCNA和Ⅱ型膠原蛋白的mRNA的表達(dá)差異。[結(jié)果]髁突軟骨細(xì)胞和四肢關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的原代細(xì)胞24-48h后開始貼壁,72-96h可形成單層,144h即可長(zhǎng)滿并傳代；傳代后,髁突軟骨細(xì)胞貼壁時(shí)間為4h,四肢關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞貼壁時(shí)間為6h；兩種軟骨的前3代細(xì)胞表型穩(wěn)定,有較強(qiáng)增殖能力；第4代細(xì)胞開始出現(xiàn)增殖能力減弱、形成單層時(shí)間變長(zhǎng)的現(xiàn)象；甲苯胺藍(lán)染色和免疫組織化學(xué)染色顯示兩種軟骨細(xì)胞均表達(dá)陽(yáng)性,四肢關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原蛋白陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)于髁突軟骨細(xì)胞；不同濃度的TGF-β2作用髁突軟骨細(xì)胞,0.2ng/ml、0.4ng/ml TGF-β2比0.1ng/ml有明顯增殖促進(jìn)作用,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,0.2ng/ml、0.4ng/ml TGF-β2對(duì)髁突軟骨細(xì)胞作用沒有明顯差異；0.2ng/ml的TGF-β2對(duì)四肢關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞是最合適的增殖濃度,而大于0.2ng/ml時(shí)則表現(xiàn)出部分的抑制作用；相同濃度TGF-β2作用下,髁突軟骨活細(xì)胞數(shù)達(dá)到峰值為12h左右,而四肢關(guān)節(jié)軟骨活細(xì)胞達(dá)到峰值在24h左右; 0.2ng/ml的TGF-β2對(duì)于兩種軟骨細(xì)胞中Ⅱ型膠原蛋白和PCNA中mRNA表達(dá)較對(duì)照組均增強(qiáng),其中髁突軟骨細(xì)胞的Ⅱ型膠原蛋白和PCNA中mRNA表達(dá)較四肢關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞表達(dá)弱。[結(jié)論]通過本實(shí)驗(yàn)研究,原代髁突軟骨細(xì)胞和四肢關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞在細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)特性上有差異,髁突軟骨細(xì)胞免疫組化染色表達(dá)Ⅱ型膠原較四肢關(guān)節(jié)軟骨表達(dá)弱；外源性TGF-β2對(duì)兩種軟骨細(xì)胞的增殖作用存在差異,相同濃度的TGF-β2對(duì)兩種軟骨活細(xì)胞數(shù)量達(dá)到峰值時(shí)間有差異；0.2ng/ml的外源性TGF-β2對(duì)兩種軟骨細(xì)胞的Ⅱ型膠原蛋白和PCNA的mRNA表達(dá)存在差異,在基因水平探討兩種細(xì)胞對(duì)于外源性的TGF-β2的刺激表達(dá)出不同的反應(yīng)；進(jìn)一步說明兩種軟骨細(xì)胞在生長(zhǎng)特性和對(duì)生長(zhǎng)因子反應(yīng)確實(shí)存在差異。
【關(guān)鍵詞】：髁突軟骨細(xì)胞 四肢關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞 外源性TGF-β_2
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R78;R68
【目錄】：

• 符號(hào)說明6-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 引言11-14
• 第一部分 對(duì)髁突軟骨細(xì)胞和四肢關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞體外培養(yǎng)的研究14-24
• 材料與方法14-17
• 結(jié)果17-22
• 討論22-23
• 結(jié)論23-24
• 第二部分 外源性TGF-β_2對(duì)髁突軟骨細(xì)胞和四肢關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞增殖作用的研究24-33
• 材料24-25
• 方法25-26
• 結(jié)果26-30
• 討論30-31
• 結(jié)論31-33
• 第三部分 外源性TGF-β_2作用下髁突軟骨細(xì)胞和四肢關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞PCNA和Ⅱ型膠原蛋白mRNA的表達(dá)33-43
• 材料與方法33-34
• 方法34-37
• 結(jié)果37-41
• 討論41-42
• 結(jié)論42-43
• 全文總結(jié)43-45
• 參考文獻(xiàn)45-50
• 文獻(xiàn)綜述50-57
• 參考文獻(xiàn)55-57
• 發(fā)表文章57-58
• 致謝58

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 史新立;胡X;孟祥提;;關(guān)節(jié)軟骨修復(fù)與相關(guān)細(xì)胞因子的作用[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2011年11期

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本文編號(hào)：729298